一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法及应用。雌性清洁小鼠(SPF)，根据实验设计随机分为两组，每笼5只，饲养于动物平台移动式微屏障鼠笼内，鼠笼、垫料、鼠粮筐、饮水瓶等均高压灭菌后使用；第一组为抗生素干预组(ABX)，第二组为正常对照组(CON)，首先用灭菌去离子水和鼠粮喂养小鼠5天，一是使小鼠适应新环境，体重能正常增长；二是抗生素水味苦，口感不佳，6周龄小鼠体重过低，若抗拒饮用会导致小鼠死亡；适应性喂养待小鼠体重增至16克以上，对ABX组小鼠开始使用抗生素水干预3周。填补雌性动物研究的空白，为抑郁症发病和诊疗中的性别差异研究积累理论基础。的性别差异研究积累理论基础。的性别差异研究积累理论基础。

【技术实现步骤摘要】
一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，涉及一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法及应用。

技术介绍

[0002]神经精神疾病严重威胁人类健康且疾病负担日益严重，有些精神疾病存在显著性别差异，女性患者在疾病发病率、疾病表型、治疗应答等方面均存在一定的差别，虽然女性在社会心理及传统文化的差异可能是重要诱因，但是生物学因素也不容忽视，育龄期女性的特点是体内存在性激素显著波动，提示雌激素可能在这一类疾病中起重要作用。自微生物
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肠
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脑轴被定义并证明与神经精神疾病相关，已逐渐成为深入探讨和研究的热点，并可能成为神经精神疾病诊疗研究重要突破口，也是对以往各种复杂神经精神疾病致病机理的补充。雌激素在神经系统作用广泛，包括调控突触可塑性、神经再生、情绪、学习及认知等雌激素亦可影响肠道菌群组分及代谢产物，雌激素在肠
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脑轴中的关键作用可能是导致神经精神疾病存在性别差异的重要因素。
[0003]雌激素对人体各组织器官广泛调节，其实验室检测多应用于女性生殖系统疾病的诊断和治疗，对其他系统疾病的影响还处于研究阶段，特别是神经精神疾病的诊治。随着肠
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脑轴的调节功能和作用机制被不断发掘，证实肠道微生物是循环雌激素的主要调节器之一，雌激素水平的波动与神经精神疾病的风险增加有关。肠道微生物通过调节雌激素影响大脑认知和功能已成为研究神经精神疾病的潜在突破口，维持肠道微生物群的多样性及其功能平衡对于预防因雌激素缺乏引起的宿主疾病具有重要意义。
[0004]总之，抑郁症患病率及诊疗存在显著性别差异，但机制不清，也尚无针对女性抑郁的诊疗方案，大部分的动物实验也仅纳入雄性动物，雌性动物研究空白。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术针对上述的问题，提供了一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法及应用。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法，雌性清洁小鼠(SPF)，根据实验设计随机分为两组，每笼5只，饲养于动物平台移动式微屏障鼠笼内，鼠笼、垫料、鼠粮筐、饮水瓶等均高压灭菌后使用；第一组为抗生素干预组(ABX)，第二组为正常对照组(CON)，首先用灭菌去离子水和鼠粮喂养小鼠5天，一是使小鼠适应新环境，体重能正常增长；二是抗生素水味苦，口感不佳，6周龄小鼠体重过低，若抗拒饮用会导致小鼠死亡；适应性喂养待小鼠体重增至16克以上，对ABX组小鼠开始使用抗生素水干预3周。
[0007]可选地，所述对ABX组小鼠开始使用抗生素水干预3周具体为：
[0008](1)准备去离子水400ml高压灭菌，将五种抗生素氨苄西林、庆大霉素、甲硝唑、新霉素、万古霉素按照比例分别加入灭菌水中溶解、摇匀；抗生素水味苦，添加浓度为3mg/ml的糖精钠1.2g并充分溶解，以改善口感，增加小鼠饮用依从性；
[0009](2)因氨苄西林现配现用效果好，每天更换一次抗生素水，持续给药3周；
[0010](3)为保证抗菌效果，至少每3天更换1次灭菌鼠笼、垫料；
[0011](4)每7天给小鼠称重1次并记录；
[0012]所有小鼠每天称量液体消耗量，每周称量每只小鼠的体重和食物消耗用于评估抗生素的效果。
[0013]可选地，所述的抗生素氨苄西林0.2g、庆大霉素0.2g、甲硝唑0.2g、新霉素0.2g、万古霉素0.1g。
[0014]可选地，所述的氨苄西林、庆大霉素、甲硝唑、新霉素的浓度为0.5g/ml；所述万古霉素的浓度为0.25g/ml。
[0015]本专利技术还公开了一种肠道微生物在制备治疗雌性小鼠抑郁症药物中的应用。
[0016]可选地，所述肠道微生物通过调节类固醇激素生物合成影响肠
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脑轴雌激素及其受体GPR30表达水平。
