具有可酶促释放的检测部分和条形码部分的缀合物制造技术

本发明专利技术涉及一种具有通式(I)的缀合物X

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有可酶促释放的检测部分和条形码部分的缀合物


[0001]本专利技术涉及一种包含检测部分和抗原识别部分的缀合物，以及此类缀合物用于检测或鉴定靶部分或靶细胞或对来自细胞样品的靶部分或靶细胞进行检测或鉴定的用途，该检测部分和该抗原识别部分可选地经由可酶促降解的间隔子连接，其中该抗原识别部分具有作为条形码的寡核苷酸。

技术介绍

[0002]用检测后能够从细胞中去除的缀合物进行细胞检测是已知的过程。例如，US7776562公开了一种可逆荧光标记过程，其中通过添加竞争分子来打破缀合物中的非共价结合，从细胞中去除缀合物。
[0003]EP3037821A1中公开了一种不同的可逆荧光标记的方法，其中缀合物具有可酶促降解的间隔子。通过添加适当的酶，破坏缀合物，并且从细胞中去除该缀合物的检测部分和抗原识别部分。
[0004]已知的过程使得能够检测细胞样品中的不同细胞。例如，通过用具有不同抗原识别部分的缀合物进行反复染色、检测和脱色，可以检测或区分细胞的数种表型及其在组织中的位置。
[0005]然而，无法对单个的、分离细胞的遗传信息进行分析。
[0006]在不同的
，已知的是，通过将细胞与作为条形码的多核苷酸缀合来鉴定从单个细胞获得的遗传信息。这些方法涉及合成不同多核苷酸的文库，能够对这些多核苷酸进行测序以便鉴定单个细胞。
[0007]例如，在US9388456或US9695468中公开了分离细胞的生物学和必要的硬件。然而，该技术专注于单个分离的细胞，而不涉及细胞间相互作用的组织或细胞培养背景下的细胞。

