一种外泌体透射电镜样品制备方法技术

本申请涉及透射电镜领域，特别涉及一种外泌体透射电镜样品制备方法，包括以下步骤：1)将外泌体配置在含碘克沙醇的缓冲体系中，制得样品溶液；2)将步骤1)所述样品溶液吸附于载体上，制成预电镜样品；3)去除步骤2)所述预电镜样品表面的溶液，经漂洗和负染后，晾干制得透射电镜样品。本发明专利技术制备得到的外泌体电镜样品不坍塌，呈现出负染均匀、背景干净、外泌体轮廓清晰且完整的成像效果，可以获得结构完整不坍塌的外泌体图像，可以使用图像处理软件进行自动化统计，使得外泌体粒径统计更加精准和便捷。捷。捷。

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体透射电镜样品制备方法


[0001]本申请涉及透射电镜领域，特别涉及一种外泌体透射电镜样品制备方法。

技术介绍

[0002]外泌体(Exosomes)是一种由细胞分泌的纳米级别(30
‑
150nm)的胞外囊泡，发挥细胞间通讯的作用，参与很多重要的生理病理过程，如免疫应答、肿瘤转移等。外泌体具有天然的分子转运特性，与合成的纳米颗粒相比，无免疫原性，在体内的循环长而稳定，在药物载体领域有巨大的应用潜力。
[0003]透射电镜成像是外泌体纳米结构形貌、粒径的重要表征方法。但由于这些囊泡结构的内容物是液体状态，不是实质纳米结构，在电镜制样过程中，容易在铀盐负染过程的离子浓度差使得囊泡破裂或坍塌，呈现出不佳的电镜成像效果，从而影响形貌和粒径的统计结果。有些方法中，需使用戊二醛等固定液对外泌体进行固定，从而保持外泌体的形态。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，为解决现有技术中外泌体电镜样品制备过程中囊泡破裂或坍塌，影响电镜成像效果的技术问题，本申请的目的在于提供一种外泌体透射电镜样品制备方法，用于解决现有技术中的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本申请一方面提供一种外泌体透射电镜样品制备方法包括以下步骤：
[0006]1)将外泌体配置在含碘克沙醇的缓冲体系中，制得样品溶液；
[0007]2)将步骤1)所述样品溶液吸附于载体上，制成预电镜样品；
[0008]3)去除步骤2)所述预电镜样品表面的溶液，经漂洗和负染后，晾干制得透射电镜样品。
[0009]在本申请的任意实施例中，步骤1)中，所述碘克沙醇的浓度为3％～45％(w/v)。
[0010]在本申请的任意实施例中，步骤1)中，所述缓冲体系包括磷酸盐缓冲溶液，三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、吗啉丙磺酸缓冲溶液、羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液中的一种或多种的组合。
[0011]在本申请的任意实施例中，步骤2)中，所述吸附时间为1～10min；
[0012]在本申请的任意实施例中，步骤2)中，所述载体选自超薄碳铜网、常规碳膜铜网、增强型碳膜铜网中的一种或多种。
[0013]在本申请的任意实施例中，步骤3)中，所述漂洗液选自生理盐水、磷酸缓冲液、铀液中的一种或多种；优选地，所述漂洗液为乙酸双氧铀溶液；更优选地，所述漂洗液为1～2％(m/v)乙酸双氧铀溶液。所述漂洗的时间为10～30s。
[0014]在本申请的任意实施例中，步骤3)中，所述负染液选自磷钨酸钠、磷钨酸钾、铀液中的一种或多种；优选地，所述负染液为乙酸双氧铀溶液；更优选地，所述负染液为1～2％(m/v)乙酸双氧铀溶液。所述负染的时间为1～10min。
[0015]本申请第二方面提供如所述的外泌体透射电镜样品制备方法制备获得的透射电镜样品。
[0016]与现有技术相比，本申请的有益效果为：
[0017]1、本制样方法对外泌体要求较低，不限外泌体来源、制备方法、纯化方法等，不限外泌体的纯度、功能性负载情况等，不限外泌体溶液环境，不限外泌体的密度，可以最大程度地使得外泌体颗粒沉降在载网上。
[0018]2、本专利技术制备得到的外泌体电镜样品不坍塌，呈现出负染均匀、背景干净、外泌体轮廓清晰且完整的成像效果。
[0019]3、与传统制样方法比较，不添加戊二醛固定，也可以获得结构完整不坍塌的外泌体图像，可以使用图像处理软件进行自动化统计，使得外泌体粒径统计更加精准和便捷。
附图说明
[0020]图1显示为对照组不固定直接负染电镜制样制得样品拍照得到的电镜图。
[0021]图2显示为使用2.5％戊二醛固定电镜制样方法制得样品拍照得到的电镜图。
[0022]图3显示为使用5％碘克沙醇缓冲溶液电镜制样方法制得样品拍照得到的电镜图。
[0023]图4显示为使用25％碘克沙醇缓冲溶液电镜制样方法制得样品拍照得到的电镜图。
具体实施方式
