用于癌症疾病免疫治疗的CXCL9及其变体制造技术

本发明专利技术提供了一种包含另外的氨基酸在对应野生型CXCL9的N

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症疾病免疫治疗的CXCL9及其变体
[0001]专利技术背景
[0002]虽然许多由还具有趋化因子受体的癌细胞产生的趋化因子(也具有它们的受体)明显地支持肿瘤生长并抑制抗癌免疫反应性，但CXCR3配体CXCL10被认为通过引发抗癌免疫应答来减弱肿瘤生长。CXCL10也可以直接抑制肿瘤生长。CXCR3是具有三个配体的趋化因子受体：CXCL9、CXCL10和CXCL11。不同的CXCR3配体的生物学功能可能不同。
[0003]若干研究示出，CXCL9和CXCL10，特别是由肿瘤或宿主细胞产生的CXCL10可以募集与肿瘤抑制相关的CXCR3+肿瘤浸润CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞。已经示出，CXCR3KO小鼠中抗PD
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1效力降低，并表明主要由肿瘤部位的CD103+树突状细胞(DC)产生的CXCL9与CD8+T细胞上的CXCR3之间的相互作用增强了抗PD
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1效力(Chow等人，Immunity 2019,50 1498
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1512e5)。
[0004]CXCL9在癌症疗法中的作用没有被研究。趋化因子，特别是CXCL9的体内稳定性非常有限。已经示出，稳定化的趋化因子(作为与Ig FC融合的融合蛋白)的产生导致体内半衰期延长(Barsheshet等人PNAS 2017)。
[0005]CXCL10和CXCL9的体内活性，特别是在肿瘤部位，受二肽基肽酶4(DPP4，也称为CD26)调节，其作用于位置2处的脯氨酸并诱导两个N
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末端氨基酸的裂解，产生也可以分别充当CXCL9和CXCL10的拮抗趋化因子的无功能的CXCL9或CXCL10，因为截短的蛋白可以抑制完整的趋化因子。
[0006]因此，DPP4的全身靶向可能有利于抑制癌症发展，但由于这种酶在调节不同生物功能(其中包括葡萄糖代谢)中的关键作用，可能会有严重的副作用。
[0007]存在开发作为抗癌药物的稳定和有效的修饰的CXCL9多肽的需要。此外，存在开发对DPP4裂解具有抗性的稳定化的和修饰的CXCL9的需要。
[0008]专利技术概述
[0009]根据一些实施方案，提供了有利的修饰的CXCL9多肽，与野生型(未修饰的)CXCL9相比，其包含一个或更多个点突变和/或插入。根据一些实施方案，本文公开的新的、非天然存在的、修饰的CXCL9是有利的，因为它稳定、易于产生，并表现出期望的生物活性，如本文进一步详述的。还提供了编码修饰的CXCL9多肽的核酸、制备修饰的CXCL9的方法、包含其的组合物及其在治疗各种医学状况，特别是癌症中的用途。
[0010]在一些实施方案中，提供了修饰的CXCL9多肽，其包含一个或更多个另外的氨基酸在如SEQ ID NO:1所表示的对应野生型CXCL9的N
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末端的插入。
[0011]在一些实施方案中，提供了修饰的CXCL9多肽，其包含另外的氨基酸在对应野生型CXCL9的N
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末端的插入。在一些实施方案中，另外的氨基酸是任何氨基酸。在一些实施方案中，另外的氨基酸是谷氨酰胺、天冬酰胺、焦谷氨酸、谷氨酸或脯氨酸。在一些实施方案中，野生型CXCL9是人类来源的。在一些实施方案中，修饰的CXCL9多肽包含如由SEQ ID NO:2
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4中的任何一种所表示的氨基酸序列。
[0012]在一些实施方案中，本文描述的修饰的CXCL9多肽与免疫球蛋白(Ig)分子或Ig分子的片段连接。在一些实施方案中，免疫球蛋白是由SEQ ID No:5所表示的IgG
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Fc:铰链
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ch2
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ch3。在一些实施方案中，本文描述的修饰的CXCL9多肽与免疫球蛋白(Ig)分子或Ig分子的片段连接，还包含在修饰的CXCL9与免疫球蛋白分子或其片段之间的接头。在一些实施方案中，免疫球蛋白或其片段是人类来源的。在一些实施方案中，接头包含一个或更多个甘氨酸氨基酸的链段(多G)或甘氨酸和丝氨酸氨基酸的链段(多GS)。在一些实施方案中，多GS是GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No:6)。
[0013]在一些实施方案中，修饰的CXCL9多肽能够与CXCR3受体结合。在一些实施方案中，修饰的CXCL9多肽能够诱导CD8+T细胞。
[0014]在一些实施方案中，提供了包含与免疫球蛋白分子或Ig分子的片段缀合的CXCL9多肽(可以是野生型或修饰的)的融合蛋白。在一些实施方案中，免疫球蛋白或其片段是IgG
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Fc:铰链
‑
ch2
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ch3。在一些实施方案中，CXCL9、免疫球蛋白分子或其片段是人类来源的。在一些实施方案中，融合蛋白还包含在CXCL9与免疫球蛋白或其片段之间的接头。接头可以是一个或更多个甘氨酸氨基酸的链段(多G)或甘氨酸和丝氨酸氨基酸的链段(多GS)。在一些实施方案中，多GS是GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No:6)。
[0015]在一些实施方案中，融合蛋白能够与CXCR3受体结合。在一些实施方案中，融合蛋白能够诱导CD8+T细胞。CXCL9可通过引发干扰素γ(IFN
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g)、肿瘤坏死因子α(TNFa)、颗粒酶
