乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法制造技术

本发明专利技术涉及乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法。本文描述了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的组合物和方法。描述了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的RNA干扰(RNAi)引发剂和RNAi引发剂偶联物。还描述了包括一种或多种HBV RNAi引发剂和任选的一种或多种其它治疗剂的药物组合物。所述HBV RNAi引发剂在体内向受感染的肝脏的递送可提供HBV基因表达的抑制和治疗。递送可提供HBV基因表达的抑制和治疗。递送可提供HBV基因表达的抑制和治疗。

【技术实现步骤摘要】
乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法
[0001]本申请是申请日为2016年8月5日的中国专利申请201680046291.5“乙型肝炎病毒感染的RNAi疗法”的分案申请。

技术介绍

[0002]乙型肝炎病毒是严格亲肝的含双链DNA的病毒。虽然DNA是遗传物质，其复制循环涉及反转录步骤以从前基因组RNA复制为DNA。乙型肝炎病毒被分类为肝脱氧核糖核酸病毒(Hepadnaviruses)的一个成员并且属于肝脱氧核糖核酸病毒科。成人初次感染乙型肝炎病毒引起具有器官炎症、发热、黄疸和血液中肝转氨酶升高的症状的急性肝炎。这些不能克服病毒感染的病人在多年内经受慢性疾病过程，具有增加的发展成肝硬化或肝癌的风险。乙型肝炎病毒感染的母亲向新生婴儿的母婴传播也引起慢性肝炎。
[0003]在被肝细胞摄入之后，核衣壳被转移至核并且释放DNA。此时，DNA链合成完成并且修复缺口得到共价闭合环状(covalently closed circular)(ccc)的3.2kb的超螺旋DNA。cccDNA作为四个主要病毒mRNA转录的模板，其为3.5、2.4、2.1和0.7kb长。所有的mRNA是5
’‑
加帽并且在3
’‑
末端多腺苷酸化。在所有四个mRNA的3
’‑
末端存在重叠序列。
[0004]3.5kb mRNA作为用于核心蛋白和聚合酶生产的模板。此外，相同的转录物作为前基因组复制中间体并且允许病毒聚合酶引发反转录为DNA。需要核心蛋白用于核衣壳形成。另外，顺序加工活动(sequential processing activity)将一些核心蛋白转化为可分泌的e
‑
抗原。在血液中富含e
‑
抗原与乙型肝炎病毒在肝脏中的复制相关并且作为监测疾病过程的重要诊断标记。
[0005]2.4和2.1kb mRNA携带用于表达病毒大、中和小型表面抗原的开放阅读框pre
‑
S1、pre
‑
S2和S。s
‑
抗原与感染性、完整颗粒相关。另外，感染的患者的血液也含有单独来自s
‑
抗原，不含基因组DNA或聚合酶的非感染性颗粒。这些颗粒的功能还未完全知晓。完全和持续的在血液中检测不到s
‑
抗原被认为是乙型肝炎病毒清除，由此成功治愈的可靠指标。
[0006]0.7kb mRNA编码X蛋白。这个基因产物对于病毒基因的有效转录很重要并且也作为宿主细胞基因表达的反式激活蛋白。后者的活性似乎对于在肝癌发展中肝细胞转化很重要。
[0007]具有超过6个月的在血液中可检测的s
‑
抗原、e
‑
抗原或病毒DNA的患者被认为是受到慢性感染。作为反转录酶活性抑制剂的核苷类似物是很多患者的典型的首选治疗选项。拉米夫定(Lamivudine)、替诺福韦(Tenofovir)或恩替卡韦(Entecavir)抑制乙型肝炎病毒的复制，有时达到不可检测的水平。肝功能的改善和肝炎症的减少是最重要的益处。然而，只有很少的患者在治疗结束之后实现完全和持续的缓解。此外，乙型肝炎病毒在增加的治疗持续期间产生药物耐药性。对于同时感染了乙型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒的患者而言这是特别困难的。两种病毒都易受核苷类似物药物的影响并且可能共同产生耐药性。
[0008]第二个治疗选项是给予α
‑
干扰素。在此，患者在6个月期间接受高剂量的α
‑
干扰素。亚洲基因型B有非常不良的反应率。已证明，与丁型肝炎病毒或人免疫缺陷病毒同时感染使得α
‑
干扰素治疗完全无效。有严重肝损伤和严重纤维化症状的患者不能进行α
‑
干扰素
治疗。
[0009]尽管在乙型肝炎病毒治疗领域中有显著进步，仍然存在需要能够在慢性感染的患者中选择性和有效地沉默病毒的基因表达、阻断复制并且连续减少病毒负荷的药剂。

