一种靶向脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法技术

本发明专利技术属于生物医学技术领域，涉及一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法。本发明专利技术构建方法包括：构建GD3sKO小鼠；制备靶向性敲除小鼠AMPK表达的腺相关病毒AAV2/2Rretro

【技术实现步骤摘要】
一种靶向脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法


[0001]本专利技术属于生物医学
，尤其涉及一种靶向性脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法。

技术介绍

[0002]吉兰
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巴雷综合征(Guillain
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Barr
éꢀ
syndrome,GBS)是一种神经科常见的由自身免疫介导的周围神经病，高达30％的患者发病后可迅速进展至呼吸肌麻痹而危及生命，其在世界范围内的发病率为0.6
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4/10万。目前治疗GBS的方法主要手段有血浆置换和静脉用免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)，但临床资料表明仅65％的患者对上述方法有效，约20％的患者在治疗1年后仍遗留有严重的残疾，5％的患者因治疗效果差而死亡，给社会、家庭和个人造成极大的负担。根据其病理特征的不同，GBS可分为轴索型和脱髓鞘型两种，其中急性运动轴索型神经病(Acute motor axonal neuropathy,AMAN)是最常见的轴索型GBS。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向性敲低脊髓前角运动神经元AMPK的AMAN小鼠模型构建方法，其特征在于，包括：构建GD3s KO小鼠；制备靶向性敲除小鼠AMPK表达的腺相关病毒AAV2/2Rretro
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AMPK knockdown；将所述腺相关病毒AAV2/2Rretro
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AMPK knockdown注射至所述GD3s KO小鼠中，得到所述小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建GD3s KO小鼠的方法包括：通过同源重组替换GD3s基因的靶基因，插入到载体中，构建重组打靶载体；将所述打靶载体电转至ES细胞中，得到电转ES细胞；将所述电转ES细胞注入小鼠囊胚，再移植至母鼠子宫中，将分娩获得的雄性小鼠与野生型雌性小鼠交配获得嵌合小鼠F0代，F0代杂合子小鼠交配，得到的F1代纯合子小鼠即为所述GD3s KO小鼠。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述靶基因序列如SEQ ID NO:1所示。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述同源重组步骤包括：从BAC克隆子RP23
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18C16和RP23
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378B8中套取得到左右同源臂，将所述同源臂和正筛选标记基因Neo通过酶切连接的方式插入至载体中。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述腺相关病毒AAV2/2Rretro
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AMPK knockdown的制备方法包括：将靶向性敲低AMPK的腺相关病毒载体与辅助...

【专利技术属性】
技术研发人员：单方振，王玉忠，张楠楠，高峰，季庆洁，王子豪，陈运峰，
申请(专利权)人：济宁医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：