抗Calretinin蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种可以识别人Calretinin抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取Calretinin蛋白的1

【技术实现步骤摘要】
抗Calretinin蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]Calretinin(CR)，—种神经性钙结合蛋白，主要在中枢神经组织中有表达，特别是视网膜及感觉传导通路的神经元中。CR能与间皮细胞的CR抗原发生特异性抗原－抗体免疫反应，使其表达阳性。CR染色主要定位在细胞质和(或)细胞核，伴或不伴细胞膜染色。文献报道，间皮起源的肿瘤细胞和腺癌细胞CR染色不同，其差异有显著统计学意义。另有研究表明，CR在诊断恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的灵敏度为90.7％，与转移性腺癌(MAC)鉴别诊断的特异度为94.5％，阳性预测值及阴性预测值均为92.9％。由此可见，CR对MPM的诊断同时具备较高灵敏度和特异度，故CR可作为MPM的诊断指标，用于肺腺癌胸膜转移和恶性胸膜间皮瘤的鉴别诊断。

技术实现思路

[0003]专利技术人提供了一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。
[0004]进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。
[0005]进一步地，所述单克隆抗体特异性识别Calretinin蛋白。
[0006]进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG1κ亚型单克隆抗体。
[0007]进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO 21981的杂交瘤细胞株产生。
[0008]专利技术人又提供了一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含TRX蛋白标签、Calretinin蛋白片段及组氨酸蛋白标签。
[0009]进一步地，所述Calretinin蛋白片段为Calretinin蛋白的第1位至第271位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
[0010]专利技术人还提供了一株分泌抗Calretinin蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株2F5，所述细胞株已于2021年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 21981，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0011]专利技术人还提供了一种Calretinin蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂含有重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的抗Calretinin蛋白的单克隆抗体为其有效成分。
[0012]进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。
[0013]区别于现有技术，本专利技术所产生的有益技术效果为：上述技术方案选取Calretinin蛋白1
‑
271位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含TRX蛋白标签、Calretinin蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗Calretinin蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株2F5,以及由该细胞株所分泌的抗Calretinin蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达Calretinin蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
附图说明
[0014]图1为实施例1融合组氨酸标签的重组Calretinin蛋白表达结果胶图，其中M表示Marker；1、2为上清液样本；3为对照样本。
[0015]图2为间皮瘤免疫组化染色结果对比图；其中左为2F5分泌的Calretinin，右为市售Calretinin。
具体实施方式
[0016]为详细说明本申请可能的应用场景，技术原理，可实施的具体方案，能实现目的与效果等，以下结合所列举的具体实施例并配合附图详予说明。本文所记载的实施例仅用于更加清楚地说明本申请的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本申请的保护范围。
[0017]在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中各个位置出现的“实施例”一词并不一定指代相同的实施例，亦不特别限定其与其它实施例之间的独立性或关联性。原则上，在本申请中，只要不存在技术矛盾或冲突，各实施例中所提到的各项技术特征均可以以任意方式进行组合，以形成相应的可实施的技术方案。
[0018]除非另有定义，本文所使用的技术术语的含义与本申请所属
的技术人员通常理解的含义相同；本文中对相关术语的使用只是为了描述具体的实施例，而不是旨在限制本申请。
[0019]在本申请的描述中，用语“和/或”是一种用于描述对象之间逻辑关系的表述，表示可以存在三种关系，例如A和/或B，表示：存在A，存在B，以及同时存在A和B这三种情况。另外，本文中字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的逻辑关系。
[0020]在本申请中，诸如“第一”和“第二”之类的用语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何实际的数量、主次或顺序等关系。
[0021]在没有更多限制的情况下，在本申请中，语句中所使用的“包括”、“包含”、“具有”或者其他类似的表述，意在涵盖非排他性的包含，这些表述并不排除在包括所述要素的过程、方法或者产品中还可以存在另外的要素，从而使得包括一系列要素的过程、方法或者产品中不仅可以包括那些限定的要素，而且还可以包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法或者产品所固有的要素。
[0022]与《审查指南》中的理解相同，在本申请中，“大于”、“小于”、“超过”等表述理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等表述理解为包括本数。此外，在本申请实施例的描述中“多个”的含义是两个以上(包括两个)，与之类似的与“多”相关的表述亦做此类理解，例如“多组”、“多次”等，除非另有明确具体的限定。
[0023]实施例1重组Calretinin蛋白片段的制备
[0024]一、基因优化与合成
[0025]按照Uniprot数据库中登录号为P22676的Calretinin蛋白质序列，选择1
‑
271位氨基酸的蛋白片段，直接优化成适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段。在PCR的过程中在基因5
’
和3
’
端分别加入EcoRI和XhoI酶切位点。
[0026]PCR产物经琼脂糖凝胶电本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的编码DNA序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的编码DNA序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别Calretinin蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为小鼠IgG1κ亚型单克隆抗体。5.一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体，由保藏号为CGMCCNO21981的杂交瘤细胞株产生。6.一种抗Calretinin蛋白的单克隆抗体的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴楠楠，杨清海，陈惠玲，程本亮，王小亚，
申请(专利权)人：福州迈新生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：