一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法及其应用。本发明专利技术初始让小鼠感受湿热之邪(置于温度33℃

【技术实现步骤摘要】
一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法及其应用


[0001]本专利技术属于中医湿热证溃疡性结肠炎基础研究和实验动物学领域涉及动物模型的建立方法，特别涉及一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法及其应用。

技术介绍

[0002]溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种肠道非特异性炎症性疾病，其重要特征是肠道炎症和肠上皮结构破坏，临床表现为持续或反复发作的腹泻、黏液脓血便伴腹痛、里急后重和不同程度的全身症状，该病慢性反复迁延，治疗上缺乏特异性措施且容易复发和癌变，被世界卫生组织(World health organization，WHO)列为现代难治病种之一，UC是欧洲和北美的常见病，但近年随着我国生活水平的提高以及诊断技术的不断进步，UC在我国的增加趋势非常明显，我国目前的UC推测患病率约为11.6/10万，已成为消化系统常见病，给患者及其家庭带来巨大的经济和精神负担。溃疡性结肠炎具体的发病机制尚未清楚，当前研究认为其可能和家族遗传、环境、心理、饮食、情绪等多种因素相关。UC目前临床上尚无特效药治疗，治疗方法首选内科药物，但因UC病情反复迁延，长期用药也伴随着不良反应等问题。中药治疗UC具有副作用小，经济效益大等优势，因此开发UC防治效应的中药制剂具有重大意义。而对于UC的理解，学者们很大程度上只能依赖于贴近人类疾病或是概括人类疾病的动物模型。因此，在探究UC的发病机制和药物治疗方面，贴近临床的动物模型是必不可少的，这将有助于更好地针对疾病发病机制设计临床药物及治疗。据临床调查，湿热证是UC中医临床中最为常见的证型，因此在进行UC的中医药相关研究时，复制湿热证UC动物模型尤为重要。
[0003]查阅相关文献发现，当前实验性结肠炎以啮齿动物模型为主，葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate，DSS)诱导的小鼠肠道炎症是应用最广泛的模型之一。DSS诱导的炎症发病及严重程度与DSS浓度及用药周期有关。但当前关于UC中医证候的动物模型都为急性，导致动物模型缺乏了UC作为人类慢性复发性疾病应有的疾病变化过程。同时，关于中医证候的动物模型造模文献资料虽有很多，但学术界仍然没有统一的标准及造模方法。判断中医证候动物模型最后成模的标准完全依赖于实验者的主观评价，仅以此来判断造模成功与否是具有局限性和缺乏严谨性的。这些不足一定程度上阻碍了湿热证慢性复发性UC基础研究、临床药物机制研究及新药开发。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，基于现有湿热证动物模型和溃疡性结肠炎动物模型的造模方法，利用DSS溶液自由饮用多次诱导以贴近慢性复发性UC，加高脂饮食自由摄取、白酒灌胃模拟饮食不节、内生湿热，和人工气候箱模拟湿热环境联合复制，更好模拟湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎发展变化的规律；同时结合人工智能颜色分析技术，
增加中医证候诊断的严谨性，提供一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法。
[0005]本专利技术的另一目的在于，提供上述方法在中医症候评价中的应用。
[0006]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0007]一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，采用DSS(葡聚糖硫酸钠)和高脂饲料、白酒并人工气候箱联合诱导的湿热证慢性复发性UC模型，具体如下：
[0008]①
高脂饲料处理：小鼠从第0天起，自由摄食高脂饲料，持续11天；
[0009]②
DSS处理：小鼠从第6天起，将普通水改为DSS溶液自由饮用，该操作持续6
±
1天；
[0010]③
人工气候箱处理：小鼠从6天起，每日放入温度33
±
2℃，相对湿度93
±
2％，光照1～2级的人工气候箱中8
±
1小时，该操作持续6
±
1天；
[0011]④
白酒处理：小鼠从第6天起，隔日给予白酒灌胃，共进行3～4次；
[0012]以
①‑④
为一个循环，以此反复三个循环造模，每次循环以恢复期作为过渡，恢复期期间模型组暂停所有造模操作，普通水普通饲料自由饮用，恢复期持续6
±
1天。
[0013]优选地，在第1次和第2次循环中，
