【技术实现步骤摘要】
一种等电点沉淀结合超滤协同阳离子交换提取咸鸭蛋清溶菌酶的方法
[0001]本专利技术涉及溶菌酶提取
,具体为一种等电点沉淀结合超滤协同阳离子交换提取咸鸭蛋清溶菌酶的方法。
技术介绍
[0002]咸鸭蛋清是咸鸭蛋的重要组成部分,作为咸鸭蛋黄生产过程中产生的副产物,每年都有万吨的咸鸭蛋清被遗留,因其含有质量分数7%~10%的含盐量而导致利用困难,常被大多数食品企业所废弃。一方面造成优质蛋白质资源的浪费,另一方面咸鸭蛋清的腐败分解严重污染周围环境和水源。咸鸭蛋清的氨基酸组成与鸡蛋清极其相似,是一种能被人体充分利用的全价优质蛋白质。因此,研究咸鸭蛋清的合理利用,实现其营养增值,有利于提高资源的合理利用率;
[0003]溶菌酶是咸鸭蛋清中主要的生物活性成分之一,可催化水解细菌细胞壁中的N
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乙酰胞壁酸和N
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乙酰葡萄糖胺之间的β
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1,4糖苷键。溶菌酶是自然界中广泛存在的天然抗菌物质,其在鸟类和家禽的蛋清中含量最为丰富,约占蛋清总蛋白的3.50%,是WHO/FDA安全认可的食品防腐剂,在食品、医药、日用化工等领域中实现了广泛应用。目前,市场上的商品溶菌酶大都是鸡蛋清分离纯化获得,对于咸鸭蛋清中溶菌酶的分离纯化还是鲜有文献报道;
[0004]溶菌酶的提取方法主要有直接结晶法、离子交换法、超滤法、双水相系统分离法、反胶团萃取法和亲和膜色谱法等。一些技术中采用活性蓝4和活性红120染料配体固定化复合膜纯化蛋清溶菌酶,对于活性红120和活性蓝4固定膜纯化溶菌酶 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种等电点沉淀结合超滤协同阳离子交换提取咸鸭蛋清溶菌酶的方法,其特征在于:该提取方法包括以下步骤:S1:实验材料预处理S1.1:咸鸭蛋清样品预处理:取一定量咸鸭蛋清,用2
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4层纱布过滤,除去蛋清液中的杂质,然后采用磁力搅拌器搅拌20min,搅拌速度以不引起蛋清起泡为宜;S1.2:离子交换树脂的预处理:量取一定体积D152大孔弱酸性阳离子交换树脂,用蒸馏水反复清洗,去掉其中杂质,再量取1000mL浓度为1mol/L的盐酸浸泡树脂12h,倾出上清液,然后用蒸馏水冲洗至pH值为6左右,再量取1000mL浓度为1mol/L氢氧化钠溶液浸泡树脂12h,倾出上清液,用蒸馏水冲洗至pH值为9左右,用水浸泡备用;S2:等电点沉淀初步去杂蛋白量取一定体积经预处理后的咸鸭蛋清,以体积比为1:4的比例加入C=0.20mol/L,pH=6.8的磷酸盐缓冲液混合均匀,放于4℃冰箱静置24h,然后使用冷冻离心机在温度4℃,转速12000r/min条件下离心20min,收集上清液;S3:咸鸭蛋清超滤处理S3.1:以10倍pH=8.5,C=0.20mol/L的磷酸盐缓冲液将初步去杂的咸鸭蛋清稀释,用高压均质机在24MPa条件下均质,室温下操作;S3.2:咸鸭蛋清中杂蛋白的分子量大多大于30kDa,采用截留分子量为30kDa的PES膜超滤后能尽可能去除绝大多数杂蛋白,又充分保留咸鸭蛋清中的溶菌酶透过超滤膜,起到纯化溶菌酶的目的,实验在室温下进行,操作压力为0.35MPa,以pH=8.5,C=0.20mol/L的磷酸盐缓冲液3倍连续稀释,收集透过液,以待进一步纯化;S3.3:采用截留分子量为5kDa的PES膜,操作压力为0.35MPa,室温下进行超滤除盐浓缩,收集截留液,以待进一步纯化;S4:阳离子交换吸附纯化溶菌酶将上述步骤S3.3中经脱盐后的截留液与步骤S1.2中一定量预处理的D152离子交换树脂搅拌混合,使树脂全部悬浮其中,搅拌吸附一段时间后静置分层,弃去上清液,滤干树脂,再加入等体积一定浓度的硫酸铵溶液,搅拌洗脱一段时间,滤出洗脱液,重复洗脱树脂3次,合并滤出的洗脱液;S5:超滤离心管浓缩,冷冻干燥采用截留量为10kDa的超滤离心管中,于5000
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g,离心20min,保留上层截留液,再将截留液冷冻干燥制成干粉,低温保存,完成制备;上述步骤S2所述的冷冻离心机包括箱体(1),所述箱体(1)内部的侧壁上安装有制冷器(2),且箱体(1)内部的顶部位置固定有安装框(3),并且箱体(1)内部的顶部设置有安装座(4),而且安装座(4)内嵌入式固定有电机(5);还包括:驱动杆(6),所述驱动杆(6)的底部与电机(5)的输出端相连接,且驱动杆(6)贯穿轴承安装于安装框(3)内,并且驱动杆(6)的外侧套设有离心座(7),而且离心座(7)位于安装框(3)内,所述离心座(7)中部空心处的内壁上竖直开设有定位槽(71),且定位槽(71)内设置有定位杆(72),并且定位杆(72)固定于驱动杆(6)的外侧位置,所述安装框(3)内部的底部轴承安装有环座(8),且环座(8)的顶部边缘处与离心座(7)的底部边缘处固定有弹性伸缩
杆(9),所述离心座(7)的外侧开设有调节槽(10),且调节槽(10)内竖直贴合滑动有调节杆(11...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐继成,姚鑫钧,陈群帅,曹春松,严东升,
申请(专利权)人:安徽工程大学,
类型:发明
国别省市:
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