一种甲基化CpG位点的应用以及试剂盒制造技术

本申请涉及生物医学检测技术领域，提供了一种甲基化CpG位点的应用以及试剂盒。本申请甲基化CpG位点作为生物标志物在诊断和/或预后评估糖尿病视网膜病变中的应用，甲基化CpG位点选自以下甲基化CpG位点中任何一种或两种以上的组合作为生物标志物：Chr18:75209739、Chr18:75209656、Chr18:75211921、Chr18:75211929、Chr18:75211936、Chr18:75211939、Chr18:75211952、Chr18:75211955、Chr18:75212006、Chr18:75212008、Chr18:75208861和Chr18:75208794。Chr18:75208794。Chr18:75208794。

【技术实现步骤摘要】
一种甲基化CpG位点的应用以及试剂盒


[0001]本申请属于生物医学检测
，尤其涉及一种甲基化CpG位点的应用以及试剂盒。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种由多病因导致的慢性代谢性疾病，是21世纪患病率增长最快的慢性疾病之一。糖尿病患者由于胰岛素代谢异常，引起全身各器官的微血管病变。据统计，糖尿病是引起并发症最多的一种疾病，高达100多种。临床数据显示，糖尿病发病后10年左右，将有30％
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40％的患者至少会发生一种并发症，且并发症一旦产生，药物治疗很难逆转，因此在预防与治疗糖尿病的同时，应尽早预防与控制糖尿病并发症的发生。
[0003]糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy，DR)是糖尿病最具特征性的微血管并发症，是中老年人群失明致盲的主要原因。糖尿病视网膜病变分为非增殖期视网膜病变和增殖期视网膜病变。其中增殖期糖尿病视网膜病变也被定义为威胁视力的糖尿病视网膜病变，极易导致视力丧失，降低患者生存质量。因此，早期发现和干预具有重要的临床意义。
[0004]糖尿病视网膜病变的发病原因不明，目前尚无有效的治愈方法。但是DR可以通过早期筛查、早期发现和及早干预而有效改善视力预后。目前的早期筛查手段主要是进行血糖和糖化血红蛋白水平测定及定期的眼底检查，但由于患者须定期入院接受检查，导致患者的依从性低，使得DR的早期筛查和早期诊疗面临巨大挑战，成为我国卫生防控的主要负担。因此，积极寻找DR的早期诊断的因子是当前糖尿病视网膜病变防治中重大而迫切的课题。
专利技术内容
[0005]本申请的目的在于提供一种与糖尿病视网膜病变相关的甲基化CpG位点及其应用，旨在解决目前不能有效对糖尿病视网膜病变起到早期诊断的技术的问题。
[0006]为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
[0007]本申请一方面提供一种甲基化CpG位点作为生物标志物在诊断和/或预后评估糖尿病视网膜病变中的应用。该甲基化CpG位点源自TSHZ1基因，甲基化CpG位点选自以下甲基化CpG位点中的任何一种或两种以上的组合作为生物标志物：Chr18:75209739、Chr18:75209656、Chr18:75211921、Chr18:75211929、Chr18:75211936、Chr18:75211939、Chr18:75211952、Chr18:75211955、Chr18:75212006、Chr18:75212008、Chr18:75208861和Chr18:75208794。
[0008]本申请另一方面，一种用于检测甲基化CpG位点的引物。甲基化CpG位点为本申请甲基化CpG位点；其中，Chr18:75209739和/或Chr18:75209656的上游引物为SEQ ID No.1，下游引物为SEQ ID No.2；
[0009]Chr18:75211921和/或Chr18:75211929和/或Chr18:75211936和/或Chr18:75211939和/或Chr18:75211952和/或Chr18:75211955和/或Chr18:75212006和/或Chr18:
75212008的上游引物为SEQ ID No.3，下游引物为SEQ ID No.4；
[0010]Chr18:75208861和/或Chr18:75208794的上游引物为SEQ ID No.5，下游引物为SEQ ID No.6。
[0011]以及，一种检测甲基化CpG位点的甲基化水平的试剂在制备糖尿病视网膜病变早期诊断和/或预后评估产品中的应用，甲基化CpG位点为本申请甲基化CpG位点。