[0024]为了使本申请的专利技术目的、技术方案和有益效果更加清晰，下面结合实施例对本申请作进一步说明。应理解，所述实施例只用于解释本申请，并非用于限定申请的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法，熟悉此技术的人士可由本说明所揭露的内容容易地了解本申请的其他优点及功效。
[0025]本申请所公开的“范围”以下限和上限的形式来限定，给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的，选定的下限和上限限定了特别范围的边界。这种方式进行限定的范围可以是包括端值或不包括端值的，并且可以进行任意地组合，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，如果针对特定参数列出了60～120和80～110的范围，理解为60～110和80～120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1～3、1～4、1～5、2～3、2～4和2～5。在本申请中，除非有其他说明，数值范围“a～b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0～5”表示本文中已经全部列出了“0～5”之间的全部实数，“0～5”只是这些数值组合的缩略表示。另外，当表述某个参数为≥2的整数，则相当于公开了该参数为例如整数2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12等。
[0026]如果没有特别的说明，本申请的所有步骤可以顺序进行，也可以随机进行，优选是顺序进行的。例如，所述方法包括步骤1)和2)，表示所述方法可包括顺序进行的步骤1)和2)，也可以包括顺序进行的步骤2)和1)。
[0027]本申请的专利技术人经过大量探索研究，发现了一种外泌体透射电镜样品制备方法，代替常规的制备方法，从而解决现有方法中外泌体容易破裂和坍塌的问题。在此基础上完成了本申请。
[0028]本申请提供一种外泌体透射电镜样品制备方法，包括以下步骤：
[0029]1)将外泌体配置在含碘克沙醇的缓冲体系中，制得样品溶液；
[0030]2)将步骤1)所述样品溶液吸附于载体上，制成预电镜样品；
[0031]3)去除步骤2)所述预电镜样品表面的溶液，经漂洗和负染后，晾干制得透射电镜样品。
[0032]本申请所提供的外泌体透射电镜样品制备方法中，步骤1)中，所述外泌体包括不限来源、不限纯化方式和纯度的外泌体。所述外泌体例如可以来自细胞培养液、血浆、尿液、脑脊液、乳液、淋巴液或唾液等。应当理解，上述仅作为举例说明，并非用于限制，实际上，任何外泌体均适用于本专利技术。在本申请的具体实施例中，所述外泌体包括天然外泌体和负载核酸、化学药物小分子、多肽等功能化的外泌体，以及与脂质体融合的杂合外泌体。应当理解，上述外泌体仅作为举例说明，并非用于限制，实际上，空载或载带任何物质的外泌体均适用于本专利技术。
[0033]本申请所提供的外泌体透射电镜样品制备方法中，步骤1)中，所述碘克沙醇的浓度为3％～45％(m/v)，优选地，所述碘克沙醇的浓度为20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体透射电镜样品制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将外泌体配置在含碘克沙醇的缓冲体系中，制得样品溶液；2)将步骤1)所述样品溶液吸附于载体上，制成预电镜样品；3)去除步骤2)所述预电镜样品表面的溶液，经漂洗和负染后，晾干制得透射电镜样品。2.如权利要求1所述的外泌体透射电镜样品制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述碘克沙醇的浓度为3％～45％(w/v)。3.如权利要求3所述的外泌体透射电镜样品制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述缓冲体系包括磷酸盐缓冲溶液，三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、吗啉丙磺酸缓冲溶液、羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲溶液中的一种或多种的组合。4.如权利要求1所述的外泌体透射电镜样品制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述吸附时间为1～10分钟。5.如权利要求1所述的外泌体透射电镜样品制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述载体选自超薄碳铜网、常规碳膜铜网...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏凯，崔呈俊，周婷，赵建龙，
申请(专利权)人：上海前瞻创新研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：