一种体外扩增调节性T细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种扩增细胞的方法，尤其是一种体外扩增调节性Ｔ细胞的方法，属于生物医学技术领域。本发明专利技术采用Ｒａｐａｍｙｃｉｎ联合ＴＧＦ－β在体外诱导人的Ｔ细胞成为具有免疫抑制功能的调节性Ｔ细胞，具有以下优点：１）数量充分；２）能抵抗向Ｔｈ１７细胞分化。克服了自然的调节性Ｔ细胞的诸多缺陷，在炎症性疾病的治疗，自身免疫性疾病治疗和器官移植的免疫排斥的预防方面有更大的治疗优势。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种体外扩增调节性Ｔ细胞的方法，包括以下步骤：　第一步、采集：采用肝素抗凝常规采血手段采集血液；　第二步、分离：从采集到的血液中离心分离出外周血淋巴细胞，再由外周血淋巴细胞分离得到原始ＣＤ４＋Ｔ细胞；　第三步、培养：将原始 ＣＤ４＋Ｔ细胞置于培养基中，在３７℃±５℃、５％±１％ＣＯ２的条件下，培养７－１０天；　第四步、诱导：对培养后的原始ＣＤ４＋Ｔ细胞进行刺激，并加入诱导剂培养原始ＣＤ４＋Ｔ细胞，直至细胞密度扩增至初始培养浓度的１０倍，停止诱导，即得调节 性Ｔ细胞；　第五步、扩增：由调节性Ｔ细胞中分选出ＣＤ４＋ＣＤ２７＋Ｔ细胞，移入含有１０ｎｇ／ｍＬ　ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎＣＤ３的细胞培养板中，加入扩增剂持续刺激，培养至细胞扩增达到１０倍，收集细胞，向其中每１０６个细胞加入１μｌ的ａｎ ｔｉ－ｈＣＤ４－ＰＥ抗体和每１０６个细胞加入１μｌ的ａｎｔｉ－ｈＣＤ２７－ＦＩＴＣ抗体，再分选得到扩增后的ＣＤ４＋ＣＤ２７＋调节性Ｔ细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕凌，张峰，王学浩，
申请(专利权)人：吕凌，张峰，王学浩，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]