技术实现思路

[0010]本文所述的是一种能够选择性和有效地减少乙型肝炎病毒(HBV)的表达的HBV特异性RNA干扰(RNAi)引发分子(也称为RNAi药剂、RNAi引发剂、或引发剂)，以及其在介导RNA干扰以抑制乙型肝炎病毒基因的表达、尤其是抑制与乙型肝炎病毒的复制或致病有关的基因的表达中的应用。各RNAi引发剂至少包括一条正义链和一条反义链。正义链和反义链可以彼此部分互补、基本上互补或完全互补。本文所述的RNAi引发剂的正义和反义链的长度分别可以为16～30个核苷酸。在一些实施方式中，正义和反义链的长度独立地为17～26个核苷酸。正义和反义链可以是相同长度也可以是不同长度。在递送至表达HBV的细胞后，本文所述的RNAi引发剂在体内抑制一种或多种HBV基因的表达。可以在HBV RNAi引发剂中使用的HBV RNAi引发剂的正义链和反义链的例子列于表1A和1B。HBV RNAi引发剂的双链体的例子列于表2。
[0011]HBV RNAi引发剂包括含有第一序列的正义链(过客链)和含有第二序列的反义链(引导链)。在一些实施方式中，正义链包括与乙型肝炎病毒mRNA的至少一部分具有至少90％的相同性的核心序列。反义链包括与编码所述乙型肝炎病毒基因的mRNA的至少一部分基本上互补的核苷酸序列。在一些实施方式中，互补区域的长度少于30个核苷酸。在一些实施方式中，RNAi引发剂双链体的长度在约16～30个核苷酸的范围内。在一些实施方式中，RNAi引发剂双链体的长度在约15～25个核苷酸的范围内。在一些实施方式中，HBV RNAi引发剂具有约18、19、20、21、22、23或24个核苷酸的双链体长度。例举的互补序列列于表1A和1B。
[0012]在一些实施方式中，HBV RNAi引发剂还包括靶向基团。靶向基团可以连接于HBV RNAi引发剂的正义链或反义链的3
’
或5
’
末端。在一些实施方式中，靶向基团连接于正义链的3
’
或5
’
末端。在一些实施方式中，靶向基团连接于正义链的5
’
末端。在一些实施方式中，靶向基团包括具有20个或更多的碳原子的疏水基团。在一些实施方式中，疏水基团包括胆固醇或胆固醇基。在一些实施方式中，靶向基团包括半乳糖三聚体。
[0013]在一些实施方式中，靶向基团通过接头连接于引发剂。合适的接头包括但不限于：
‑
(CH2)
n
‑
，其中n为1～10(在一些实施方式中n＝6，即本文所用的C6)，以及
‑
(O
‑
CH2‑
CH2)
n
‑
或
‑
(CH2‑
CH2‑
O)
n
‑
，其中n＝1～10(在一些实施方式中n＝3，即三乙二醇(TEG))。具有或不具有靶向基团的接头可以结合于表1A和1B所示的正义链和/或反义链的5
’
或3
’
末端本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的组合物，其包含：a)MLP
‑
(L
‑
T)
x
，其中，MLP是蜂毒肽样肽，
‑
L
‑
T具有以
‑
CO
‑
C(CH3)＝C(T)
‑
COOH或
‑
CO
‑
C(T)＝C(CH3)
‑
COOH表示的结构，其中T包含对去唾液酸糖蛋白受体具有亲和性的靶向配体，且x大于MLP的集合的伯胺数量的80％；b)第一HBV RNAi引发剂，其包含反义链和正义链，其中所述反义链包含表1A中提供的反义序列中任一者的核苷酸2～18，和c)第二HBV RNAi引发剂，其包含反义链和正义链，其中所述反义链包含表1A中提供的反义序列中任一者的核苷酸2～18。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一HBV RNAi引发剂包含正义链，所述正义链包含表1B中提供的相应正义序列中任一者的核苷酸2～18，且所述正义链任选地与靶向基团连接；并且所述第二HBV RNAi引发剂包含正义链，所述正义链包含表1B中提供的相应正义序列中任一者的核苷酸2～18，且所述正义链任选地与靶向基团连接。3.如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述第一HBV RNAi引发剂包含通过TEG基团与胆固醇基共价连接的正义链，且所述第二HBV RNAi引发剂包含通过C6基团与胆固醇基共价连接的正义链。4.如权利要求1～3中任一项所述的组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：箭头药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：