一种CD274基因检测的探针引物组合、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种CD274基因检测的探针引物组合、试剂盒及检测方法，通过荧光定量PCR检测，可以对检测组织或外周血的CD274基因表达与表达调控，从而有效地反映肿瘤局部或整体的PD

【技术实现步骤摘要】
一种CD274基因检测的探针引物组合、试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，特别涉及一种CD274基因检测的探针引物组合、试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]程序性死亡受体
‑
配体1(PD
‑
L1)在肿瘤细胞上的表达是免疫逃逸的机制之一，因为它抑制了细胞毒性淋巴细胞的功能活性，而使细胞毒性淋巴细胞不会攻击肿瘤细胞。对于多种肿瘤如非小细胞肺癌(NSCLC)、黑色素瘤等，免疫组化表达PD
‑
L1是检查点阻断免疫治疗的第一个预测性生物标志物。PD
‑
L1免疫组化的解释需要熟悉表达模式，因为PD
‑
L1在树突状细胞，巨噬细胞，肥大细胞，T和B淋巴细胞，内皮和肿瘤细胞上表达。
[0003]CD274基因的表达产物为PD
‑
L1，CD274在组织和外周血的表达调控水平，可以有效反映肿瘤局部或整体的PD
‑
L1表达水平。因此，可以通过检测CD274基因含量来判断PD
‑
L1表达，从而确定或排除肿瘤的抑制性，为PD
‑
L1的临床检测提供辅助和补充。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一种CD274基因检测的探针引物组合、试剂盒及检测方法，旨在提供一种CD274基因检测的探针引物组合。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出的CD274基因检测的探针引物组合，包括上游引物、下游引物和探针，其中，所述上游引物、下游引物和探针的序列为：
[0006]上游引物：5
′‑
GGCCCTCTGTCTGTAGCTAC
‑3′
；
[0007]下游引物：5
′‑
TATCCAGGAACCCTTGGCAC
‑3′
；
[0008]探针：5
′‑
x
‑
TGTGCATGGAGAGGAAGACC
‑
y
‑3′
，所述x为荧光报告基团，所述y为荧光淬灭基团。
[0009]在一实施例中，所述x为FAM基团，所述y为BHQ1基团。
[0010]本专利技术还提出一种CD274基因检测试剂盒，包括上述的CD274基因检测的探针引物组合。
[0011]在一实施例中，所述CD274基因检测试剂盒还包括内参基因的引物探针组，所述内参基因的引物探针组包括内参基因的上游引物、内参基因的下游引物和内参基因的探针，序列为：
[0012]内参基因的上游引物：5
′‑
AGACTGGACAGCATACGAGG
‑3′
；
[0013]内参基因的下游引物：5
′‑
G AAAGGAAGGCGTGTAGGAC
‑3′
；
[0014]内参基因的探针：5
′‑
q
‑
CGCCTGTTCTTTCTGCAAGT
‑
z
‑3′
，所述q为内参探针的荧光报告基团，所述z为内参探针的荧光淬灭基团。
[0015]在一实施例中，所述q为VIC基团，所述z为BHQ1基团。
[0016]在一实施例中，所述CD274基因检测试剂盒还包括逆转录酶、DNA聚合酶和RNA酶抑制剂；和/或，所述CD274基因检测试剂盒还包括PCR反应液，所述PCR反应液包括反应缓冲液
和dNTPs。
[0017]在一实施例中，所述CD274基因检测试剂盒还包括核酸提取液，所述核酸提取液包括Trizol试剂、溴氯丙烷、异丙醇、乙醇溶液和/或PEG 8000分离液。
[0018]本专利技术还提出一种CD274基因检测方法，应用上述的CD274基因检测的探针引物组合或上述的CD274基因检测试剂盒，包括如下步骤：
[0019]提取待测样本的核酸，得到核酸样本；
[0020]以提取的核酸样本作为模板，进行逆转录反应；
[0021]加入如权利要求1所述上游引物和下游引物、探针，进行PCR扩增反应；
[0022]在PCR扩增反应过程中检测荧光信号。
[0023]在一实施例中，所述PCR扩增反应中，PCR扩增反应程序为：90℃
‑
100℃预变性3
‑
8min，1
‑
2个循环；90℃
‑
100℃扩增8s
‑
12s、55℃
‑
60℃扩增25s
‑
30s，35
‑
45个循环；和/或，所述逆转录反应中，逆转录反应程序为：42℃
‑
55℃反应10
‑
15min，1
‑
2个循环。
[0024]在一实施例中，所述PCR扩增反应在预变性和扩增后，还包括熔解反应。
[0025]本专利技术提供了一种CD274基因检测的探针引物组合，通过荧光定量PCR检测，可以对检测组织或外周血的CD274基因表达与表达调控，从而有效地反映肿瘤局部或整体的PD
‑
L1表达水平，大大降低了组织病理染色检测PD
‑
L1受到表达组织异质性的影响，因此，可以作为肿瘤患者组织PD
‑
L1检测的有效替代和补充。并且，本专利技术的技术方案对CD274基因检测灵敏度高，特异性强，解决现有技术中检测特异性差的问题。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0027]图1为一实施例中非小细胞肺癌(NSCLC)患者PD
‑
L1染色检测阳性组织图；
[0028]图2为图1非小细胞肺癌(NSCLC)患者PD
‑
L1染色检测阴性组织切片图。
[0029]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0030]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]下面将结合具体实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0032]实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD274基因检测的探针引物组合，其特征在于，包括上游引物、下游引物和探针，其中，所述上游引物、下游引物和探针的序列为：上游引物：5
′‑
GGCCCTCTGTCTGTAGCTAC
‑3′
；下游引物：5
′‑
TATCCAGGAACCCTTGGCAC
‑3′
；探针：5
′‑
x
‑
TGTGCATGGAGAGGAAGACC
‑
y
‑3′
，所述x为荧光报告基团，所述y为荧光淬灭基团。2.如权利要求1所述的CD274基因检测的探针引物组合，其特征在于，所述x为FAM基团，所述y为BHQ1基团。3.一种CD274基因检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2任意一项所述的CD274基因检测的探针引物组合。4.如权利要求3所述的CD274基因检测试剂盒，其特征在于，还包括内参基因的引物探针组，所述内参基因的引物探针组包括内参基因的上游引物、内参基因的下游引物和内参基因的探针，序列为：内参基因的上游引物：5
′‑
AGACTGGACAGCATACGAGG
‑3′
；内参基因的下游引物：5
′‑
G AAAGGAAGGCGTGTAGGAC
‑3′
；内参基因的探针：5
′‑
q
‑
CGCCTGTTCTTTCTGCAAGT
‑
z
‑3′
，所述q为内参探针的荧光报告基团，所述z为内参探针的荧光淬灭基团。5.如权利要求4所述的CD274基因检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，周书雄，
申请(专利权)人：深圳海普洛斯医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：