一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用，涉及ACE抑制肽技术领域。本发明专利技术提供的一种鲐鱼ACE抑制肽，包括如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明专利技术通过木瓜蛋白酶酶解、超滤、凝胶色谱层析、液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及ACE抑制肽
，尤其涉及一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]高血压是一种全球性高发心血管疾病，是引起中风、心肌梗塞、心脏病等并发症的主要危险因素，影响全球约15％～20％成年人的健康，导致每年约940万患者死亡，并以12.8％的比例位居全球死亡原因之首。
[0003]血管紧张素转换酶(angiotensin
‑
I
‑
converting
‑
enzyme,ACE)通过肾素
‑
血管紧张素系统(renin
‑
angiotensin
‑
system,RAS)和激肽释放酶
‑
激肽系统(kallikrein
‑
kinin
‑
system,KKS)发挥血压调节的作用，被认为是治疗高血压的重要靶点。通过抑制ACE活性，可实现治疗高血压的目的。许多合成的ACE抑制剂如依那普利、卡托普利和赖诺普利等被广泛用作抗高血压药物。然而，它们具有明显的副作用，包括过敏反应、味觉障碍、肾功能损伤、皮疹和咳嗽等。因此，毒副作用小的食源性ACE抑制肽成为目前的研究热点。
[0004]鲐鱼中含有丰富的蛋白质、脂肪、尼克酸、硫胺素、核黄素、钙、磷、铁等物质，营养价值高，能增强体质，提高机体免疫力和抗病能力，有利于人体的健康。但是目前鲐鱼主要被加工成罐头食品，高值化利用率低，具有很大的开发空间。目前已经有多种从海洋鱼类及其副产物中筛选出的ACE抑制肽，例如远东拟沙丁鱼、大黄鱼、军曹鱼头等。但没有从鲐鱼中分离得到ACE抑制肽的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用。本专利技术通过木瓜蛋白酶酶解、超滤、凝胶色谱层析、液相色谱
‑
串联质谱序列鉴定等技术以及QSAR建模，提高了ACE抑制肽筛选的工作效率，制备并筛选出氨基酸序列分别为PLITT(Pro
‑
Leu
‑
Ile
‑
Thr
‑
Thr)和VPLYT(Val
‑
Pro
‑
Leu
‑
Tyr
‑
Thr)的ACE抑制肽，该ACE抑制肽具有较高的血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用，可用于开发新型的降压药物。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种鲐鱼ACE抑制肽，所述鲐鱼ACE抑制肽包括如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。
[0008]本专利技术还提供了一种上述鲐鱼ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)鲐鱼肉经预处理后，使用木瓜蛋白酶进行酶解，收集酶解上清液，浓缩、干燥，得到粗多肽粉末；
[0010](2)将所述粗多肽粉末配成溶液进行超滤，收集分子量<3kDa的组分；
[0011](3)对所述分子量<3kDa的组分进行层析分离，收集ACE抑制活性最大的多肽组分，进行序列鉴定；
[0012](4)对步骤(3)鉴定的序列进行模型预测，筛选得到鲐鱼ACE抑制肽。
[0013]优选的，所述预处理的方法为将绞碎的鲐鱼肉加水煮沸；所述鲐鱼肉与水的料液比为1：2～4；所述煮沸时间为10～20min。
[0014]优选的，所述木瓜蛋白酶的加酶量为2000～4000U/g；所述酶解的温度为60～80℃，所述酶解的时间为1.5～3.0h，所述酶解的pH为6.5～7.5；所述酶解时的转速为200～500rpm。
[0015]优选的，所述浓缩的方法为旋蒸，所述旋蒸的转速为100～150rpm；所述旋蒸的温度为60～80℃；所述旋蒸的压力为0.090～0.095MPa；所述旋蒸后的酶解上清液体积为原酶解上清液体积的1/10～3/10；所述干燥为冷冻干燥，所述冷冻干燥的温度为
‑
80～
