一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法技术

本发明专利技术属于检测和鉴定人副流感病毒技术领域，公开了一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法，本发明专利技术提供的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法通过采集样品将荧光qRT

【技术实现步骤摘要】
一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法


[0001]本专利技术属于检测和鉴定人副流感病毒
，尤其涉及一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法。

技术介绍

[0002]人类副流感病毒(hHPIVs)常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。与RSV一样，人副流感病毒可以造成反复发作的上呼吸道感染(如感冒和喉咙痛)。它也能造成严重的反复感染的下呼吸道疾病(如肺炎，支气管炎和细支气管炎)，特别是在老年人中和有免疫缺陷人群中。人类副流感病毒的四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。I型和II型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，I型是这种儿童喉气管支气管炎的主要原因，而II型次之。I型和II型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病。III型经常导致肺炎和细支气管炎。IV型很难检出，可能是因为它很少导致严重的疾病。人类副流感病毒的潜伏期一般在1～7天左右。然而，现有检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法检测慢，检测结果不准确。
[0003]综上所述，现有技术存在的问题是：现有检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法检测慢，检测结果不准确。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法。
[0005]本专利技术是这样实现的，一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法包括以下步骤：
[0006]步骤一，采集样品；
[0007]步骤二，将荧光qRT
‑
PCR反应液(hPIV3
‑
qRT
‑
PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀，10000rpm离心11s；
[0008]步骤三，设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)；
[0009]步骤四，收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型。
[0010]进一步，所述设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)包括：
[0011]每个测试反应体系配制如下表：
[0012]试剂每个反应加入的量N个反应加入的量荧光PCR反应液11uLN
×
11uL酶混合物5uLN
×
5uL总量16uLN
×
16uL
[0013]计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入16uL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/
阳性对照(hPIV3
‑
PTC)4uL，10000rpm瞬时离心10秒。
[0014]进一步，所述收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型方法：
[0015]将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内；
[0016]推荐循环条件：
[0017]反转录(Reverse Transcription)1循环51℃for 31min；
[0018]预变性1循环96℃for 6min；
[0019]PCR扩增40循环96℃for 11sec；
[0020]56℃for46 sec；
[0021]在61℃延伸时收集荧光信号，通过荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型。
[0022]进一步，所述采集样品方法如下：
[0023](1)血清采集：用一次性无菌注射器抽取静脉血，注入无菌的干燥玻璃管，室温放置61min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.6mL灭菌离心管；
[0024](2)血浆采集：用一次性无菌注射器抽取静脉血，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合，使抗凝剂与静脉血充分混匀，11min后即可分离出血浆，转移至灭菌离心管；
[0025](3)拭子、分泌物等样品采集：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500uL PBS或生理盐水，剧烈振荡；棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用；
[0026](4)病灶组织样品采集：称取组织约0.2g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加2mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于灭菌离心管中。
[0027]进一步，所述静脉血为2mL。
[0028]进一步，所述室温为26℃。
[0029]进一步，所述振荡30s。
[0030]进一步，所述颠倒玻璃管混合11次。
[0031]进一步，所述生理盐水为2mL。
[0032]进一步，所述灭菌离心管为1.6mL。
[0033]本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术提供的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法通过采集样品将荧光qRT
‑
PCR反应液(hPIV3
‑
qRT
‑
PCRMIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀，10000rpm离心11s；设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型；可以大大提高检测和鉴定人副流感病毒3型速度及准确性。
附图说明
[0034]图1是本专利技术实施提供的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法流程图。
[0035]图2是本专利技术实施提供的采集样品方法流程图。
具体实施方式
[0036]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0037]下面结合附图对本专利技术的应用原理作进一步描述。
[0038]如图1所示，本专利技术提供一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法包括以下步骤：
[0039]S101，采集样品；
[0040]S102，将荧光qRT
‑
PCR反应液(hPIV3
‑
qRT
‑
PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀，10000rpm离心11s；
[0041]S103，设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)；
[0042]S104，收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型。
[0043]本专利技术提供设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)包括：
[0044]每个测试反应体系配制如下表：
[0045]试剂每个反应加入的量N个反应加入的量荧光PCR反应液11uLN
×
11uL酶混合物5uLN
×
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法，其特征在于，所述检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法包括以下步骤：步骤一，采集样品；步骤二，将荧光qRT
‑
PCR反应液、酶混合物，冰上融化并振荡混匀，10000rpm离心11s；步骤三，设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)；步骤四，收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型。2.如权利要求1所述的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法，其特征在于，所述设所需要的PCR反应管管数为N(N＝样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)包括：每个测试反应体系配制如下表：试剂每个反应加入的量N个反应加入的量荧光PCR反应液11uLN
×
11uL酶混合物5uLN
×
5uL总量16uLN
×
16uL计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入16uL，向每管中加入处理后样品4uL，10000rpm瞬时离心10秒。3.如权利要求1所述的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法，其特征在于，所述收集荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型方法：将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内；推荐循环条件：反转录1循环51℃for 31min；预变性1循环96℃for 6min；PCR扩增40循环96℃for 11sec；56℃for46 sec；在61℃延伸时收集荧光信号，通过荧光信号来检测和鉴定人副流感病毒3型。4.如权利要求1所述的检测和鉴定人副流感病毒3型的探针和方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢文艳，闫绍峰，李晓菲，
申请(专利权)人：山东第一医科大学第一附属医院山东省千佛山医院，
类型：发明
国别省市：