RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用制造技术

本发明专利技术公开了RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，属于生物医药领域。应用具体体现在：抑阻RACGAP1的物质在制备恶性肿瘤放射增敏剂中的应用，或者在制备用于增加肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用；所述抑阻RACGAP1的物质为抑制RACGAP1表达或者阻断RACGAP1功能作用的物质中的一种。本发明专利技术实施例发现敲减RACGAP1可增强人胰腺癌、食管癌、结直肠癌细胞放射敏感性。从而证实，抑制RACGAP1表达或者阻断RACGAP1功能作用的物质在制备恶性肿瘤放射增敏剂中应用，以及在制备用于增加肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用。肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用。肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用。

【技术实现步骤摘要】
RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用。

技术介绍

[0002]RHO家族的小GTPases(RHO GTPases)是RAS超家族的细胞内信号分子。在生理条件下，这些蛋白的活性受到三种不同类型的调控分子的严格控制:鸟嘌呤核苷酸交换因子(Guanine nucleotide exchange factors,GEFs)、GTPase激活蛋白(GTPase
‑
activating proteins,GAPs)和鸟嘌呤核苷酸解离抑制剂(Guanine nucleotide dissociation inhibitors,GDIs)。RACGAP1(Rac GTPase activated Protein 1)属于一种RHO GAPs。它调节RHO GTPase从鸟嘌呤三磷酸结合到鸟嘌呤二磷酸结合形态的转化。RACGAP1参与了包括胞质分裂、分化和迁移在内的各种细胞过程，并通过形成中央纺锤蛋白复合体和介导肌动球蛋白收缩环组装所需的rho依赖信号传导来控制胞质分裂。RACGAP1磷酸化是有丝分裂过程中发挥其调节作用的重要事件。有丝分裂激酶Aurora B(AURKB)使RACGAP1在GAP结构域的Ser387位点磷酸化，这一过程被认为可以将RACGAP1转化为一个向RhoA转化的活性GAP，并且在介导细胞分裂中至关重要。目前研究发现其在乳腺癌、肝细胞癌、胃癌、食管鳞状细胞癌、黑色素瘤、高级别脑膜瘤、前列腺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中表达水平升高，促进肿瘤发生发展，与预后不良有关。
[0003]目前关于RACGAP1在恶性肿瘤的放射抵抗中的作用研究尚未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，旨在解决恶性肿瘤放射抵抗的问题。
[0005]本专利技术的目的通过如下技术方案实现：RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，具体体现在，抑阻RACGAP1的物质在制备恶性肿瘤放射增敏剂中的应用，或者在制备用于增加肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用；
[0006]所述抑阻RACGAP1的物质为抑制RACGAP1表达或者阻断RACGAP1功能作用的物质中的一种。
[0007]所述抑制RACGAP1表达的物质为RACGAP1的siRNA或RACGAP1的shRNA；所述RACGAP1的siRNA的序列(正义链)为：5
’‑
GCGAAGUGCUCUGGAUGUU
‑3’
。
[0008]所述恶性肿瘤为人胰腺癌、食管癌、结直肠癌中的一种或多种。
[0009]所述肿瘤细胞人胰腺癌细胞、食管癌细胞、或结直肠癌细胞中的一种或多种。进一步具体的，所述肿瘤细胞为人胰腺癌细胞株PANC
‑
1、食管癌细胞株KYSE150、结直肠癌细胞株HCT
‑
8中的一种。
[0010]本专利技术的技术方案与现有技术相比具有如下有益效果：
[0011]本专利技术实施例发现敲减RACGAP1可增强人胰腺癌、食管癌、结直肠癌细胞放射敏感
性。具体为：在人胰腺癌细胞株PANC
‑
1、食管癌细胞株KYSE150、结直肠癌细胞株HCT
‑
8中利用siRNA干扰技术成功敲低RACGAP1的表达水平后，细胞株受照射后的细胞的生长曲线受到明显抑制，且平板克隆形成能力受到显著抑制；从而，抑制RACGAP1表达或者阻断RACGAP1功能作用的物质可在制备恶性肿瘤放射增敏剂中应用，以及在制备用于增加肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用。
附图说明
[0012]图1为人胰腺癌细胞株PANC
‑
1经过siRACGAP1敲低后及不同剂量X线照射后的体外功能实验结果图。其中：(A)利用siRNA干扰技术成功敲低RACGAP1的mRNA及蛋白水平表达结果图；(B)细胞株接受4Gy、8Gy X线照射后cck
‑
8实验检测细胞活力的结果图；(C)平板克隆形成实验显示细胞株接受X线照射后的平板克隆形成能力及其统计的结果图。
[0013]图2为人食管鳞状细胞癌株KYSE150经过siRACGAP1敲低后及不同剂量X线照射后的体外功能实验结果图。其中：(A)利用siRNA干扰技术成功敲低RACGAP1的mRNA及蛋白水平表达结果图；(B)细胞株接受4Gy、8Gy X线照射后cck
‑
8实验检测细胞活力的结果图；(C)平板克隆形成实验显示细胞株接受X线照射后的平板克隆形成能力及其统计的结果图。
[0014]图3为人结直肠腺癌细胞株HCT
‑
8经过siRACGAP1敲低后及不同剂量X线照射后的体外功能实验结果图。(A)利用siRNA干扰技术成功敲低RACGAP1的mRNA及蛋白水平表达结果图；(B)细胞株接受4Gy、8Gy X线照射后cck
‑
8实验检测细胞活性的结果图；(C)平板克隆形成实验显示细胞株接受X线照射后的平板克隆形成能力及其统计的结果图。
具体实施方式
[0015]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。
[0016]实施例一：敲减RACGAP1基因
[0017]S1、分别将人胰腺癌细胞株PANC
‑
1、食管癌细胞株KYSE150、结直肠癌细胞株HCT
‑
8铺于T25细胞培养瓶，置于37℃、5％CO2培养箱生长，所用培养基为补充10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的完全培养基，待细胞汇合度约50％时进行转染实验；
[0018]S2、将100nM RACGAP1 siRNA(小干扰RNA，序列如SEQ ID NO：1所示)和阴性对照(锐博生物，广州)分别与脂质体转染试剂混匀，静置10分钟；将培养基更换为opti
‑
MEM培养基，把质粒溶液逐滴加入培养皿，孵育48小时后进行后续实验。
[0019]实施例二：检测细胞放射敏感性
[0020](1)分别以单次4Gy、8Gy X线照射RACGAP1敲减及对照细胞，利用cck
‑
8实验观察细胞的生长曲线；
[0021](2)以单次0,2,4,6,8,10Gy X线照射RACGAP1敲减及对照细胞，培养14天后计算平板克隆形成数，绘制细胞存活分数曲线。
[0022]实验结果显示：<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，其特征在于：抑阻RACGAP1的物质在制备恶性肿瘤放射增敏剂中的应用，或者在制备用于增加肿瘤细胞放射敏感性的产品中的应用；所述抑阻RACGAP1的物质为抑制RACGAP1表达或者阻断RACGAP1功能作用的物质中的一种。2.根据权利要求1所述的RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，其特征在于：所述抑制RACGAP1表达的物质为RACGAP1的siRNA或RACGAP1的shRNA。3.根据权利要求2所述的RACGAP1在调节恶性肿瘤放射敏感性中的应用，其特征在于：所述RACGAP1的siRNA序列如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱春燕，
申请(专利权)人：邱春燕，
类型：发明
国别省市：