[0012]以及，一种用于糖尿病视网膜病变早期诊断和/或预后评估的试剂盒。本申请试剂盒包括检测甲基化CpG位点的甲基化水平的试剂，且甲基化CpG位点为本申请甲基化CpG位点。
[0013]本申请通过实验分析证明，糖尿病视网膜病变患者与糖尿病患者TSHZ1基因的甲基化存在差异，糖尿病视网膜病变患者的TSHZ1基因上存在12个差异甲基化位点，且该12个CpG位点的甲基化水平均低于糖尿病组。因此，本申请通过TSHZ1基因上的12个甲基化CpG位点，可以发现与TSHZ1差异甲基化位点相关的SNPs，进而发现糖尿病视网膜病变患者的诊断、预后生物标志物，大幅度提高糖尿病视网膜病变诊断的敏感性和特异性。上述甲基化CpG位点标志物与糖尿病视网膜病变密切相关，通过对该些甲基化CpG位点标志物的检测，可以对糖尿病视网膜病变患者疾病进展的动态监测，有助于治疗效果的评价，为医生快速准确掌握患者病情，及时采取更具个体化更精准的治疗方案提供科学依据。
[0014]本申请基于上述甲基化CpG位点设计了能够特异性检测这些甲基化CpG位点的相关引物，其具有对本申请相应TSHZ1基因特异性高，定量准确检测，通过甲基化分析提出了用于早期诊断和/或预后评估糖尿病视网膜病变的产品，从而实现糖尿病视网膜病变早期诊断，从而为糖尿病视网膜病变的预测提供了新的思路和途径。
[0015]本申请提供了用于糖尿病视网膜病变早期诊断和/或预后评估的试剂盒，通过检测这些甲基化CpG位点的甲基化水平，可在早期对糖尿病患者是否发生视网膜病变进行早期诊断诊断以及预后评估，从而为临床医生进一步深入检查提供依据，为快速准确掌握患者的疾病状态和病情严重程度，及时采取治疗措施提供支持，此外，由于这些甲基化CpG位点源自外周血中的TSHZ1基因，因此，具有取样方便快速、微创、需求量少、易于检测的优点。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1是本申请实施例提供的糖尿病视网膜病变患者的差异甲基化位点的研究路线；
[0018]图2是本申请实施例提供的CpG位点甲基化水平的检测流程图；
[0019]图3是本申请实施例提供的不同基因型人群的TSHZ1
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7甲基化水平结果图。
具体实施方式
[0020]为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释
本申请，并不用于限定本申请。
[0021]本申请中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B的情况。其中A，B可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
[0022]本申请中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如，“a本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲基化CpG位点作为生物标志物在诊断和/或预后评估糖尿病视网膜病变中的应用，其特征在于，所述甲基化CpG位点源自TSHZ1基因，所述甲基化CpG位点选自以下所述的甲基化CpG位点中的任何一种或两种以上的组合作为生物标志物：Chr18:75209739、Chr18:75209656、Chr18:75211921、Chr18:75211929、Chr18:75211936、Chr18:75211939、Chr18:75211952、Chr18:75211955、Chr18:75212006、Chr18:75212008、Chr18:75208861和Chr18:75208794。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甲基化CpG位点Chr18:75211952的meQTL包括rs1132845、rs11307633和rs7237736。3.用于检测甲基化CpG位点的引物，其特征在于，所述甲基化CpG位点为权利要求1所述的甲基化CpG位点；其中，所述Chr18:75209739和/或所述Chr18:75209656的上游引物为SEQ ID No.1，下游引物为SEQ ID No.2；所述Chr18:75211921和/或所述Chr18:75211929和/或所述Chr18:75211936和/或所述Chr18:75...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚春梅，洪文旭，杨慧，徐远飞，胡黎明，李雅琪，彭爱宇，
申请(专利权)人：深圳市慢性病防治中心深圳市皮肤病防治研究所，深圳市肺部疾病防治研究所，
类型：发明
国别省市：