一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用。该填料制备方法包括以下步骤：将预先配置的分散剂水溶液和交联剂、致孔剂、引发剂混合液加入到反应釜中，升温至45～55℃聚合1～4小时，形成聚合物微球；继续滴加引发剂、功能单体和模板分子混合液，升温至70～85℃，反应得到产物微球；再用刻蚀的方法除去部分模板分子，形成的特异性空穴对氨基糖苷类物质有很好的选择性，同时残留的部分壳聚糖分子对于基质中常见的干扰物磷脂有一定的吸附作用，去磷脂率高达89.62％，可提高检测灵敏度，降低磷脂对昂贵的色谱仪器的损害。降低磷脂对昂贵的色谱仪器的损害。降低磷脂对昂贵的色谱仪器的损害。

【技术实现步骤摘要】
一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及固相萃取柱材料的制备领域，具体涉及一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]氨基糖苷类抗生素(aminoglycosides,AGs)具有广谱抗菌特性，但其具有明显的副作用，比如神经肌肉传导阻滞，肠道功能损害以及耳毒性、肾毒性等，并且会在生物组织中富集，残留时间较长。AGs的主要结构包括氨基糖和1,3－二氨基肌醇，二者通过苷键连接，由于1,3－二氨基肌醇具有碱性多元环己醇结构，AGs通常具有较强的碱性和极性，易溶于水且与样品基质结合紧密，样品提取后净化难度大，现有的文献方法多采用固相萃取技术，常用的有C18、HLB和WCX等通用型固相萃取柱，但其专属净化效果不强，样品基质干扰严重，导致方法灵敏度差，回收率不稳定。
[0003]相比于传统固相萃取技术，免疫亲和柱净化和分子印迹聚合物固相萃取吸附剂对氨基糖苷的提取更具优势。氨基糖苷免疫亲和柱净化是以氨基糖苷类抗生素多克隆抗体为配基制备IAC，通过抗原抗体之间特异性的分子识别而建立的分离萃取技术，具有特异性好、净化彻底和样品富集效率高等优点。
[0004]专利文献CN108479113A公开了一种氨基糖苷类抗生素免疫亲和柱的制备方法，将环氧氯丙烷活化后的琼脂糖凝胶为载体，偶联上基因重组蛋白G，再连接氨基糖苷类抗生素抗体，最后用交联剂进行交联，得到抗体
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蛋白G
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sepharose填料，整个操作步骤繁琐，不适用于批量生产的需求，且免疫亲和柱多是单一型柱，即一次只能测定一种药物含量，不具有普遍适用性。
[0005]此外应用较多的是氨基糖苷分子印迹聚合物固相萃取吸附剂，以氨基糖苷类抗生素为模板分子，对具有氨基糖苷类似结构的目标化合物可进行选择性吸附。田一方等采用沉淀聚合法制备了阿米卡星印迹微球，对多种氨基糖苷目标物有一定的吸附效果，但是需要对模板剂进行抽提，脱除模板剂，操作较繁琐，制备的微球粒径在0.3～0.5微米，粒径过小不适用于固相萃取小柱的前处理中(田一方等.阿米卡星印迹微球的制备及其性能[J].河北大学学报(自然科学版),2015,35(03):258
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264)。
[0006]中国专利文献CN109908874B公开了一种新型MoS2QDs@MIPs分子印迹聚合物的制备方法，先制备量子点MoS2QDs，再通过将阿米卡星嵌入到二氧化硅壳中包裹在MoS2QDs核上得到量子点复合物，最后将量子点复合物中的阿米卡星洗脱下来，制备出阿米卡星空间印迹位点的分子印迹聚合物MoS2QDs@MIPs。此种方式步骤繁琐，且仅对阿米卡星有选择性吸附，制备的聚合物粒径在15
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50nm之间，不适用于固相萃取柱。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法及其应用，填料制备过程简单，产品稳定性、重现性好；可以起到对目标物富集和磷脂除杂的双重作用，
对于兽残检测中的氨基糖苷类物质的富集与分离有着意想不到的效果。
[0008]本专利技术的技术方案是：提供一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法，包括如下步骤：S1：将分散剂加入水中搅拌配置成第一溶液；S2：将交联剂、致孔剂和引发剂混合后，用超声分散配置成第二溶液；S3：将第一溶液加入到反应釜中搅拌，再加入第二溶液，升温至45～55℃聚合1～4小时，形成聚合物微球；S4：继续滴加引发剂、功能单体和模板分子的混合液，升温至70～85℃，反应6～15小时，得到聚合产物；S5：经过离心、洗涤、干燥，制备得到第一产物，将第一产物用盐酸溶液进行刻蚀，得到第二产物；S6：对第二产物冲洗、干燥、筛分后即可制得氨基糖苷专用固相萃取柱填料。
[0009]进一步地，所述分散剂为非离子型聚丙烯酰胺、脂肪酸聚乙二醇酯和乙二醇中的任一种，所述分散剂与水的质量比为1：100～350，所述分散剂与交联剂的质量比为1～10：95。
