抗Mucin6蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用技术

技术编号：43588986 阅读：31 留言：0更新日期：2024-12-06 17:53

本发明专利技术涉及一种可以识别人Mucin6抗原的单克隆抗体、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取Mucin6蛋白的1950‑2050位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含Mucin6蛋白片段及组氨酸标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得小鼠杂交瘤细胞株37D10以及由该细胞株所分泌的抗Mucin6蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达Mucin6蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗mucin6蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、黏蛋白6(mucin6，muc6)是分泌型黏蛋白的一种，其编码基因定位于11号染色体短臂1区5带，编码含有2439个氨基酸残基的蛋白，其中包括富含半胱氨酸的n端结构域，含有丰富的丝氨酸，苏氨酸，脯氨酸的高糖基化结构域以及c端胱氨酸结，这对muc6形成寡聚物具有重要的作用。生理情况下，黏蛋白muc6主要在正常的胃黏膜组织中表达，起到润滑和保护胃黏膜的作用。但随着研究的深入，发现muc6在多种肿瘤中异常表达，并在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要的作用。muc6除黏蛋白均存在的蛋白骨架即黏液核心肽以及大量连接于核心肽上的糖链外，其结构上通常还附着含α1,4n-乙酰葡糖胺末端残基(α1,4-linkedn-acetylglucosamineresidues，αglcnac)的o-聚糖，这种特殊的结构在muc6行使功能的过程中发挥了重要的作用，随着muc6在肿瘤病理进程中重要性的凸显，其在肿瘤生物学行为中的作用也得到了进一步的阐示。这些都为...

【技术保护点】

1.一种抗Mucin6蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为37D10。

3.一种抗Mucin6蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含Mucin6蛋白片段及HIS蛋白标签。