一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法，包括壳体，壳体内设置有检测反应体系，检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物；检测过程没有使用昂贵的设备，只需简单的恒温水浴箱，设定在65℃即可；检测操作过程简单，检测速度快，60min即可完成检测；对实验室环境没有特别要求，只需普通的办公室或者码头一线都可以开展检测；检测灵敏度高，检测结果判定方便，只需要通过观察颜色就可以判定；检测成本低，易于推广和使用。易于推广和使用。易于推广和使用。

【技术实现步骤摘要】
一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及动物皮张中炭疽杆菌检疫
，尤其涉及一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法。

技术介绍

[0002]动物皮张中炭疽杆菌的检测，传统方法使用Ascoli试验方法。该方法存在两方面的缺点：一是检测时间过长，整个检测过程需要耗时2
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3天，二是检测灵敏度不足，容易造成漏检。近年来，炭疽杆菌的检测出现了实时荧光PCR法，该方法解决了检测灵敏度不足的问题，但是存在检测仪器昂贵、检测方法对操作者技术要求比较高，不易在基层单位普及的缺点。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0005]一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，包括壳体，所述壳体内设置有检测反应体系，所述检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；所述引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物。
[0006]优选的，所述上游外部引物为F3，其碱基序列为5
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；所述上游内部引物为FIP，其碱基序列为5
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；所述下游外部引物为B3，其碱基序列为5
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；所述下游内部引物为BIP，其碱基序列为5
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。
[0007]优选的，所述MIX预混液主要成分为dNTP、Ca2+、Mg2+等。
[0008]优选的，所述显色液为SYBR GreenⅠ荧光染料。
[0009]优选的，所述阴性对照物质为去离子双蒸水。
[0010]优选的，所述阳性对照物质为合成炭疽杆菌质粒。
[0011]优选的，所述上游外部引物和所述下游外部引物浓度均为10mol/L。
[0012]优选的，所述上游内部引物和所述下游内部引物浓度均为40mol/L。
[0013]优选的，所述MIX预混液浓度为2X，所述显色液浓度为10U/L。
[0014]一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测方法，包括以下步骤：
[0015]步骤S1,取适量的待检动物皮张于灭菌的烧杯中，加入少量蒸馏水(若为盐渍皮张，先用大量清水洗掉皮张上的盐份)，置高压灭菌锅中灭菌20min；
[0016]步骤S2,取出灭菌好的皮张，挑取有代表性部位的样品置于5mL均质管中；
[0017]步骤S3,加入3mL灭菌生理盐水，均质2min；
[0018]步骤S4,取1ml均质液煮沸，离心；
[0019]步骤S5,倒掉上清液，加入300μL灭菌生理盐水溶解残渣作为待测样；
[0020]步骤S6,将待测样加入检测反应体系中，置于65℃恒温水浴箱中反应40min；
[0021]步骤S7,取出检测盒观察颜色变化判定结果。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是:
[0023]本专利技术设计一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒及检测方法，检测过程没有使用昂贵的设备，只需简单的恒温水浴箱，设定在65℃即可；检测操作过程简单，检测速度快，60min即可完成检测；对实验室环境没有特别要求，只需普通的办公室或者码头一线都可以开展检测；检测灵敏度高，检测结果判定方便，只需要通过观察颜色就可以判定；检测成本低，易于推广和使用。
附图说明
[0024]图1为本专利技术提出的检测反应体系构成表；
[0025]图2为本专利技术提出的检测方法流程示意图。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]在本专利技术的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制；术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性；此外，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本专利技术中的具体含义。
[0028]参照图1至图2，一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，包括壳体，壳体内设置有检测反应体系，检测反应体系包括有MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物。
[0029]其中，所述上游外部引物为F3，其碱基序列为5
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；所述上游内部引物为FIP，其碱基序列为5
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；所述下游外部引物为B3，其碱基序列为5
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；所述下游内部引物为BIP，其碱基序列为5
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。
[0030]MIX预混液主要成分为dNTP、Ca2+、Mg2+等，显色液为SYBR GreenⅠ荧光染料，阴性对照物质为去离子双蒸水，阳性对照物质为合成炭疽杆菌质粒。
[0031]上游外部引物和下游外部引物浓度均为10mol/L，上游内部引物和下游内部引物浓度均为40mol/L，MIX预混液浓度为2X，显色液浓度为10U/L。
[0032]一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测方法，包括以下步骤：步骤S1,取适量的待检动物皮张于灭菌的烧杯中，加入少量蒸馏水(若为盐渍皮张，先用大量清水洗掉皮张上的盐份)，置高压灭菌锅中灭本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，其特征在于，包括壳体，所述壳体内设置有检测反应体系，所述检测反应体系包括MIX预混液、BstDNA聚合酶、引物混合液、显色液、阴性对照物质和阳性对照物质；所述引物混合液包括上游外部引物、上游内部引物、下游外部引物和下游内部引物。2.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，其特征在于，所述上游外部引物为F3，其碱基序列为5
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ACTAACTTGTCATAGTCAGTGTA
‑3’
；所述上游内部引物为FIP，其碱基序列为5
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ATTGTGGTTCTCTAAGCCGATGGGTGTAATGTGAAGTAACTCG
‑3’
；所述下游外部引物为B3，其碱基序列为5
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TGGGGTGGAATACTAAGGT
‑3’
；所述下游内部引物为BIP，其碱基序列为5
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CACGTAATTCCATTCTTACAGCGGAGCAGATAATACTTGGACGAA
‑3’
。3.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速检测盒，其特征在于，所述MIX预混液主要成分为dNTP、Ca2+、Mg2+等。4.根据权利要求1所述一种动物皮张中炭疽杆菌快速...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘辉，何伟荣，解瑞林，张欣，刘活，
申请(专利权)人：茂名海关综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：