[0017]与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：
[0018]本专利技术通过抗生素组合廓清雌性小鼠肠道菌群获得“伪无菌鼠”模型，对比肠道菌群存在和缺失两种状态下，雌性小鼠焦虑、抑郁样行为表型及肠道、海马脑区代谢组学改变，探讨肠道菌群对雌性小鼠肠
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脑轴的调节作用，填补雌性动物研究的空白，为抑郁症发病和诊疗中的性别差异研究积累理论基础。
[0019]当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。
附图说明
[0020]此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0021]图1是本专利技术抗生素饮用水配制；
[0022]图2是本专利技术ABX治疗有效的小鼠盲肠呈现“巨型盲肠”，A代表巨型盲肠，B代表正常盲肠；
[0023]图3是本专利技术肠道菌群缺失显著影响雌性小鼠焦虑、抑郁样行为表型。(A)广谱抗生素干预(ABX)雌性小鼠体重、液体及鼠粮消耗情况，ABX廓清小鼠肠道菌群模拟无菌小鼠，第一周ABX小鼠体重、液体及鼠粮消耗显著降低，在第二周后体重、液体及鼠粮消耗逐渐恢复，在第三周ABX组雌性小鼠体重显著高于对照组；(B)悬尾试验，ABX组雌性小鼠不动时间显著缩短；(C)旷场实验，ABX组雌性小鼠在旷场中央区停留时间显著增加，进入中央区次数显著高于对照组，在旷场中总运动距离显著增加；(D)高架十字迷宫试验，ABX组雌性小鼠在开放臂停留时间显著增加，总运动距离显著增加。ABX，广谱抗生素干预；CON，对照；***p<0.001；*p<0.05；
[0024]图4是本专利技术液相色谱的基峰离子流色谱图；质控样本QC、ABX组和CON组海马脑区的负离子模式下和正离子模式下的基峰离子流图(A图)；质控样本QC、ABX组和CON组盲肠内容物的负离子模式下和正离子模式下的基峰离子流图(B图)；注：横坐标代表出峰时间，纵坐标代表峰强度；
[0025]图5是本专利技术抗生素(ABX)治疗组和正常对照组(CON)雌性小鼠海马脑区(图A)和盲肠内容物(图B)代谢组学分析；图A中ABX组(蓝点)和CON组(黄点)雌性小鼠的海马脑区代
谢表型存在显著差异(n＝20)；LC
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MS分析表明PCA：R2X＝0.478，Q2＝0.183；PLS
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DA：R2X＝0.561，R2Y＝0.66，Q2＝0.262；OPLS
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DA：R2X＝0.716，R2Y＝0.758，Q2＝0.281。图B中ABX组(蓝点)和CON组(黄点)雌性小鼠的盲肠内容物代谢表型存在显著差异(n＝20)；LC
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MS分析表明PCA：R2X＝0.657，Q2＝0.563；PLS
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DA：R2X＝0.789，R2Y＝0.997，Q2＝0.995；OPLS
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DA：R2X＝0.789，R2Y＝0.997，Q2＝0.994；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种雌性伪无菌小鼠模型的建立方法，其特征在于，雌性清洁小鼠(SPF)，根据实验设计随机分为两组，每笼5只，饲养于动物平台移动式微屏障鼠笼内，鼠笼、垫料、鼠粮筐、饮水瓶等均高压灭菌后使用；第一组为抗生素干预组(ABX)，第二组为正常对照组(CON)，首先用灭菌去离子水和鼠粮喂养小鼠5天，一是使小鼠适应新环境，体重能正常增长；二是抗生素水味苦，口感不佳，6周龄小鼠体重过低，若抗拒饮用会导致小鼠死亡；适应性喂养待小鼠体重增至16克以上，对ABX组小鼠开始使用抗生素水干预3周。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对ABX组小鼠开始使用抗生素水干预3周具体为：(1)准备去离子水400ml高压灭菌，将五种抗生素氨苄西林、庆大霉素、甲硝唑、新霉素、万古霉素按照比例分别加入灭菌水中溶解、摇匀；抗生素水味苦，添加浓度为3mg/ml的糖精钠1.2g并充分溶解，以改善口...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘俊希，邓冯莉，李昕，段勇，杨桂华，吕宇杰，
申请(专利权)人：昆明医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：