一种自发房颤转基因动物模型及其构建方法技术

本发明专利技术涉及一种自发房颤转基因动物模型及其构建方法。本发明专利技术利用PiggyBAC转座酶系统，采用受精卵注射方式，将α

【技术实现步骤摘要】
一种自发房颤转基因动物模型及其构建方法


[0001]本专利技术涉及动物模型创建相关技术，具体涉及一种自发房颤转基因动物模型的构建方法。

技术介绍

[0002]目前缺乏合适的心律失常的动物模型是制约针刺治疗心律失常机制研究关键因素之一，迄今为止，使用的大多数房颤模型均是大型动物模型，它们的房颤多是由药物或物理因素的干预引起的，缺少自发房颤的稳定模型。以往的大鼠房颤模型中，造模方法多为过量应用肾上腺素类或胆碱类药物，这类药物本身对于交感迷走具有很大的干扰。建立一种稳定的非药物的大鼠房颤模型，对提高新药筛选效率、理解疾病过程以及研究房颤发生机制具有重大意义。近年来，由于CRISPR/Cas9基因组编辑的技术手段的成熟，转基因动物已广泛应用于心律失常发病机制中的作用研究中，但未见相关通过基因组编辑获得自发房颤动物模型的相关报道。

技术实现思路

[0003]为解决以上问题，本专利技术提供了一种自发房颤转基因动物模型及其构建方法。本方法应用PiggyBAC转座酶系统通过受精卵注射首次获得CREM
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IbΔC
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X基因大鼠模型，本大鼠模型因产生心肌肥厚、心脏形态学改变，并最终引起自发房颤表型。
[0004]本专利技术的构建方法包括以下步骤：利用PiggyBAC转座酶系统，采用受精卵注射方式，将α
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MHC promoter
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human CREM
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IbΔC
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X 3xHA
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polyA随机插入模型动物基因组获得过表达转基因的动物模型。
[0005]优选方法的具体步骤为：
[0006](1)通过体外转录的方式，获得PiggyBAC mRNA，将其与含有目的插入片段CREM
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IbΔC
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X的药液注射到SD大鼠的受精卵中，再将注射后的受精卵移植到假孕母鼠中，20天左右出生的大鼠为首建鼠；
[0007](2)动物模型的鉴定：插入设计引物，通过PCR方法对动物模型进行基因型鉴定，PCR阳性的为首建鼠；所述设计引物的序列如表1所示：
[0008]表1
[0009]PrimerSequence 5'
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>3'Primer TypeIGCCTAGCCCACACCAGAAATForwardIITTGCGTGTTGCTTCTTCTGCReverse
[0010]相对于现有技术，本专利技术具有以下优点：
[0011]本专利技术获得的大鼠模型是一种稳定的非药物的大鼠自发房颤模型，较于目前普遍的药物模型具有稳定性更好，病症更接近临床的优点，对提高新药筛选效率、理解疾病过程、研究房颤发生机制以及研究针灸治疗等非药物治疗方法具有重大意义。
附图说明
[0012]图1是本实施例首建鼠基因鉴定的结果图；
[0013]图2是本实施例应用ECG监测大鼠模型的心律失常表型结果图示。
具体实施方式
[0014]一、动物模型的构建方法：
[0015]本专利技术所用大鼠为SD大鼠，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0016]本专利技术所用PiggyBac转座子系统，购自于addgene公司。
[0017]本专利技术中涉及到的α
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MHC promoter
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human CREM
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IbΔC
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X 3xHA
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polyA的基因序列如下：
[0018]CGGATCAGTCTGCTCATGTGCAGACTCAGACTGGCCAAAATTCAATCCCTGCTTTAGCTCAGCTGCCACTGGTGACATGCCAACTTACCAGATCCGAGCTCCTACTGCTGCTTTGCCACAGGGAGTGGTGATGGCTGCATCGCCCGGAAGTTTGCACAGTCCCCAGCAGCTGGCAGAAGAAGCAACACGCAAACGAGAGCTGAGGCTAATGAAAAACAGGGAAGCTGCCAAAGAATGTCGACGTCGAAAGAAAGAATATGTAAAATGTCTGGAGAGCCGAGTTGCAGTGCTGGAAGTCCAGAACAAGAAGCTTATAGAGGAACTTGAAACCTTGAAAGACATTTGTTCTCCCAAAACAGATTACTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCTTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTGGATCTTACCCATACGATGTTCCAGATTACGCTTAGAGCTTGATGGGTGGCATCCCTGTGACCCCTCCCCAGTGCCTCTCCTGGCCCTGGAAGTTGCCACTCCAGTGCCCACCAGCCTTGTCCTAATAAAATTAAGTTGCATCATTTTGTCTGACTAGGTGTCCTTCTATAATATTATGGGGTGGAGGGGGGTGGTATGGAGCAAGGGGCAAGTTGGGAAGACAACCTGTAGGGCCTGCGGGGTCTATTGGGAACCAAGCTGGAGTGCAGTGGCACAATCTTGGCTCACTGCAATCTCCGCCTCCTGGGTTCAAGCGATTCTCCTGCCTCAGCCTCCCGAGTTGTTGGGATTCCAGGCATGCATGACCAGGCTCAGCTAATTTTTGTTTTTTTGGTAGAGACGGGGTTTCACCATATTGGCCAGGCTGGTCTCCAACTCCTAATCTCACGTGATCTACCCACCTTGGCCTCCCAAATTGCTGGGATTACAGGCGTGAACCACTGCTCCCTTCCCTGTCCTTCTGATTTTAAAATAACTATACCAGCAGAGGACGTCCAGACACAGCATAGCTACCTGGCCATGCCCAACCGGTGGACATTTGAGTTGCTTGCTTGGCACTGTCCTCTCATGCGTTGGGGTCCACTCAGTAGATGCTGTTGAAATTCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAAGTTCTA
[0019]通过体外转录的方式，获得PiggyBAC mRNA，将其与含有目的插入片段CREM
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IbΔC
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X的vector显微注射到SD大鼠的受精卵中，再将注射后的受精卵移植到假孕母鼠中，20天左右出生的大鼠为首建鼠(F0代大鼠)。
[0020]二、依据插入序列设计引物(表1)，通过PCR方法对其进行基因型鉴定。经PCR产物测序确认，共获得3只PCR阳性首建鼠(表2)，基因鉴定结果如图1所示。设计引物进行PCR后，鉴定到阳性大鼠标号为阳性为63、68、72。阳性PCR条带为326bp。PCR鉴定电泳结果如图1所示。
[0021]表2
[0022]编号基因型性别出生日期63+
♀<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种自发房颤转基因动物模型的构建方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：利用PiggyBAC转座酶系统，采用受精卵注射方式，将α
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MHC promoter
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human CREM
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IbΔC
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X 3xHA
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polyA随机插入模型动物基因组获得过表达转基因的动物模型。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：(1)通过体外转录的方式，获得PiggyBAC mRNA，将其与含有目的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永君，王泰一，姚琳，夏宇岑，张猛，于欢欢，刘计敏，黄密密，黄晨星，
申请(专利权)人：山东中医药大学，
类型：发明
国别省市：