鳗利斯顿氏菌的ＬＡＭＰ－ＬＦＤ检测方法技术

本发明专利技术公开了鳗利斯顿氏菌的ＬＡＭＰ－ＬＦＤ检测方法，包括鳗利斯顿氏菌ｅｍｐＡ基因克隆和测序步骤，设计三对ＬＡＭＰ的引物ＦＩＰ、ＢＩＰ、ＬＦ、ＬＢ、Ｆ３、Ｂ３和一条探针Ｖａｎ－ＨＰ步骤，其中Ｖａｎ－ＦＩＰ为５’端生物素标记引物，探针Ｖａｎ－ＨＰ为５’端异硫氰酸荧光素ＦＩＴＣ标记探针，配制含三对引物和样品模板的ＬＡＭＰ反应体系步骤，对ＬＡＭＰ反应体系扩增步骤，用探针杂交然后用ＬＦＤ检测步骤，本发明专利技术具有比现有技术的ＰＣＲ检测鳗利斯顿氏菌的方法具有更高的灵敏度、特异性和便捷性，并且可以在实际生产中现场应用，有利于检测和控制水产动物养殖中鳗利斯顿氏菌的感染和暴发。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
鳗利斯顿氏菌的ＬＡＭＰ－ＬＦＤ检测方法，其特征在于包括下述步骤：　　（１）鳗利斯顿氏菌ｅｍｐＡ基因克隆和测序：根据基因库中金属蛋白酶的序列，设计一对扩增引物Ｖａｎ－ＭＰｆ：５’－ＡＴＧＡＡＡＡＡＡＧＴＡＣＡＡＣＧＴＣＡＡＡ－３’和Ｖａｎ－ＭＰｒ：５’－ＴＴＡＡＴＣＣＡＧＴＣＴＴＡＡＣＧＴＴＡＣＡ－３’，ＰＣＲ扩增获得鳗利斯顿氏菌ｅｍｐＡ基因的完整编码基因至ｐＭＤ１９－Ｔ得到重组质粒并测序分析，测序结果登录号为ＦＭ８６６２４；　　（２）设计ＬＡＭＰ的引物和探针：根据上述鳗利斯顿氏菌ｅｍｐＡ基因序列设计下述ＬＡＭＰ的三对引物序列和一条探针序列：　　ＦＩＰ引物Ｖａｎ－ＦＩＰ：　　５’－ＧＣＴＧＧＴＴ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炯，李明云，史雨红，陆新江，李登峰，史西志，丁文超，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]