用于癌症治疗的结合分子制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合于CD137及FAP的结合分子及其在药物中的用途、含有所述结合分子的药物组合物及使用所述结合分子作为治疗和/或预防癌症的药剂的方法。或预防癌症的药剂的方法。或预防癌症的药剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的结合分子
[0001]序列表
[0002]本申请含有序列表，已将其以ASCII格式以电子方式提交且以全文引用的方式并入本文中。该ASCII复本创建于2021年4月22日，命名为09
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0703
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WO
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1_SL.txt且大小为873,263字节。


[0003]本专利技术涉及结合于TNFR家族成员CD137(4
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1BB、TNFRSF9)及纤维母细胞活化蛋白(FAP)的结合分子、含有其的药物组合物及使用其作为治疗和/或预防癌症的药剂的方法。

技术介绍

[0004]癌症为一组通常基于异常细胞增殖及癌细胞可能侵入或扩散在整个身体中的疾病。其为严重疾病及全球死亡的主要原因。
[0005]已尝试使用多种治疗方法管理或在一些情况下治疗癌症，包括手术、化学疗法、放射线疗法及激素疗法。免疫疗法的最新进展已改变癌症的治疗前景。尽管如此，大部分患有局部晚期或转移性肿瘤的患者会死于其疾病，这证明对新颖治疗策略的实质性需要。
[0006]基于抗体的生物分子提供作为用于治疗癌症的强力治疗剂的可能性。抗体被设计成识别且结合于细胞表面上的特定蛋白质(其目标抗原)，且此类蛋白质仅可存在于特定癌细胞的表面上或免疫细胞上。这种结合可引起多种不同生物反应，视其目标抗原蛋白质的功能以及抗体本身的结构而定。
[0007]例如，一些抗体通过吸引免疫细胞至癌细胞或通过直接影响免疫系统本身的活性而触发免疫系统攻击及杀灭癌细胞。另一类型的基于抗体的疗法结合于癌细胞以阻止或减少细胞分裂，由此减缓或防止异常细胞增殖。其他类型抗体附接有药物或放射性粒子，因此将这些治疗剂递送至癌细胞本身。
[0008]FAP为二肽基肽酶(DPP)家族的成员(也称为纤维母细胞活化蛋白α、脯氨酰基内肽酶FAP、170kDa黑色素瘤膜结合明胶酶、整合膜丝氨酸蛋白酶)。其在一些胎儿间叶组织中短暂表达，且很少在FAP存在通常受限于子宫内膜细胞的健康成人组织中表达。FAP也在与活化基质相关的疾病，包括伤口愈合、类风湿性关节炎、骨关节炎、肝硬化及肺纤维化期间表达；通常在组织外伤或损伤之后在活化纤维母细胞中诱发。FAP还在所有种类人类上皮细胞肿瘤的肿瘤基质组织及多种骨骼及软组织肉瘤的恶性细胞中表达。FAP在超过90％的包括结肠直肠、卵巢、乳房、膀胱及肺的人类上皮细胞恶性病中表达。FAP优选在接近新的正在形成或已形成的血管的纤维母细胞中发现，且在肿瘤毛细管内皮与实际恶性上皮细胞及细胞簇之间形成特定细胞区室。
[0009]基质纤维母细胞在癌瘤的发展、生长及癌转移中起重要作用。FAP的表达概况表明FAP在肿瘤侵入健康组织及肿瘤形成及癌转移中起作用。FAP抑制剂，即能够降低或抑制FAP蛋白分解活性的物质，为适用于治疗所有种类肿瘤疾病的治疗剂。FAP抑制剂优选可用于治疗上皮来源肿瘤，例如乳房肿瘤、非小细胞肺癌、结肠直肠癌及软组织癌。
[0010]FAP抗体为本领域已知的。例如，西罗珠单抗(Sibrotuzumab)为人源化鼠类FAP，其在人源化之后结合于人类FAP，但在鼠类模型中未显示出可检测的与鼠类FAP的结合及肿瘤杀死。(WO1993005804,Cheng等人,Tumors and their microenvironments:tilling the soil.Commentary re:A.M.Scott等人,A Phase I dose
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escalation study of sibrotuzumab in patients with advanced or metastatic fibroblast activation protein
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positive cancer.Clin.Cancer Res.,9:1639
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1647)。至少15种靶向FAP的不同抗体正在商业临床前或临床研发中(参见例如US8999342Ludwig Institute for Cancer Research(mAb/临床前)；WO2016110598、US20170369592Mabimmune Diagnostics/Univ Zurich(mAb/临床前)；WO2015118030、US10137202，Oncomatryx(mAb结合物/临床前)；WO1993005804、WO1999057151、WO2001068708、WO2002083171、WO2007077173、US8568727西罗珠单抗，Boehringer Ingelheim(人源化鼠类FAP/在结肠直肠中PH1之后终止))。
[0011]CD137(4
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1BB、TNFRSF9、CDw137、T细胞抗原4
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1BB同源性、T细胞抗原ILA、CD_抗原CD137)也为肿瘤坏死因子受体超家族的成员。CD137在活化T淋巴球(T lymphocytes)上表达，且在配位体接合时赋予增强的T细胞功能。CD137的活化视受体寡聚而定。CD137在活化CD4+及CD8+T细胞、Treg、DC、单核细胞、肥大细胞及嗜酸性球上表达。CD137活化在CD8+T细胞活化及存活中发挥重要作用。其维持及加强效应子功能，而非起始效应子功能，且优先支持TH1细胞因子产生。在CD4+T细胞中，CD137刺激最初引起活化，随后引起活化诱发的细胞死亡，此在机制上表明CD137促效抗体为何在肿瘤免疫性以及自体免疫性中可具有治疗作用。
