【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗topoⅱα蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、topoⅱα，即拓扑异构酶ⅱα，是一种在dna复制、转录和修复过程中发挥关键作用的酶。dna拓扑异构酶是生物体内广泛存在的一类必需核酶，能够改变dna空间结构状态，而又不引起其化学结构发生改变的复杂酶系。拓扑异构酶(topo)分为i、ⅱ类，人类的topoⅱ有两种同工酶，分别为topoⅱα和topoⅱβ，其中topoⅱα与细胞耐药关系密切，topoⅱα位于17号染色体上，分子量为170kd。
2、topoⅱα在多种肿瘤组织中的表达水平显著高于正常组织，这一特性使其成为肿瘤诊断与预后评估的重要标志物之一。topoⅱα在乳腺癌组织中的阳性表达率显著高于正常乳腺组织。特别是在乳腺浸润性导管癌中，topoⅱα的阳性表达率更高，且与淋巴结转移及her-2、ki-67的高表达相关。在胃癌组织中，topoⅱα同样呈现高表达状态，且其表达水平与胃癌组织的分化程度有关。低分化型胃癌中topoⅱα的阳性率显著高于高、中分化型胃癌。除了乳腺癌和胃癌外，topoⅱα在其他类型的肿瘤，如肺癌、结直肠癌等中也有不同程度的表达。topoⅱα的表达水平与肿瘤的恶性程度、转移潜能及预后密切相关。因此，检测topoⅱα的表达水平可以为肿瘤的预后评估提供重要依据。例如，在乳腺癌中，topoⅱα的高表达往往预示着较差的预后。
技术实现思路
1、专利技术人提供了一种抗topoⅱα蛋白的单克隆抗体，所述单克隆
2、进一步的，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为25f11。
3、专利技术人又提供了一种抗topoⅱα蛋白单克隆抗体的制备方法，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。
4、进一步的，所述重组蛋白包含topoⅱα蛋白片段及his蛋白标签。
5、进一步的，所述topoⅱα蛋白片段为1301-1531位点的片段，其为seq id no.3所示的氨基酸序列。
6、进一步的，重组过程中选用的质粒载体为pet30a。
7、专利技术人还提供一种topoⅱα蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂含有上述抗topoⅱα蛋白单克隆抗体为其有效成分。
8、进一步的，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。
9、区别于现有技术，本专利技术所产生的有益技术效果为：上述技术方案选取topoⅱα蛋白位1301-1531位点氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌bl21(de3)表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含topoⅱα蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗topoⅱα蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株25f11,以及该细胞株所分泌的抗topoⅱα蛋白单克隆抗体；。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达topoⅱα蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种抗TopoⅡα蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO.2所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为25F11。
3.一种抗TopoⅡα蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含TopoⅡα蛋白片段及HIS蛋白标签。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述TopoⅡα蛋白片段为1301-1531位点的片段，其为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，重组过程中选用的质粒载体为pET30a。
7.一种TopoⅡα蛋白免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测试剂含有权利要求1所述抗TopoⅡα蛋白单克隆抗体为其有效成分。
8.根据权利要
...【技术特征摘要】
1.一种抗topoⅱα蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seqid no.2所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为鼠单克隆抗体，克隆号为25f11。
3.一种抗topoⅱα蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含topoⅱα蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈倩，杨清海，陈惠玲，程本亮，高惠然，
申请(专利权)人：福州迈新生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。