一种低密度单层诱导造血干细胞的方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种低密度单层诱导造血干细胞的方法和应用。本发明专利技术的方法诱导出的2D多层立体仿生“造血球”结构的造血干细胞产量高且阳性率稳定在50%以上，并且具有多向分化的潜能，可实现诱导规模化生产，诱导过程避免使用饲养细胞及异源基质胶，有利于向临床转化。有利于向临床转化。有利于向临床转化。

【技术实现步骤摘要】
一种低密度单层诱导造血干细胞的方法和应用


[0001]本专利技术属于干细胞生物
，尤其是涉及一种低密度单层诱导造血干细胞的方法和应用。

技术介绍

[0002]造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。目前临床上普遍使用的造血干细胞主要来源于脐带血、骨髓，但存在以下缺点：1、取材受限制，造血干细胞占比低，数量有限；2、临床使用存在免疫排异现象；3、不同供者存在个体差异，细胞质量不同影响治疗效果。
[0003]人多能干细胞具有无限增殖能力及多向分化潜能，体外规模化培养可以稳定获得大量的人多能干细胞作为种子使用，其分化潜能可以诱导形成造血干细胞。目前人多能干细胞分化为造血干细胞的方法主要有：一是形成拟胚体诱导分化为造血干细胞，但诱导效率不稳定，操作繁琐，拟胚体之间存在异质性等问题；二是OP9、MEF等异源基质细胞与人多能干细胞共培养，模拟造血微环境诱导分化为造血干细胞，但需要依赖异源基质细胞进行诱导分化，临床使用存在安全性问题。且数量受限，细胞发育不够成熟，不利于细胞临床使用。
专利本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低密度单层诱导造血干细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：将人多能干细胞使用诱导分化培养基A制备成细胞悬液，按2
×
104‑4×
104/cm2密度接种于细胞培养容器中记为第0天，并在第0天
‑
第4天每两天使用诱导分化培养基A半量换液，进行低氧低密度单层诱导；S2：第4天
‑
第6天每两天使用诱导分化培养基B进行半量换液，将诱导分化培养基A更换为诱导分化培养基B，并转换为常氧诱导；S3：第6天
‑
第15天每两天使用诱导分化培养基C进行半量换液，将诱导分化培养基B更换为诱导分化培养基C，并进行常氧诱导，最终得到2D多层立体仿生“造血球”。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述诱导分化培养基A为在基础诱导分化培养基中添加GSK3β抑制剂、BMP信号通路激活剂、VEGF、SCF、bFGF、IGF
‑
1中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述诱导分化培养基B为在基础诱导分化培养基中添加TGF
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β抑制剂、BMP4、VEGF、bFGF、SCF、IGF
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1中的一种或几种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述诱导分化培养基C为在基础诱导分化培养基中添加UM729、BMP4、VEGF、bFGF、SCF、Flt3L、IL3、IL6、IGF
‑
1中的一种或几种。5.权利要求1
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4任一所述的方法制备得到的2D多层立体仿生“造血球”。6.权利要求5所述的2D多层立体仿生“造血球”分化为NK细胞、巨噬细胞或红细胞的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述2D多层立体仿生“造血球”分化为NK细胞的方法包括如下步骤：第15天
‑
第20天将诱导分化培养基C更换为NK诱导培养基A后进行常氧诱导；第20天
‑
第...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀美超，张钰浩，曹宁，张楠，刘可可，魏国清，徐萌，田应洲，
申请(专利权)人：天九再生医学天津科技有限公司，
类型：发明
国别省市：