‑
40℃，所述冷冻干燥的压力小于30Pa，所述冷冻干燥的时间为48～60h。
[0016]优选的，所述粗多肽粉末配成的溶液的浓度为10～20g/L。
[0017]优选的，所述层析为SephadexG
‑
15凝胶色谱层析，所述凝胶色谱层析的上样量2～4mL，上样浓度为40～60mg/mL，流速0.5～1.5mL/min。
[0018]优选的，所述序列鉴定采用液相色谱
‑
串联质谱法进行。
[0019]优选的，所述模型预测采用的模型为：y＝1.707+0.090x1‑
0.017x2+0.070x3+0.0668x4‑
0.113x5‑
0.030x6+0.101x7‑
0.015x8‑
0.076x9‑
0.084x
10
‑
0.059x
11
+0.049x
12
‑
0.029x
13
+0.106x
14
+0.054x
15
。
[0020]本专利技术还提供了一种上述鲐鱼ACE抑制肽或上述制备方法制备得到的鲐鱼ACE抑制肽在制备降压药物中的应用。
[0021]本专利技术提供一种鲐鱼ACE抑制肽及其制备方法和应用。本专利技术将传统的ACE抑制肽纯化方法与生物信息学方法相结合，通过木瓜蛋白酶酶解、超滤、凝胶色谱层析、LC
‑
MS/MS分析等技术以及QSAR建模，提高了ACE抑制肽筛选的工作效率。本专利技术发现了新的来源于鲐鱼的ACE抑制肽PLITT(Pro
‑
Leu
‑
Ile
‑
Thr
‑
Thr)和VPLYT(Val
‑
Pro
‑
Leu
‑
Tyr
‑
Thr)，抑制血管紧张素转化酶的IC
50
分别为167.42
±
8.59μM、610.12
±
0.68μM，在体外显示出较高的血管紧张素转化酶(ACE)抑制作用，可将其用于开发新型的降压药物，具有广泛的应用前景。
附图说明
[0022]图1为实施例1中浓度均为250μg/mL的粗多肽、分子量>10kDa的组分、分子量3～10kDa的组分、分子量＜3kDa的组分的ACE抑制率；
[0023]图2为实施例1中SephadexG
‑
15凝胶色谱层析图；
[0024]图3为实施例1中层析后浓度均为166.67μg/mL的6种组分的ACE抑制率；
[0025]图4为实施例1制备得到的鲐鱼ACE抑制肽PLITT的质谱鉴定图；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲐鱼ACE抑制肽，其特征在于，所述鲐鱼ACE抑制肽包括如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。2.一种权利要求1所述的鲐鱼ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)鲐鱼肉经预处理后，使用木瓜蛋白酶进行酶解，收集酶解上清液，浓缩、干燥，得到粗多肽粉末；(2)将所述粗多肽粉末配成溶液进行超滤，收集分子量<3kDa的组分；(3)对所述分子量<3kDa的组分进行层析分离，收集ACE抑制活性最大的多肽组分，进行序列鉴定；(4)对步骤(3)鉴定的序列进行模型预测，筛选得到鲐鱼ACE抑制肽。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述预处理的方法为将绞碎的鲐鱼肉加水煮沸；所述鲐鱼肉与水的料液比为1：2～4；所述煮沸的时间为10～20min。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的加酶量为2000～4000U/g；所述酶解的温度为60～80℃，所述酶解的时间为1.5～3.0h，所述酶解的pH为6.5～7.5；所述酶解时的转速为200～500rpm。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩的方法为旋蒸，所述旋蒸的转速为100～150rpm；所述旋蒸的温度为60～80℃；所述旋蒸的压力为0.090～0.095MPa；所述旋蒸后的酶解上清液体积为原酶解上清液体积的1/10～3/10；所述干燥为冷冻干燥，所述冷冻干燥的温度为
‑
80～
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【专利技术属性】
技术研发人员：王宝贝，张慧，陈洪彬，郑宗平，林娈，
申请(专利权)人：泉州师范学院，
类型：发明
国别省市：