[0012]此外，CD137在例如树突状细胞及巨噬细胞的抗原呈递细胞上表达，且这些细胞类型上CD137的刺激可能诱发免疫活化，这可引起肿瘤引导的免疫性。CD137在免疫监视中发挥基本作用。CD137的缺乏引起基因剔除小鼠中T细胞免疫反应，例如细胞因子产生及细胞溶解T细胞活性减弱(Kwon,2002,Narazaki,2010)。在人类中，CD137缺乏与免疫失调、淋巴球性反应削弱及EBV相关淋巴瘤生成相关联(Somekh,2019)。
[0013]CD137促效抗体也显示在肿瘤环境中活化内皮细胞，引起ICAM
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1及VCAM
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1上调及T细胞募集改善。若干研究已证实用促效性CD137抗体治疗诱导肿瘤免疫性，开拓性工作追溯至1997年(Melero,1997)。
[0014]超过25种靶向CD137的药剂当前正在临床前或临床研发中，但此目标的进展缓慢。乌瑞鲁单抗(Urelumab，BMS
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66513)为一种由Bristol
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Myers Squibb研发的完全人类IgG4抗体，为2005年进入临床的第一CD137激动剂。其与派姆单抗(pembrolizumab)组合在黑色素瘤患者中显示有前景的功效，但若干试验由于肝脏毒性问题而停止。乌瑞鲁单抗的未来不清楚，已自BMS流水线丢弃，但大量BMS发起的试验仍然在进行中。另一主要CD137激动剂Pfi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性及四价结合分子，其具有两个特异性结合于CD137(4
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1BB配位体受体、4
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1BB)的抗原结合位点及两个特异性结合于纤维母细胞活化蛋白(FAP)的抗原结合位点，其中所述特异性结合于CD137(4
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1BB配位体受体)的抗原结合位点为免疫球蛋白分子的一部分且所述特异性结合于纤维母细胞活化蛋白(FAP)的抗原结合位点包含两个scFv。2.根据权利要求1所述的结合分子，其中两个或更多个scFv具有自N端至C端的VL
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VH取向。3.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述两个scFv中的每一个与Ig分子的重链的C端融合。4.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述Ig分子为IgG。5.根据权利要求1所述的结合分子，其中所述两个scFv通过长度介于4至20个氨基酸之间的肽接头与Ig分子融合。6.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述特异性结合于CD137(4
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1BB)的抗原结合位点为选自包含包括以下的重链及轻链可变区的组的免疫球蛋白分子的一部分：i)包含SEQ ID NO.:290(CDR1)、SEQ ID NO.:8(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:12(CDR1)、SEQ ID NO.:13(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或ii)包含SEQ ID NO.:295(CDR1)、SEQ ID NO.:18(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:22(CDR1)、SEQ ID NO.:23(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或iii)包含SEQ ID NO.:295(CDR1)、SEQ ID NO.:28(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:32(CDR1)、SEQ ID NO.:33(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或iv)包含SEQ ID NO.:295(CDR1)、SEQ ID NO.:38(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:42(CDR1)、SEQ ID NO.:43(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或v)包含SEQ ID NO.:295(CDR1)、SEQ ID NO.:48(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:52(CDR1)、SEQ ID NO.:53(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或vi)包含SEQ ID NO.:295(CDR1)、SEQ ID NO.:58(CDR2)及SEQ ID NO.:9(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:62(CDR1)、SEQ ID NO.:63(CDR2)及SEQ IDNO.:14(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或vii)包含SEQ ID NO.:308(CDR1)、SEQ ID NO.:68(CDR2)及SEQ ID NO.:69(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:72(CDR1)、SEQ ID NO.:73(CDR2)及SEQ ID NO.:74(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或viii)包含SEQ ID NO.:308(CDR1)、SEQ ID NO.:78(CDR2)及SEQ ID NO.:69(CDR3)的重链CDR及包含SEQ ID NO.:72(CDR1)、SEQ ID NO.:73(CDR2)及SEQ ID NO.:74(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或ix)包含SEQ ID NO.:308(CDR1)、SEQ ID NO.:88(CDR2)及SEQ ID NO.:69(CDR3)的重
