【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物质的hplc分析方法。
技术介绍
1、乙酰基四肽-9，英文名称是acetyl tetrapeptide-9，因其具有抗皱功效被添加于化妆品中。据报道，乙酰基四肽-9可以促进真皮和成纤维细胞中的基膜聚糖和胶原蛋白i的合成，可以促进真皮重塑从而达到紧致和丰满皮肤的功效，同时还因其具有促进角质细胞增长的作用从而减缓皮肤内水分散失。
2、乙酰基四肽-11，英文名称是acetyl tetrapeptide-11，因其可以刺激细胞生长和多配体蛋白聚糖-1(syndecan-1)的合成，从而能够重塑表皮凝聚力，恢复皮肤的光泽，抵抗力和紧致度、增强表皮与真皮结合处的粘附力等。
3、文献“laser-assisted bioprinted skin equivalent for cosmetic efficacyevaluation,intenation federation of societies of cosmetic chemists,2019,magazine 1,19-26页”中报道了乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11具有协同作用，二者配合使用促进ⅰ型和xvii型胶原蛋白生成，并采用皮肤模型实验验证了二者组合使用无成分冲突，且具有非常显著的抗衰老功效。可见，二者搭配使用是如今化妆品行业的常见方式。
4、现有技术中，鲜有对乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合体系的hplc分析方法的报道，因为这两种物质的物理化学性质相对复杂、分
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种连续测定乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物的hplc分析方法，所述方法如下所述:
2、一种连续测定乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物的hplc分析方法，所述方法包括，采用流动相a-b进行等度洗脱，其中所述流动相a为0.1％磷酸水溶液；所述流动相b为乙腈；洗脱浓度为a：45％-55％，b:55％-45％。
3、根据本专利技术的方法，所述流动相的洗脱浓度为a：50％，b:50％。
4、根据本专利技术的方法，流动相的流速为0.4ml/min-0.6ml/min，优选地，流速为0.5ml/min。
5、根据本专利技术的方法，选用固定相为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，色谱柱柱温为30～45℃，优选40℃。
6、根据本专利技术的方法，检测波长范围为200～300nm，优选210nm。
7、根据本专利技术的方法，混合样品中，乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11的浓度均在0.03125～0.5g/l之间。
8、根据本专利技术的方法，所述方法包括如下步骤:
9、(1)设定液相色谱条件；
10、(2)配置乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11的单独或混合标准溶液，测定后绘制标准曲线；
11、(3)测定混合样品，记录色谱图；
12、(4)对色谱图中两种物质谱图分别积分，根据各自标准曲线计算所述混合物中乙酰基四肽-9和/或乙酰基四肽-11的含量。
13、根据本专利技术的方法，所述方法还包括在测定混合样品后，用流动相b清洗色谱柱1～5min的步骤。
14、根据本专利技术的方法，所述标准曲线通过配制同一溶剂体系下乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11的混合标准溶液，并采用所述液相色谱条件进行测定而建立。
15、根据本专利技术的方法，所述混合样品的进样量为1～5μl，优选1μl；进样器温度为环境温度；待测样品采集时间为7～10min，优选8min。
16、有益效果
17、本领域技术人员已知，理论塔板数n可定量的表示色谱柱的分离效率，通常n越大，对待分离组分的分离效果越好，同时半峰宽对于衡量样品分离效果和纯度有重要意义，因此在其计算公式中引入半峰宽参数。分离度r用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。无论是定性鉴别还是定量测定，除另有规定外，待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度r等于1时，两个色谱峰得到基本分离；r大于等于1.5时，两峰得到完全(基线)分离，从而保证定量计算面积积分中基本没有误差。除了上述参数指标，色谱峰形是色谱柱定量分析的主要参数，不好的峰形，例如不对称、峰变宽、峰分裂等等，可降低测定的峰面积的精确度和准确度，因此峰形是非常直观的评价色谱分析方法的因素。然而，在一项hplc(高效液相色谱)分析方法中，影响上述参数性质的归因非常多，例如色谱柱填充物的颗粒大小、孔径尺寸、表面化学性质、催化剂和排斥剂、柱长，流动相的流速、粘度、表面张力和温度等特性都会影响色谱柱的分离能力。对于乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11这两种物理化学性质相对复杂、分子量相近，不易分离的混合物的hplc检测分析，想要实现完全分离，达到定性定量准确性高的效果，就更为难得。
18、本专利技术发现了一种适用于连续测定乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物质的hplc分析方法，所述方法能够对该两种物质有效分离，从而实现二者的准确定量分析。本专利技术的方法快速高效，在8分钟内完成对乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11的同时定性和定量分析，且该方法稳定、具有可重复性。本专利技术的方法步骤简单、无需繁琐的分析程序，仅采用等度洗脱一次性即可将两种成分完全洗脱。本专利技术的方法结果精确，具有优异的峰形、分离度、半峰宽、理论塔板数等评价指标，在本专利技术的液相色谱条件及流动相体系下，可绘制更宽浓度范围的标准曲线，适用性广。利用本专利技术的分析方法，乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11均在0.03125～0.5g/l浓度范围内呈线性，且误差均低于5％，因此可以实现对未知浓度样品的准确定量。本专利技术的方法统一了乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11与其他肽的分析用色谱柱，节省更换不同色谱柱、或者清洗色谱柱的工作时间，有利于全程自动化的实现。
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1.一种连续测定乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物的HPLC分析方法，所述方法包括，采用流动相A-B进行等度洗脱，其中所述流动相中A为0.1％磷酸水溶液；B为乙腈；洗脱浓度为A：45％-55％，B:55％-45％。
2.根据权利要求1所述的方法，所述流动相的洗脱浓度为A：50％，B:50％。
3.根据权利要求1所述的方法，流动相的流速为0.4mL/min-0.6mL/min，优选地，流速为0.5mL/min。
4.根据权利要求1所述的方法，选用固定相为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，色谱柱柱温为30～45℃，优选40℃。
5.根据权利要求1所述的方法，检测波长范围为200～300nm，优选210nm。
6.根据权利要求1所述的方法，混合物中，乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11的浓度均为0.03125～0.5g/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其包括如下步骤:
8.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括在测定所述混合物后，用流动相B清洗色谱柱1～5min的步骤。
9.根据权利要求7所
10.根据权利要求1所述的方法，所述混合物的进样量为1～5μL，优选1μL；进样器温度为环境温度；待测样品采集时间为7～10min，优选8min。
...【技术特征摘要】
1.一种连续测定乙酰基四肽-9和乙酰基四肽-11混合物的hplc分析方法，所述方法包括，采用流动相a-b进行等度洗脱，其中所述流动相中a为0.1％磷酸水溶液；b为乙腈；洗脱浓度为a：45％-55％，b:55％-45％。
2.根据权利要求1所述的方法，所述流动相的洗脱浓度为a：50％，b:50％。
3.根据权利要求1所述的方法，流动相的流速为0.4ml/min-0.6ml/min，优选地，流速为0.5ml/min。
4.根据权利要求1所述的方法，选用固定相为十八烷基硅烷键合相的色谱柱，色谱柱柱温为30～45℃，优选40℃。
5.根据权利要求1所述的方法，检测波长范围为200～300nm，优...
【专利技术属性】
技术研发人员：张志乾，王海梅，吴奕瑞，王嘉鹏，朱家平，罗嘉雯，江翱，王帆，
申请(专利权)人：广州市乾相生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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