一种CthTerA内含肽变体及其在生物法制备四肽-7中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种内含肽及其在生物法制备四肽

【技术实现步骤摘要】
一种Cth TerA内含肽变体及其在生物法制备四肽
‑
7中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，特别涉及一种Cth TerA内含肽变体及其在生物法制备四肽
‑
7中的应用。

技术介绍

[0002]棕榈酰四肽
‑
7(Palmitoyl Tetrapeptide
‑
7)可以延缓和抑制过量细胞白介素的生成，从而抑制一些不必要或不恰当的炎症反应和糖基化损伤。在体外实验中，研究人员发现在细胞白介素生成时，棕榈酰四肽
‑
7诱导呈现出一种显著的剂量依赖性减少，即棕榈酰四肽
‑
7的使用剂量越高，细胞白介素减少得越多，最高降幅可达到40％。
[0003]棕榈酰四肽
‑
7具有极高的应用价值。相关技术中，提示了UV紫外线辐射可以促进细胞白介素的生成。当细胞与紫外线辐射接触后，用棕榈酰四肽
‑
7进行治疗，可以看到细胞白介素减少86％。相关技术表明，棕榈酰四肽
‑
7还可以促进结缔组织的生长，增加皮肤中的胶原蛋白的生成。而当胶原蛋白增加的时候，皮肤可以实现自我愈合和再生。此外，棕榈酰四肽
‑
7能加速粒细胞趋化蛋白(GCP
‑
2)表达，促进伤口恢复。而且，棕榈酰四肽
‑
7还是免疫球蛋白IgG的片段，而IgG有许多生物活性功能，尤其免疫调节功能。棕榈酰四肽
‑
7在美妆产品，尤其是抗衰老产品中有极高的应用前景。相关研究中发现皮肤细胞因子，尤其是IL6，参与了慢性炎症反应，在皮肤衰老过程中表现了重要作用。衰老过程中，脱氢表雄酮DHEA的下降和IL6的增多呈现很强的关联性。而研究发现棕榈酰四肽
‑
7会模拟皮肤中的DHEA，从而控制炎性细胞因子在循环系统中的水平，降低老化中IL6水平从而达到重新维持皮肤中细胞因子平衡来实现对皮肤的护理，降低炎性反应使皮肤更加紧致、光滑富有弹性。而且棕榈酰四肽
‑
7可以通过充当细胞信使来刺激真皮中胶原纤维的再生，被认为可以增加皮肤中的透明质酸含量，从而可以通过吸引水分至表皮来帮助收紧皮肤。棕榈酰四肽7也常见于抗衰老血清、保湿剂和某些化妆品配方中，经证实其对于皮肤弹性的改善具有显著的统计学意义，且能减少深层皱纹，改善皮肤纹理，并对胶原蛋白1、纤连蛋白和透明质酸合成具有剂量反应。因此，棕榈酰四肽
‑
7及其中间体四肽
‑
7具有重要的市场应用价值。
[0004]然而，目前关于四肽
‑
7的工业化合成主要依赖于化学合成，这种合成方法副产物多、产率低、污染大、成本高，难以符合“碳中和”的时代需求。生物合成虽然能够有效解决化学合成的缺陷，但对于复杂结构的四肽
‑
7，目前尚未有高效的生物合成途径。而且，目前基于化学合成得到的四肽
‑
7的过程中往往会带来很多合成副产物，有些副产物甚至具有较大的细胞毒性，从而使得四肽
‑
7的生产和提纯消耗大量的成本，且容易带来严重的污染，极大地限制了四肽
‑
7的进一步开发与应用。因此，开发一种更加绿色经济且高效的合成方式，是四肽
‑
7工业化生产所急需的。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术提出一种内含肽及其在生物法制备四肽
‑
7中的应用，通过该内含肽与四肽
‑
7的融合，能够高效且
规模化生产高纯度四肽
‑
7，有效避免了副产物和有毒有害物质的产生。
[0006]本专利技术的第一个方面，提供一种Cth TerA内含肽变体，所述Cth TerA内含肽变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0007]在本专利技术中，所述Cth TerA内含肽变体是基于Cth TerA内含肽原始序列进定向化改造得到的。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述Cth TerA内含肽原始序列为Clostridium thermocellum ATCC27405的TerA基因片段。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述TerA基因片段选自GenBank:WP_127837222.1中第68
‑
400位氨基酸残基片段中的片段。
[0010]本专利技术的第二个方面，提供编码本专利技术第一个方面所述Cth TerA内含肽变体的核酸分子，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸分子还包括与SEQ ID NO:4具有85％、90％、95％或以上同一性且具有同样自切割活性的序列。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述核酸分子还包括与SEQ ID NO:4具有95％、96％、97％、98％或99％同一性且具有同样自切割活性的序列。
[0013]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一个方面所述的Cth TerA内含肽变体作为标签序列在蛋白纯化中的应用。
[0014]在本专利技术中，专利技术人发现经过定向化改造后的Cth TerA内含肽变体相比与Cth TerA内含肽原始序列具有更强的自切割活性，从而实现更高的自切割效果。
[0015]本专利技术的第四个方面，提供一种蛋白纯化产品，所述蛋白纯化产品包括如下(1)～(4)中的至少一种：
[0016](1)本专利技术第一个方面所述的Cth TerA内含肽变体；
[0017](2)本专利技术第二个方面所述的核酸分子；
[0018](3)含有(2)中核酸分子的表达盒；
[0019]含有(2)中核酸分子或含有(3)中表达盒的转化子；
[0020]其中，所述转化子包括病毒、细菌、真菌和细胞。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化子为细菌。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述转化子为大肠杆菌。
[0023]本专利技术的第五个方面，提供一种融合蛋白，所述融合蛋白中含有权利要求1中所述的Cth TerA内含肽变体序列和四肽
‑
7序列。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述四肽
‑
7为GQPR。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述融合蛋白中还含有修饰序列。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述修饰序列包括但不限于his标签序列、GST标签序列、Flag标签序列、Halo标签序列、HA标签序列、Myc标签序列、Snap标签序列中的至少一种。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述修饰序列为his标签序列。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Cth TerA内含肽变体，其特征在于，所述Cth TerA内含肽变体的氨基酸序列如SEQID NO:3所示。2.编码权利要求1所述Cth TerA内含肽变体的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。3.权利要求1所述的Cth TerA内含肽变体作为标签序列在蛋白纯化中的应用。4.一种蛋白纯化产品，其特征在于，所述蛋白纯化产品包括如下(1)～(4)中的至少一种：(1)权利要求1所述的Cth TerA内含肽变体；(2)权利要求2所述的核酸分子；(3)含有(2)中核酸分子的表达盒；(4)含有(2)中核酸分子或含有(3)中表达盒的转化子；所述转化子包括病毒、细菌、真菌和细胞。5.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中含有权利要求1中所述的Cth TerA内含肽变体序列和四肽
‑
7序列；其中，所述四肽
‑
7为GQPR寡肽。6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中还含有修饰序列；所述修饰序列包括his标签序列、GST标签序列、Flag标签序列、Ha...

【专利技术属性】
技术研发人员：何茜，张志乾，吴奕瑞，吴嵩，陈西朋，张豫，刘丽花，许波，江翱，
申请(专利权)人：广州市乾相生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：