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B、穿孔素和白细胞介素2(IL
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2)的水平来诱导(增强)CD8+T细胞的活性。
[0016]在一些实施方案中，提供了一种治疗有相应需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗量的本专利技术的修饰的CXCL9多肽或融合蛋白或包含其的药物组合物。在一些实施方案中，提供了包含本专利技术的修饰的CXCL9多肽或融合蛋白和药学上可接受的运载体的药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物适用于在治疗癌症中使用。
[0017]在一些实施方案中，提供了编码本专利技术的修饰的CXCL9多肽或融合蛋白的核酸分子。在一些实施方案中，提供了包含本文描述的核酸分子的载体。在一些实施方案中，载体是表达载体，还包含一种或更多种调节序列。
[0018]在一些实施方案中，载体或核酸可用于治疗有相应需要的受试者的癌症。在一些实施方案中，载体或核酸可用于治疗有相应需要的受试者的癌症。在一些实施方案中，提供了一种治疗有相应需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗量的本专利技术的核酸分子或载体。在一些实施方案中，提供了包含本专利技术核酸分子的宿主细胞。在一些实施方案中，提供了用本专利技术的载体转化或转染的宿主细胞。在一些实施方案中，提供了包含本专利技术的修饰的CXCL9多肽或融合蛋白的宿主细胞。在一些实施方案中，提供了产生修饰的CXCL9多肽的方法，该方法包括：(i)在表达包含修饰的CXCL9的多肽的条件下培养包含本专利技术的核酸分子的宿主细胞；和(ii)从宿主细胞或从培养基中回收修饰的CXCL9多肽。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，以上描述的修饰的CXCL9多肽与免疫球蛋白或其片段连接。在本专利技术的一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种修饰的CXCL9多肽，所述修饰的CXCL9多肽包含另外的氨基酸在对应野生型CXCL9的N
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末端的插入。2.根据权利要求1所述的修饰的CXCL9多肽，所述修饰的CXCL9多肽具有SEQ ID NO:1所表示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，其中所述另外的氨基酸是谷氨酰胺、焦谷氨酸或谷氨酸、天冬酰胺或脯氨酸。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，其中所述野生型CXCL9是人类来源的。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，所述修饰的CXCL9多肽具有根据SEQ ID NO:2
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4所表示的氨基酸序列。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，其中所述修饰的CXCL9多肽与免疫球蛋白(Ig)分子或Ig分子的片段连接。7.根据权利要求6所述的修饰的CXCL9，其中所述免疫球蛋白是由SEQ ID.No.5所表示的IgG
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Fc:铰链
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ch2
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ch3。8.根据权利要求6或7中任一项所述的修饰的CXCL9，所述修饰的CXCL9还包含在所述修饰的CXCL9与所述免疫球蛋白分子或其片段之间的接头。9.根据权利要求6
‑
8中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，其中所述免疫球蛋白或其片段是人类来源的。10.根据权利要求8所述的修饰的CXCL9，其中所述接头包含一个或更多个甘氨酸氨基酸的链段(多G)或甘氨酸和丝氨酸氨基酸的链段(多GS)。11.根据权利要求9所述的修饰的CXCL9，其中所述多GS是GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No:6)。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，所述修饰的CXCL9多肽能够与CXCR3受体结合。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的修饰的CXCL9多肽，所述修饰的CXCL9多肽能够诱导CD8+T细胞。14.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含与免疫球蛋白分子或Ig分子的片段缀合的CXCL9多肽。15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白或其片段是IgG
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Fc:铰链
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ch2
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ch3。16.根据权利要求14
‑
15中任一项所述的融合蛋白，其中所述CXCL9、所述免疫球蛋白分子或其片段是人类来源的。17.根据权利要求14
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16中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白还包含在所述CXCL9与所述免疫球蛋白或其片段之间的接头。18.根据权利要求17所述的融合蛋白，其中所述接头包含一个或更多个甘氨酸氨基酸的链段(多G)或甘氨酸和丝氨酸氨基酸的链段(多GS)。19.根据权利要求18...

【专利技术属性】
技术研发人员：内森，
申请(专利权)人：技术研究及发展基金有限公司，
类型：发明
国别省市：