一种复制型dCas9-FokI系统进行高效基因编辑的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种利用epi

【技术实现步骤摘要】
一种复制型dCas9
‑
FokI系统进行高效基因编辑的方法


[0001]本专利技术属于基因编辑
，具体涉及一种利用附着体元件EBNA1/oriP使dCas9(dead Cas9)
‑
FokI融合蛋白持续表达从而对基因组区域进行高效敲除的方法。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9基因编辑系统由一个具有核酸内切酶活性的Cas9蛋白和一条单链向导RNA(single guide，sgRNA)组成。sgRNA与Cas9蛋白结合并引导Cas9蛋白靶向到靶位点进行切割，Cas9的两个切割结构域RuvC和HNH分别对DNA双链进行切割，导致双链断裂(double strand breaks，DSB)。机体自身会启动DNA修复机制，分别是非同源末端连接(non
‑
homologous end joining，NHEJ)和同源重组(homology
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dire本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于基因编辑的载体，其特征在于，所述载体能够表达如下（A1）和（A2），并含有如下（A3）和（A4）：（A1）dCas9
‑
FokI融合蛋白，其编码基因的序列如SEQ ID NO.1所示；（A2）EBNA1蛋白，其编码基因的序列如SEQ ID NO.2所示；（A3）oriP元件，其序列如SEQ ID NO.3所示；（A4）用于插入双sgRNA编码序列的区域，所述区域含有插入位点和位于插入位点上游的启动子。2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，sgRNA编码序列插入位点上游的启动子为U6启动子。3.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，所述载体中还含有药物筛选基因和/或报告基因。4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述药物筛选基因为puromy...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮进学，赵书红，苏寅钰，李新云，熊友才，韩晓松，何瑞高，王晓萱，席晓宁，杨致远，余梅，谢胜松，刘向东，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：