一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法技术

本发明专利技术公开了一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，包括以下步骤：将脱脂乳升温，搅拌并调节脱脂乳的pH，静置沉淀，过滤分离，用蒸馏水洗涤，得到酪蛋白湿固体；将酪蛋白湿固体加入到蒸馏水中，调节酶解体系的pH；加入胰蛋白酶酶解，再次调节酶解体系的pH，分离得到酶解液；调节酶解液的pH，然后加入氯化钙和无水乙醇，离心收集CPPs

【技术实现步骤摘要】
一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法


[0001]本专利技术涉及酪蛋白磷酸肽制备领域，具体涉及一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法。

技术介绍

[0002]钙作为常量元素，是生物体维持人类生存的必需矿质元素之一。钙在人体中的含量占人体总重的1～2％，大约有99％的钙存在于骨骼和牙齿中，另外约有1％的钙存在于血液和软组织中，在神经调节、肌肉收缩、有丝分裂、血液凝固等生命活动的调节中发挥着重要作用。缺钙已成为当今世界主要营养问题之一，尤其是儿童、孕妇和老人。长期缺钙会导致身体出现诸多钙缺乏症状，比如佝偻病、病理性骨折、骨质疏松症及高血压等。补钙产品的发展包括3个阶段：第一阶段钙制剂以无机钙盐为主，虽然钙含量较高，但溶解性差，利用度低，在胃中会消耗大量的胃酸，不宜大量服用；第二阶段钙制剂主要是有机酸钙，在溶解度以及利用率上有较大的提升，但对机体仍然存在一定的毒副作用；第三阶段钙制剂包括氨基酸螯合钙及短链肽螯合钙，具有溶解性好、钙利用率高、易于机体吸收等优势。
[0003]具有生物活性结构的肽钙螯合物为钙源的第三阶段补钙产品，钙源包括酪蛋白磷酸肽、卵黄高磷蛋白磷酸肽等活性多肽螯合物。生物活性肽能够与钙离子结合，形成稳定的肽钙螯合物，肽钙螯合物具有自身的吸收转运机制，可以将钙元素以螯合物的形式被完全吸收，又能有效地释放钙离子。酪蛋白磷酸肽(CPPs)是一类含有磷酸丝氨酸的短肽，可以防止钙在小肠内沉淀，显著促进钙的吸收，并对钙的代谢产生积极的影响，具有钙吸收率好、生物利用率高等特点。同时，研究发现酪蛋白磷酸肽与钙结合位点主要位于Glu
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2的羰基和磷酸化的Ser
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15、Ser
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18和Ser
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18的磷酸基处，疏水相互作用是钙结合的主要驱动力。酪蛋白磷酸肽促进钙吸收的活性主要受丝氨酸上磷酸基、氨基酸组成以及分子结构的影响。
[0004]中国专利文献CN200310107554.3提供了一种酶解与膜滤集成连续制取酪蛋白生物活性多肽的工艺，该工艺以酪蛋白为原料，在由酶解罐与不同截留分子量的超滤、纳滤膜组合而成的多级酶膜反应器中，经至少一种蛋白酶作用，制得具有多种功能的生物活性多肽。但是其产品为粗酪蛋白磷酸肽，肽链的长短不一，酪蛋白磷酸肽纯度不够，高螯合能力的酪蛋白磷酸肽不能富集，钙螯合能力低，利用率低。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，通过分级加入氯化钙，分离沉淀酪蛋白磷酸肽，使含有酸性氨基酸组分高的酪蛋磷酸肽富集，为钙结合提供更多高亲和性的位点，从而分离得到一种纯度高、具有更高螯合钙能力的酪蛋白磷酸肽。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，包括以下步骤：
[0008](1)脱脂乳制备酪蛋白固体：将脱脂乳升温至40～50℃，搅拌并调节脱脂乳的pH，
静置沉淀，过滤分离，用蒸馏水洗涤2～3次，得到蛋白质含量大于95％的酪蛋白湿固体；
[0009](2)酪蛋白湿固体酶解分离酶解液：将酪蛋白湿固体加入到蒸馏水中，调节酶解体系的pH，加入胰蛋白酶，于35～50℃条件下搅拌酶解2～6h，再次调节酶解体系的pH，静置、离心、分离得到酶解液；
[0010](3)酪蛋白磷酸肽的分级分离：调节步骤(2)得到的酶解液的pH，然后加入氯化钙和无水乙醇，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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1固体和乙醇上清液1；向乙醇上清液1中加入氯化钙，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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2固体和乙醇上清液2；向乙醇上清液2中加入氯化钙，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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3固体，干燥得到高螯合钙能力的酪蛋白磷酸肽。
[0011]优选的，步骤(1)中，将脱脂乳的pH调节至4.5～4.8。
