用于猴痘病毒检测的引物探针组及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及用于猴痘病毒检测的引物探针组及试剂盒，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术提供了用于猴痘病毒检测的引物探针组，所述引物探针组包括靶向F3L基因的引物探针组、靶向B6R基因的引物探针组和靶向RNase P基因的引物探针组。所述引物探针组通过序列设计有效避免了多个引物探针组之间的相互干扰，并且，所述引物探针组以RNase P基因作为内标对待测样本的采集、运输和提取过程进行监控，有效避免了检测结果的假阴性，因此，使用所述引物探针组对待测样本进行猴痘病毒定量检测具有准确度高、特异性强和灵敏度高的优点，极具应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
用于猴痘病毒检测的引物探针组及试剂盒


[0001]本专利技术涉及用于猴痘病毒检测的引物探针组及试剂盒，属于分子生物学


技术介绍

[0002]猴痘是由猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)感染所致的一种病毒性人兽共患病。猴痘发病早期出现发热、寒战、头痛、嗜睡、乏力、背部疼痛和肌痛等前驱症状。90％猴痘患者出现明显的浅表淋巴结肿大，如颈部、腋窝、腹股沟等。猴痘发病后1～3天出现皮疹。皮疹首先出现在面部，逐渐蔓延至四肢，手心和脚掌均可出现皮疹。皮疹经历从斑疹、丘疹、疱疹、脓疱和结痂几个阶段，不同形态的皮疹可同时存在。其中，疱疹和脓疱疹多为球形，直径约0.5～1厘米，质地较硬，可伴明显痒感和疼痛。疱疹数量从几个到数千个不等，多呈离心性分布，可累及口腔黏膜、消化道、生殖器、结膜和角膜等，病程约2～4周，结痂脱落后可遗留红斑或色素沉着，甚至瘢痕，瘢痕持续时间可长达数年。部分猴痘患者可出现并发症，包括皮损部位继发细菌感染、腹泻引起的严重脱水、支气管肺炎、脑炎和角膜感染等。
[0003]及时进行猴痘病毒检测对患者的病情诊断和后续治疗十分关键。使用荧光定量PCR检测技术对患者进行检测所得的阳性结果是确诊猴痘的金标准。而对于荧光定量PCR检测技术来说，待扩增靶标的选取十分关键，选取合适待扩增靶标后，其对相应引物探针组的设计也要求很高，引物探针组的设计是影响荧光定量PCR成功与否以及其结果是否可靠的关键因素之一。亟需设计更多扩增效果更佳的引物探针组，以提高使用荧光定量PCR检测技术进行猴痘病毒检测的准确度、特异性和灵敏度。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了用于猴痘病毒检测的引物探针组，所述引物探针组包括靶向F3L基因的引物探针组、靶向B6R基因的引物探针组和靶向RNase P基因的引物探针组。
[0005]在本专利技术的一种实施方式中，所述引物探针组由靶向F3L基因的引物探针组、靶向B6R基因的引物探针组和靶向RNase P基因的引物探针组组成。
[0006]在本专利技术的一种实施方式中，所述靶向F3L基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物F3L
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物F3L
‑
R和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针F3L
‑
P。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述靶向B6R基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物B6R
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物B6R
‑
R和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的探针B6R
‑
P。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述靶向RNase P基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向引物RNase P
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的反向引物RNase P
‑
R和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的探针RNase P
‑
P。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述探针F3L
‑
P、探针B6R
‑
P和探针RNase P
‑
P上标记有荧光基团和荧光淬灭基团。
[0010]在本专利技术的一种实施方式中，所述探针F3L
‑
P、探针B6R
‑
P和探针RNase P
‑
P的5
’
端标记有荧光基团，3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述荧光基团包括FAM、VIC、CY5、ROX、HEX、JOE、NED、Texas Red和CY3中的一种或一种以上。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述荧光淬灭基团包括BHQ
‑
1、BHQ
‑
2和BHQ
‑
3中的一种或一种以上。
[0013]本专利技术还提供了用于猴痘病毒检测的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物探针组。
[0014]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液。
[0015]在本专利技术的一种实施方式中，所述缓冲液的pH为7.0～9.0。
[0016]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括阴性对照；所述阴性对照为无菌水。
[0017]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括阳性对照；所述阳性对照为猴痘假病毒或者质控品；所述质控品包括F3L基因、B6R基因和RNase P基因。
[0018]在本专利技术的一种实施方式中，所述F3L基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述B6R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述RNase P基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。
[0019]在本专利技术的一种实施方式中，所述试剂盒还包括样本采集液；所述样本采集液的成分包含水、碳酸氢钠、碳酸钠、吐温
‑
20、甲酚红以及酵母核糖核酸。
[0020]在本专利技术的一种实施方式中，所述水为无菌水。
[0021]本专利技术还提供了一种定量检测猴痘病毒的方法，所述方法非疾病的诊断和治疗目的，所述方法为：使用上述试剂盒对待测样本进行检测。
[0022]在本专利技术的一种实施方式中，所述方法包含如下步骤：
[0023]步骤一：对待测样本进行病毒裂解和核酸纯化，得核酸提取液；
[0024]步骤二：使用上述试剂盒对核酸提取液进行荧光定量PCR，并根据荧光定量PCR所得荧光信号数据判断待测样本中是否存在猴痘病毒。
[0025]本专利技术还提供了上述引物探针组或上述试剂盒或上述方法在猴痘病毒定量检测中的应用，所述应用非疾病的诊断和治疗目的。
[0026]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0027]1、本专利技术提供了用于猴痘病毒检测的引物探针组，所述引物探针组包括靶向F3L基因的引物探针组、靶向B6R基因的引物探针组和靶向RNase P基因的引物探针组；所述靶向F3L基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物F3L
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物F3L
‑
R和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针F3L
‑
P；所述靶向B6R基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物B6R
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物B6R
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R和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的探针B6R
‑
P；所述靶向RNase P基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向引物RNase P<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于猴痘病毒检测的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括靶向F3L基因的引物探针组、靶向B6R基因的引物探针组和靶向RNase P基因的引物探针组。2.如权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述靶向F3L基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物F3L
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物F3L
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R和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针F3L
‑
P。3.如权利要求1或2所述的引物探针组，其特征在于，所述靶向B6R基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物B6R
‑
F、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物B6R
‑
R和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的探针B6R
‑
P。4.如权利要求1～3任一项所述的引物探针组，其特征在于，所述靶向RNase P基因的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的正向引物RNase P
‑
F、核...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蕾，欧卫军，朱益丹，陈建军，罗希，
申请(专利权)人：南通伊仕生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：