一种基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，该方法包括如下步骤：S1：将目标microRNA装载于外泌体中；S2：将装载有目标microRNA的外泌体添加至被转染的细胞培养液中；S3：将步骤S2获得的间充质干细胞挑取克隆，传代培养，获得诱导性多能干细胞。本发明专利技术的方法与现有重编程技术相比在保证高诱导率的基础上具有显著的安全性和无细胞损伤。和无细胞损伤。和无细胞损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法。

技术介绍

[0002]诱导性多能干细胞（iPSCs）技术是通过向终末分化细胞导入特定的转录因子，通过特定基因的表达将体细胞逆转为多能干细胞，使其具备类似于胚胎干细胞的全能性及无限增殖特性。
[0003] iPSCs技术开发早期多采用整合病毒载体介导来实现上述细胞逆转过程。最初使用“逆转录酶病毒”为载体向体细胞中植入几种转录因子基因，通过这些转录因子表达对细胞实现基因重编程，最终获得iPS细胞。而这种方法的缺陷是增加了宿主细胞基因组不稳定性风险，有可能会由于外源基因插入细胞基因组，而干扰了内源基因的表达，从而诱发癌症。
[0004]随着iPS技术不断发展，以及人们对其衍生的细胞产品用于药物开发及临床应用的迫切期望，科学家们正在积极的通过不同策略开发安全性更高的iPSCs诱导技术，以达到有效治疗应用的安全性和产品质量标准要求。
[0005]目前miRN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：S1：将目标microRNA装载于外泌体中；S2：将装载有目标microRNA的外泌体添加至含有被转染的细胞的培养基中进行培养使其转染至细胞内；S3：将步骤S2获得的发生形变的克隆细胞团进行克隆挑取，传代培养，获得诱导性多能干细胞。2.根据权利要求1所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：步骤S1中的装载方法为电穿孔、超声或直接孵育。3.根据权利要求1所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：步骤S1中的外泌体来自人源细胞或牛奶外泌体。4.根据权利要求3所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述人源细胞的类型与被转染细胞的类型相同。5.根据权利要求1所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：步骤S1中的外泌体的制备方法包括如下步骤：a：将细胞接种于培养瓶中，加入完全培养基，培养至融合度约50
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60%，更换为DMEM培养基，继续培养2天后，收集培养上清离心后置于
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80℃温度下待用；b：将细胞上清溶解离心，收集上清后离心，收集沉淀用PBS重悬后，再次离心，沉淀用PBS重悬待用。6.根据权利要求1所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：所述步骤S2中每隔3
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6天转染1次，连续转染三次以上。7.根据权利要求1所述的基于外泌体递送microRNA制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：目标microRNA包括miR
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【专利技术属性】
技术研发人员：曹宁，徐萌，冀美超，张钰浩，刘可可，魏国清，田应洲，张楠，
申请(专利权)人：天九再生医学天津科技有限公司，
类型：发明
国别省市：