一步法检测并区分痘类病毒的多重荧光定量PCR试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一步法检测并区分痘类病毒的多重荧光定量PCR试剂盒。包含定量PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、标准品、阳性对照品、阴性对照品。所述痘类病毒包括猴痘病毒、牛痘病毒和水痘病毒。本发明专利技术根据三种痘类病毒及内标RNase P的高度保守的核苷酸序列分别设计高特异性的引物探针，通过一个PCR反应从血液、痘泡液和皮疹拭子等样本中同时检测并区分猴痘病毒、牛痘病毒和水痘病毒的存在，并以RNase P作为评价扩增体系的内标，较单重荧光定量PCR方法更简便快捷、成本低，且敏感性和特异性及重复性均较好。对待检病毒进行全封闭检测、单管实时定量，根据病毒感染的拷贝数，可高效、快速地筛查并鉴别三种痘类病毒。速地筛查并鉴别三种痘类病毒。速地筛查并鉴别三种痘类病毒。

【技术实现步骤摘要】
一步法检测并区分痘类病毒的多重荧光定量PCR试剂盒


[0001]本专利技术属生物
，涉及荧光定量PCR检测试剂盒，具体涉及检测感染性病毒的多重荧光定量PCR试剂盒，是一种一步法多重实时荧光定量PCR在同一个反应管内检测血液、痘泡液和皮疹拭子等样本中猴痘病毒(MPXV)、牛痘病毒(CPXV)、水痘病毒(VARV)和核糖核酸酶(RNase P)的核酸检测技术，可应用于猴痘病毒、牛痘病毒和水痘病毒的快速筛查和鉴别的流行病学研究。

技术介绍

[0002]猴痘是由猴痘病毒引起的一种以发热、皮疹和淋巴结肿大为主要特症的人畜共患的传染性疾病，病死率为1％
‑
10％。它属于痘病毒科，与天花病毒、牛痘病毒同属正痘病毒属。猴痘病毒主要在非洲中部和西部流行，然而，最近猴痘病毒在非洲以外的国家陆续报道并在局部地区流行，包括美国、中国、英国等国家和地区。世界卫生组织(WHO)于2022年7月23日宣布，在2019冠状病毒疾病大流行的背景下，正在爆发的猴痘疫情是国际关注的突发公共卫生事件。确诊病例数量迅速增加可能对国际社会构成威胁。猴痘病毒主要通过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种一步法检测并区分痘类病毒的多重荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述PCR试剂盒含有定量PCR反应液、酶混合液、引物与探针混合液、标准品、阳性对照品、阴性对照品；其中定量PCR反应液包含有PCR反应缓冲液、酶混合液，引物与探针混合液包含四组引物和相应的四种不同荧光标记的探针；荧光定量PCR检测用猴痘病毒、牛痘病毒、水痘病毒和核糖核酸酶的上/下游引物和及相应的特异性探针序列如下：上游引物MPXV
‑
F:5
’‑
GTCAGCAGTGGCGATTTTCT
‑3’
下游引物MPXV
‑
R:5
’‑
TGAACCAGATGGTCCTCTCAATA
‑3’
特异性探针MPXV
‑
P:5
’‑
FAM
‑
TAATAAACACCCACGTAAATACAAAACAGA
‑
BHQ1
‑3’
上游引物CPXV
‑
F:5
’‑
CAGCATTAATTATATTGTCGGC
‑3’
下游引物CPXV
‑
R:5
‑
TGAACCAGATGGTCCGCTCAATA
‑3’
特异性探针CPXV
‑
P:5
’‑
ROX
‑
TAATAAACGTTCACGTAAATACAAAACAGA
‑
BHQ2
‑3’
上游引物VARV
‑
F:5
’‑
GGTGAGGGAGTTCCAACAGTAC
‑3’
下游引物VARV
‑
R：5
’‑
TCTCGTCCAATCACTACATCGT
‑3’
特异性探针VARV
‑
P:5
’‑
CY5
‑
CCGTGTCGTCACCGTGTAAATATTC
‑
BHQ3
‑3’
上游引物RNase P
‑
F:5
’‑
AGATTTGGACCTGCGAGCG
‑3’
下游引物RNase P
‑
R：5
’‑
GAGCGGCTGTCTCCACAAGT
‑3’
特异性探针RNase P

【专利技术属性】
技术研发人员：李辉，门光琦，赵蔚诗，师琪，陆国华，
申请(专利权)人：珠海辉睿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：