[0010]进一步地，所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸烯丙酯的混合物，所述三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸烯丙酯的质量比为1～3：10。
[0011]进一步地，所述致孔剂为链状聚苯乙烯、聚丙烯酸酯中的任一种，所述致孔剂与交联剂的质量比为2～8：10。
[0012]进一步地，所述功能单体为反
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乙烯基环己基甲酸，所述功能单体与交联剂的质量比为1～2.5：10。
[0013]进一步地，所述S2、S4步骤中引发剂为过氧化特戊酸叔丁酯、偶氮二异庚腈中的任一种，所述S2、S4步骤中每步加入的引发剂与交联剂的质量比为0.01～0.05：1。
[0014]进一步地，所述模板分子为低分子量水溶性壳聚糖，分子量为1～5万道尔，所述壳聚糖与交联剂的质量比为0.8～4：10；所述盐酸溶液浓度为1.3～5.0mol/L，刻蚀时间为0.5～4小时。
[0015]进一步地，所述步骤S5先用四氢呋喃作为洗涤溶剂进行洗涤，再用甲醇：水混合溶液作为洗涤溶剂继续洗涤，所述甲醇：水的体积比为7：3，两次洗涤溶剂的总用量与交联剂的体积质量比为2～10:1。
[0016]进一步地，所述填料的比表面积为450m2/g～650m2/g，孔径为31～103埃，聚合物微球粒径在55～75μm之间。
[0017]本专利技术制得的氨基糖苷专用固相萃取柱填料可应用于兽残中多种氨基糖苷类物质的富集和磷脂吸附。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0019](1)本专利技术制备过程简单，工艺路线短，易于大批量生产。
[0020](2)本专利技术选用的模板分子壳聚糖，价格低廉，无毒性，且生物降解性好，是一种环境友好型原料；此外壳聚糖具有的天然碱性多糖结构与氨基糖苷类目标物类似，可起到模板分子的作用；经盐酸部分刻蚀后，留下的特异性空穴与氨基糖苷类目标物有很好的适配性，可提高聚合物微球对氨基糖苷类目标物的选择性。
[0021](3)本专利技术中对模板分子为部分去除，残留在微球表面的壳聚糖可以吸附基质中的磷脂，防止洗脱液中磷脂过多，干扰检测灵敏度，可提高目标物的回收率。同时降低进样分析时对色谱柱、进样口造成的污染，减小对色谱仪器的损害。
附图说明
[0022]图1为本专利技术制备的氨基糖苷专用固相萃取柱填料的扫描电镜图；
[0023]图2为本专利技术实施例1制备得到的氨基糖苷专用固相萃取柱填料前处理后的10种氨基糖苷类抗生素的峰面积液相色谱图；
[0024]图3本专利技术空白样品中的总磷脂LC
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MS谱图；
[0025]图4本专利技术实施例3制备的氨基糖苷专用固相萃取柱填料处理后的总磷脂LC
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MS谱图。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述，但不应理解为是对本专利技术的限制。
[0027]壳聚糖是一种具有良好生物相容性、来源广本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氨基糖苷专用固相萃取柱填料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：将分散剂加入水中搅拌配置成第一溶液；S2：将交联剂、致孔剂和引发剂混合后，用超声分散配置成第二溶液；S3：将第一溶液加入到反应釜中搅拌，再加入第二溶液，升温至45～55℃聚合1～4小时，形成聚合物微球；S4：继续滴加引发剂、功能单体和模板分子的混合液，升温至70～85℃，反应6～15小时，得到聚合产物；S5：经过离心、洗涤、干燥，制备得到第一产物，将第一产物用盐酸溶液进行部分刻蚀，得到第二产物；S6：对第二产物冲洗、干燥、筛分后即可制得氨基糖苷专用固相萃取柱填料。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述分散剂为非离子型聚丙烯酰胺、脂肪酸聚乙二醇酯和乙二醇中的任一种，所述分散剂与水的质量比为1：100～350，所述分散剂与交联剂的质量比为1～10：95。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸烯丙酯的混合物，所述三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸烯丙酯的质量比为1～3：10。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述致孔剂为链状聚苯乙烯、聚丙烯酸酯中的任一种，所述致孔剂与交联剂的质量比为2～8：10。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晨，刘嘉权，杨振，徐增睿，陈武炼，
申请(专利权)人：上海安谱实验科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：