技术实现思路

[0008]因此，本专利技术的目的是提供一种缀合物，其能够鉴定单个细胞及其在组织上或组织内的定位/位置以及它们的表型。进一步地，用于鉴定的手段应是可擦除的，以便允许进行多个鉴定步骤。
[0009]结果发现，由抗原结合部分与a)条形码部分和b)能够被擦除的检测部分偶联组成的缀合物适用于单细胞鉴定。
[0010]由于可擦除的检测部分，生物标本能够再次经受相同或不同的缀合，而不会受到先前各自标签的干扰。所有条形码部分都保留在细胞上，从而使得能够经由测序使通过结合子检测到的细胞的表型与通过测序检测到的单个细胞的遗传信息之间联系起来。
[0011]因此，本专利技术的目的是一种具有通式(I)的缀合物X
n
‑
P
‑
Y
m
B
o
(I)，其中X是检测部分，
P是间隔子单元，Y是抗原识别部分，B是包含2至300个核苷酸残基的寡核苷酸，并且n、m、o是介于1和100之间的独立整数，其中P和B与Y共价结合，并且X与P共价结合，并且其中X是可擦除的。
[0012]在优选实施例中，间隔子单元P是可酶促降解的。
[0013]本专利技术的又一个目的是一种用于通过以下方式检测细胞上的靶部分的方法：a)提供至少一种具有通式(I)的缀合物X
n
‑
P
‑
Y
m
B
o
(I)，其中X是检测部分，P是间隔子单元，Y是抗原识别部分，B是包含2至300个核苷酸残基的寡核苷酸，并且n、m、o是介于1和100之间的独立整数，其中P和B与Y共价结合，并且X与P共价结合，并且其中X是可擦除的；b)将生物标本的样品与该至少一种缀合物接触，从而标记由该抗原识别部分Y识别的该靶部分；c)检测用具有该检测部分X的该缀合物标记的该靶部分；d)分离用具有该检测部分X的该缀合物标记的该细胞；e)擦除该检测部分X。
附图说明
[0014]图1示出了在用0.25％ PFA(顶部)和2％ PFA(底部)交联两分钟之后，在20x放大倍率下CD3 FITC染色之间的比较。
[0015]图2示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并且用0.25％ PFA(图2a)或0.5％ PFA(图2b)交联之后，通过机械力脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0016]图3示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并且用1％ PFA(图3a)或2％ PFA(图3b)交联之后，通过机械力脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0017]图4示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并且用0.25％ PFA(图4a)或0.5％ PFA(图4b)交联之后，通过酶法处理脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0018]图5示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并且用1％ PFA(图5a)或2％ PFA(图5b)交联之后，通过酶法处理脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0019]图6示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并且用0.25％ PFA(图6a)或0.5％ PFA(图6b)交联之后，通过酶法处理和机械力脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0020]图7示出了在用抗体
‑
荧光染料
‑
寡核苷酸标记CD3(PE)、CD4(APC)和CD8(FITC)并
且用1％ PFA(图7a)或2％ PFA(图7b)交联之后，通过酶法处理和机械力脱离的细胞的流式细胞术分析。
[0021]图8示出了用DAPI和CD4特异性抗体标记的PBMC，该CD4特异性抗体与a)条形码部分(寡核苷酸)和b)能够被擦除的检测部分以及c)可交联的部分偶联。将寡核苷酸与用Cy5标记的反义寡核苷酸杂交。图像显示了DAPI的荧光信号。
[0022]图9示出了用DAPI和CD4特异性抗体标记的PBMC，该CD4特异性抗体与a)条形码部分(寡核苷酸)和b)能够被擦除的检测部分以及c)可交联的部分偶联。将寡核苷酸与用Cy5标记的反义寡核苷酸杂交。图像显示了Cy5的荧光信号。
[0023]图10示出了用DAPI和CD4特异性抗体标记的PBMC，该CD4特异性抗体与a)条形码部分(寡核苷酸)和b)能够被擦除的检测部分以及c)可交联的部分偶联。将寡核苷酸与用Cy5标记的反义寡核苷酸杂交。图像显示了Cy5(红色)和DAPI(绿色)的荧光信号的叠加。
具体实施方式
[0024]术语“共价结合”是指具有解离常数≤10
‑9M的键。术语“擦除检测部分X”是指消除通过X的荧光发射。这能够通过消除X的被检测能力来实现(例如在X作为发色团部分、荧光部分、磷光部分、发光部分、光吸收部分之一的情况下)，也能够通过破坏或降解X的化学性质使得对X进行激发时检测不到发射来实现。
[0025]此类破坏或降解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有通式(I)的缀合物X
n
‑
P
‑
Y
m
B
o
(I)，其中X是检测部分，P是间隔子单元，Y是抗原识别部分，B是包含2至300个核苷酸残基的寡核苷酸，并且n、m、o是介于1和100之间的独立整数，其中P和B与Y共价结合，并且X与P共价结合，并且其中X是可擦除的。2.根据权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述间隔子单元P是可酶促降解的。3.根据权利要求1或2所述的缀合物，其特征在于，所述检测部分X可通过辐射或所述间隔子单元P的酶促降解来擦除。4.根据权利要求1至3中任一项所述的缀合物，其特征在于，所述抗原识别部分Y和/或所述寡核苷酸B具有交联剂单元。5.根据权利要求4所述的缀合物，其特征在于，所述交联剂与抗原的共价结合是由辐射、化学反应或酶促反应引发的。6.根据权利要求1至5中任一项所述的缀合物，其特征在于，所述检测部分选自由以下组成的组：发色团部分、荧光部分、磷光部分、发光部分、光吸收部分、放射性部分、过渡金属和同位素质量标签部分。7.根据权利要求2至6中任一项所述的缀合物，其特征在于，所述可酶促降解的间隔子P选自由以下组成的组：多糖、蛋白质、肽、缩酚酸肽、聚酯、核酸及其衍生物。8.根据权利要求1至7中任一项所述的缀合物，其特征在于，所述抗原识别部分Y是抗体、片段化抗体、片段化抗体衍生物、靶向TCR分子的肽/MHC配合物、细胞粘附受体分子、共刺激分子的受体或人工工程化的结合分子。9.一种根据权利要求1至8中任一项所述的缀合物的文库，所述文库包括至少10种具有带不同序列的寡核苷酸B的缀...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：美天施生物科技有限两合公司，
类型：发明
国别省市：