【技术实现步骤摘要】
同步制备D
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阿洛酮糖和D
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阿洛酮糖3
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差向异构酶的方法及其应用
[0001]本专利技术涉及微生物发酵领域,具体涉及一种同步制备D
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阿洛酮糖和D
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阿洛酮糖3
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差向异构酶的方法及其应用。
技术介绍
[0002]D
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阿洛酮糖是D
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果糖在C
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3位的差向异构体,属于自然界中存在量较少的稀有单糖。阿洛酮糖的口感与蔗糖类似,且加工和质构性能等也与蔗糖相差无几。近年来不断有研究表明,阿洛酮糖在抗氧化、控制血糖水平、预防肥胖等方面具有良好的效果,是最具潜力的蔗糖替代品之一。
[0003]然而,D
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阿洛酮糖的化学合成较为困难,过程中副产品较多,而且对于食品而言,化学合成生产的安全性也难以保证。因此,目前D
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阿洛酮糖主要采用生物转化的方式进行制备,先收集由微生物表达载体分泌的D
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阿洛酮糖3
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差向异构酶(DPEase),然后再利用DPEase催化转化D
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果糖获得D
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阿洛酮糖。因此,对DPEase高效表达的研究是目前阿洛酮糖生产过程中研究热点。例如,江南大学建立了不同梭菌来源的DPEase菌株,并对菌株构建和表达出的酶的催化效果进行了深入研究。然而,这种先进行DPEase生产,再进行D
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阿洛酮糖转化的生产工艺较长,其中还 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同步制备D
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阿洛酮糖和D
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阿洛酮糖3
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差向异构酶的方法,其特征在于,所述方法包括将工程菌接种至培养基中进行培养,获得培养液,其中,所述培养基中的碳源既提供工程菌生长代谢所需的糖类物质,同时也提供可供D
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阿洛酮糖3
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差向异构酶进行酶促反应获得D
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阿洛酮糖的酶促反应底物。2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述培养基包含碳源、氮源、无机盐和水,优选所述碳源中含有果糖和工程菌生长代谢所需的糖类物质,更优选在所述培养基中,由所述碳源中的糖类物质提供的C元素含量为4
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16g/L;优选地,所述碳源为蔗糖和/或葡萄糖与果糖的混合物;优选地,所述碳源为糖蜜;优选地,所述氮源的含量以N元素计为2
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5g/L;优选地,所述无机盐用于提供K、P、S和Mg中的至少一种;更优选地,所述糖蜜中含有总糖45
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55重量%,粗蛋白2
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3重量%,可溶性胶体3
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10重量%,灰分10
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15重量%,矿物质3
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10重量%,生物素2.5
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3.5重量
‰
;更优选地,所述氮源选自酵母粉、蛋白胨、玉米浆、棉籽蛋白、鱼膏和豆粕水解液中的至少一种;更优选地,在所述培养基中,所述无机盐提供K 5.5
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8g/L,P 3
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5g/L,S 0.3
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0.8g/L,Mg 0.1
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0.3g/L;更优选地,所述无机盐包括K2HPO4、KH2PO4、(NH4)2SO4和MgSO4中的至少一种。3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述工程菌选自基因工程改造的芽孢杆菌,优选为基因工程改造的枯草芽孢杆菌;优选地,所述枯草芽孢杆菌中含有SEQ ID NO:1所示的序列;更优选地,所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌1012。4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述培养的方式包括将所述工程菌接种至培养基中后,在生长培养条件下进行生长培养,而后在表达培养条件下进行表达培养;优选地,所述工程菌的接种量使得生长培养体系中,所述工程菌的初始OD
600
值达到0.05
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0.5;优选地,所述生长培养条件包括:温度35
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37℃,pH 6.9
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7.1,初始搅拌速率使得搅拌桨尖线速度为40
【专利技术属性】
技术研发人员:佟毅,周卫强,王琪,彭超,郭元亨,李凡,李义,武丽达,梁颖超,王亮,
申请(专利权)人:中粮营养健康研究院有限公司,
类型:发明
国别省市:
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