[0012]优选的，步骤(2)中，酪蛋白湿固体与蒸馏水的比为1：10～1：30(m/v)。
[0013]优选的，步骤(2)中，酶解体系pH第一次调节为7～9，酶解体系pH第二次调节为4.5～4.8。
[0014]优选的，步骤(2)中，胰蛋白酶用量为0.01～0.1g/g酪蛋白湿固体。
[0015]优选的，步骤(2)中，搅拌时转速为60～200r/min。
[0016]优选的，步骤(3)中，将步骤(2)得到的酶解液pH调节为6～8。
[0017]优选的，步骤(3)中，氯化钙添加量分别为酶解液的0.01～1wt％、0.01～1wt％和0.01～1wt％。
[0018]优选的，步骤(3)中，使体系中乙醇浓度为40～70wt％。
[0019]本专利技术还要求保护一种利用所述分级分离方法制备得到的高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽在钙强化乳制品、果汁饮料、蛋白饮料、速溶饮品、运动食品、糖果以及营养素补充剂中的应用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0021]1)本专利技术提供了一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，利用分级分离得到一种高螯合钙能力的酪蛋白磷酸肽，产品钙螯合能力强，得率高，纯度高，生物活性好，利于人体吸收，且工艺简单、设备简单、操作方便。
[0022]2)本专利技术提供了一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，通过分级加入氯化钙，分离沉淀酪蛋白磷酸肽，使含有酸性氨基酸组分高的酪蛋磷酸肽富集，为钙结合提供更多高亲和性的位点，从而分离得到一种纯度高、具有更高螯合钙能力的酪蛋白磷酸肽。
具体实施方式
[0023]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚，以下结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明。当然，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0024]如无特殊说明外，本专利技术中的化学试剂和材料均通过市场途径购买或通过市场途径购买的原料合成。
[0025]实施例1
[0026]一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，包括以下步骤：
[0027](1)脱脂乳制备酪蛋白固体：将脱脂乳升温至45℃，边搅拌边调节脱脂乳的pH至4.6，静置沉淀，过滤分离，用蒸馏水洗涤3次，得到蛋白质含量大于95％的酪蛋白湿固体；
[0028](2)酪蛋白湿固体酶解分离酶解液：按固液比1：20将酪蛋白湿固体加入到蒸馏水中，调节酶解体系的pH为8，按0.03g/g酪蛋白湿固体用量加入胰蛋白酶，于45℃、60r/min条件下酶解4h，调节酶解体系的pH为4.6，静置、离心、分离得到酶解液；
[0029](3)酪蛋白磷酸肽的分级分离：调节步骤(2)得到的酶解液的pH为7，然后加入酶解液0.1wt％的氯化钙和无水乙醇，使乙醇浓度为55wt％，静置沉淀6h，离心收集CPPs
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1固体和乙醇上清液1；向乙醇上清液1中加入酶解液0.1wt％的氯化钙，静置沉淀6h，离本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高螯合钙能力酪蛋白磷酸肽的分级分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脱脂乳制备酪蛋白固体：将脱脂乳升温至40～50℃，搅拌并调节脱脂乳的pH，静置沉淀，过滤分离，用蒸馏水洗涤2～3次，得到蛋白质含量大于95％的酪蛋白湿固体；(2)酪蛋白湿固体酶解分离酶解液：将酪蛋白湿固体加入到蒸馏水中，调节酶解体系的pH，加入胰蛋白酶，于35～50℃条件下搅拌酶解2～6h，再次调节酶解体系的pH，静置、离心、分离得到酶解液；(3)酪蛋白磷酸肽的分级分离：调节步骤(2)得到的酶解液的pH，然后加入氯化钙和无水乙醇，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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1固体和乙醇上清液1；向乙醇上清液1中加入氯化钙，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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2固体和乙醇上清液2；向乙醇上清液2中加入氯化钙，静置沉淀6～10h，离心收集CPPs
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3固体，干燥得到高螯合钙能力的酪蛋白磷酸肽。2.根据权利要求1所述的分级分离方法，其特征在于，步骤(1)中，将脱脂乳的pH调节至4.5～4.8。3.根据权利要求1所述的分...

【专利技术属性】
技术研发人员：王冠华，贾永秀，刘卫震，伍昌军，
申请(专利权)人：内蒙古蒙特威生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：