吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用。本发明专利技术发现吉西他滨与吉非替尼联用时对膀胱癌细胞的抑制作用明显增强。本发明专利技术通过将吉西他滨和吉非替尼联合用药，为膀胱癌治疗提供新的方法和策略。胱癌治疗提供新的方法和策略。胱癌治疗提供新的方法和策略。

【技术实现步骤摘要】
吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用。

技术介绍

[0002]膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一。
[0003]吉西他滨(gemcitabine)是膀胱癌治疗过程中的常用药物,可用于肌层浸润性膀胱癌和非肌层浸润性膀胱癌，但患者易出现吉西他滨耐药的情况，导致膀胱癌复发及转移，生存率降低。因此有必要开发新的对膀胱癌的治疗策略。
[0004]吉非替尼(gefitinib)系第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，与细胞膜上的表皮生长因子受体特异性结合，可抑制肿瘤的生长，转移和血管生长，并增加肿瘤细胞的凋亡。目前尚未见有吉西他滨与吉非替尼联合用药在膀胱癌治疗中的应用的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于膀胱癌的治疗药物中的应用。
[0006]本专利技术的第二个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于耐药的膀胱癌的治疗药物中的应用。
[0007]本专利技术的第三个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于吉西他滨耐药的膀胱癌的治疗药物中的应用。
[0008]本专利技术的第四个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于复发转移的膀胱癌的治疗药物中的应用。
[0009]本专利技术的优点在于，
[0010](1)吉西他滨及吉非替尼对T24GR细胞(吉西他滨耐药的T24细胞)和UM
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UC
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3GR细胞(吉西他滨耐药的UM
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UC
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3细胞)的IC
50
和两种药物联合作用实验结果：为了研究吉西他滨联合吉非替尼对人膀胱癌细胞是否具有药物协同作用，首先采用CCK
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8实验检测不同浓度的吉西他滨和吉非替尼作用于膀胱癌细胞48h后的细胞毒性，通过GraphPad Prism 8.0软件计算IC
50
值。研究结果表示，吉非替尼在T24GR和UM
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UC
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3GR的IC
50
分别是848.6nM和1470.0nM,吉西他滨在T24GR和UM
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UC
‑
3GR的IC
50
分别是432.9nM和741.9nM。然而使用约1/2IC
50
浓度(400nM,700nM)的吉非替尼和不同浓度梯度的吉西他滨分别处理T24GR和UM
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UC
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3GR细胞48h，同样使用CCK
‑
8实验检测细胞活性后，发现两药联用时对膀胱癌细胞的抑制作用明显增强，联合用药后T24GR和UM
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UC
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3GR对吉西他滨的IC
50
下降为241.3nM和396.4nM。
[0011](2)吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM
‑
UC
‑
3GR细胞耐药性研究实验结果表明，吉非替尼能够在一定程度上逆转吉西他滨耐药细胞株T24GR和UM
‑
UC
‑
3GR的耐药性。
附图说明
[0012]图1为吉西他滨、吉非替尼及两者联用对T24GR细胞相对活性的统计图。
[0013]图2为吉西他滨、吉非替尼及两者联用对UM
‑
UC
‑
3GR细胞相对活性的统计图。
具体实施方式
[0014]下面结合附图和具体实施方式来对本专利技术作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不以此限制本专利技术。
[0015]实施例1吉西他滨、吉非替尼及两者联用对T24GR和UM
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UC
‑
3GR细胞的增殖抑制作用
[0016]细胞来源
[0017]T24GR细胞使用含10％胎牛血清+100nM吉西他滨的RPMI
‑
1640培养基培养，每隔2d传代1次。细胞培养箱设置条件为：CO2浓度：5％，温度：37℃，取对数生长期的细胞用于实验。
[0018]UM
‑
UC
‑
3GR细胞使用含10％胎牛血清+100nM吉西他滨的RPMI
‑
1640培养基培养，每隔2d传代1次。细胞培养箱设置条件为：CO2浓度：5％，温度：37℃，取对数生长期的细胞用于实验。
[0019]细胞活性检测
[0020]将悬浮的T24GR和UM
‑
UC
‑
3GR细胞接种于96孔板(3000个/孔/100μL)，孵育24h后，加入吉西他滨(设定浓度：0,100，200，300，400，和500nM)或吉非替尼(设定浓度：0,250，500，750，1000，2000，3000，4000，和5000nM)，继续孵育48h。每孔加入10μL CCK
‑
8溶液，将培养板放入培养箱中孵育2h后用酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。细胞活性(％)＝[(实验孔吸光度
‑
空白孔吸光度)/(对照孔吸光度
‑
空白孔吸光度)]*100％。Graphpad计算吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM
‑
UC
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3GR细胞的IC
50
值(表1)。
[0021]吉西他滨联合吉非替尼对T24GR和UM
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UC
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3GR细胞的增殖抑制作用
[0022]将悬浮的T24GR和UM
‑
UC
‑
3GR细胞接种于96孔板(3000个/孔/100μL)，孵育24h后，分别加入吉非替尼(400nM或700nM)和吉西他滨(设定浓度：0,100，200，300，400，和500nM)，继续孵育48h。每孔加入10μL CCK
‑
8溶液，将培养板放入培养箱中孵育2h后酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。细胞活性(％)＝[(实验孔吸光度
‑
空白孔吸光度)/(对照孔吸光度
‑
空白孔吸光度)]*100％。Graphpad计算IC
50
数值(表1)。
[0023]吉西他滨和吉非替尼相互作用采用两药相互作用系数(Coefficient of drug interaction,CDI)来评价。CDI的计算公式为：CDI＝AB/(A
×
B)。按照OD值来计算，AB表示联合用药组OD值与对照组OD值的比值,A或B表示两药物单独使用OD值与对照组OD值的比值。当CDI<1时，两药有协同作用；当CDI＝1时，两药的作用为相加；当CDI>1时，两药的作用为拮抗或无协同作用。
[0024]统计分析
[0025]采用GraphP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用。2.权利要求1定义的吉西他滨联合吉非替尼在制备用于膀胱癌的治疗药物中的应用。3.权利要求1定义的吉西他滨联合吉非替尼在制备用于耐药的膀胱癌的治疗药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王润昌，郜栋阳，王志平，
申请(专利权)人：兰州大学，
类型：发明
国别省市：