②
、
③
中所述的操作持续6天，在第3次循环中，
②
、
③
中所述的操作持续5天。
[0014]优选地，
①
中所述的高脂饲料为HF45。
[0015]优选地，
②
中所述的DSS溶液的浓度为1.5％～3％。
[0016]更优选的，在第1次和第2次循环中，
②
中所述的DSS溶液的浓度为1.5％，在第3次循环中，
②
中所述的DSS溶液的浓度为3％。
[0017]优选地，
③
中所述的白酒灌胃的用量为0.3mL/只，1次/天。
[0018]优选地，
③
中所述的白酒为29
°
九江双蒸酒。
[0019]优选地，所述的构建方法中采用的小鼠是7～8周龄，体重18～22g的SPF级BALB/C雄性小鼠。
[0020]优选地，所述的建立方法还包括如下步骤：
[0021](1)通过观察小鼠各项体征变化，验证所述湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型是否构建成功；
[0022]和/或，
[0023](2)通过DAI(疾病活动指数，Disease Activity Index)评分细则、湿热评分细则、结肠组织宏观病理评分细则和结肠组织病理评分细则，分别计算小鼠DAI评分、湿热评分、结肠组织宏观病理评分和结肠组织病理评分，验证所述湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型是否构建成功；
[0024]和/或，
[0025](3)通过测定小鼠各项生物学指标表达量，验证所述湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型是否构建成功；
[0026]和/或，
[0027](4)通过比较不同药物治疗对模型的影响评分，验证所述湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型是否构建成功，若中医经典的清热利湿方剂对模型的各项指标皆有显著治疗效果，而温中驱寒方剂没有，则表明模型正向验证成功，反之则没有；所述药物包括通过黄芩汤和理中汤。
[0028]更优选地，所述的DAI评分细则中，爪、尾的色泽部分的量化采用计算机软件图像分析实现，具体操作为：将小鼠放置在垫板上，人为固定抓住小鼠，让爪、尾被充分暴露，调整相机参数，保证每次拍照所有参数一致，然后拍照；使用软件对图片进行统一光源校准，而后对目标位置进行红色值提取，对结果使用进行统计分析。
[0029]更优选地，所述的软件为Mycolor软件。
[0030]更优选地，所述的生物学指标包括IFN
‑
γ、TNF
‑
α、IL
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，其特征在于：包括如下步骤：
①
高脂饲料处理：小鼠从第0天起，自由摄食高脂饲料，持续11天；
②
DSS处理：小鼠从第6天起，将普通水改为DSS溶液自由饮用，该操作持续6
±
1天；
③
人工气候箱处理：小鼠从6天起，每日放入温度33
±
2℃，相对湿度93
±
2％，光照1～2级的人工气候箱中8
±
1小时，该操作持续6
±
1天；
④
白酒处理：小鼠从第6天起，隔日给予白酒灌胃，共进行3～4次；以
①‑④
为一个循环，以此反复三个循环造模，每次循环以恢复期作为过渡，恢复期期间模型组暂停所有造模操作，普通水普通饲料自由饮用，恢复期持续6
±
1天。2.根据权利要求1所述的湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，其特征在于：
②
中所述的DSS溶液的浓度为1.5％～3％；
③
中所述的白酒灌胃的用量为0.3mL/只，1次/天。3.根据权利要求2所述的湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，其特征在于：在第1次和第2次循环中，
②
中所述的DSS溶液的浓度为1.5％，在第3次循环中，
②
中所述的DSS溶液的浓度为3％。4.根据权利要求1所述的湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，其特征在于：在第1次和第2次循环中，
②
、
③
中所述的操作持续6天，在第3次循环中，
②
、
③
中所述的操作持续5天。5.根据权利要求1所述的湿热证慢性复发性溃疡性结肠炎小鼠模型的建立方法，其特征在于：
①
中所述高脂饲料为HF45；
③
中所述的白酒为29
°
九江双蒸酒；所述的方法中采用的小鼠是7～8周龄，体重18～22g的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑学宝，王小林，黄晓其，苏子仁，李敏瑶，吴玉竹，孙泽佳，濮声乐，李木霞，雷骏轩，邱一桐，邱建国，
申请(专利权)人：东莞广州中医药大学研究院，
类型：发明
国别省市：