链CDR及包含SEQ ID NO.:92(CDR1)、SEQ ID NO.:93(CDR2)及SEQ ID NO.:74(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或x)包含SEQ ID NO.:308(CDR1)、SEQ ID NO.:98(CDR2)及SEQ ID NO.:69(CDR3)的重链CDR及包含SEQ ID NO.:92(CDR1)、SEQ ID NO.:93(CDR2)及SEQ ID NO.:74(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR。7.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述特异性结合于CD137(4
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1BB)的抗原结合位点为选自包含以下的组的免疫球蛋白(Ig)分子的一部分：i)包含SEQ ID NO.:10的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:15的氨基酸序列的可变轻链；或ii)包含SEQ ID NO.:20的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:25的氨基酸序列的可变轻链；或iii)包含SEQ ID NO.:30的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:35的氨基酸序列的可变轻链；或iv)包含SEQ ID NO.:40的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:45的氨基酸序列的可变轻链；或v)包含SEQ ID NO.:50的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:55的氨基酸序列的可变轻链；或vi)包含SEQ ID NO.:60的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:65的氨基酸序列的可变轻链；或vii)包含SEQ ID NO.:70的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:75的氨基酸序列的可变轻链；或viii)包含SEQ ID NO.:80的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:85的氨基酸序列的可变轻链；或ix)包含SEQ ID NO.:90的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:95的氨基酸序列的可变轻链；或x)包含SEQ ID NO.:100的氨基酸序列的可变重链及包含SEQ ID NO.:105的氨基酸序列的可变轻链。8.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述特异性结合于纤维母细胞活化蛋白(FAP)的抗原结合位点选自包含以下的组的scFv：i)包含SEQ ID NO.:319(CDR1)、SEQ ID NO.:108(CDR2)及SEQ ID NO.:109(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:111(CDR1)、SEQ ID NO.:112(CDR2)及SEQ ID NO.:113(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或ii)包含SEQ ID NO.:319(CDR1)、SEQ ID NO.:117(CDR2)及SEQ ID NO.:109(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:120(CDR1)、SEQ ID NO.:112(CDR2)及SEQ ID NO.:113(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或iii)包含SEQ ID NO.:319(CDR1)、SEQ ID NO.:126(CDR2)及SEQ ID NO.:109(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:129(CDR1)、SEQ ID NO.:112(CDR2)及SEQ ID NO.:113(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或iv)包含SEQ ID NO.:328(CDR1)、SEQ ID NO.:135(CDR2)及SEQ ID NO.:136(CDR3)的
氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:138(CDR1)、SEQ ID NO.:139(CDR2)及SEQ ID NO.:140(CDR3)的氨基酸序列的轻链CDR；或v)包含SEQ ID NO.:333(CDR1)、SEQ ID NO.:144(CDR2)及SEQ ID NO.:145(CDR3)的氨基酸序列的重链CDR及包含SEQ ID NO.:138(CDR1)、SEQ ID NO.:13...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰国际有限公司，
类型：发明
国别省市：