一种检测TDRD12基因变异的物质及其应用制造技术

本申请公开了一种用于检测人TDRD12基因变异的物质在制备检测人非梗阻性无精子症产品中的用途。本申请还公开了一种鉴定人非梗阻性无精子症的诊断产品，所述诊断产品包括检测TDRD12基因变异的物质。本申请还公开了一种非诊断非治疗目的的检测人TDRD12基因变异的方法，所述方法利用上述的诊断产品检测来自对象的样本是否存在人TDRD12基因变异。的样本是否存在人TDRD12基因变异。的样本是否存在人TDRD12基因变异。

【技术实现步骤摘要】
一种检测TDRD12基因变异的物质及其应用


[0001]本说明书涉及生物
，特别涉及一种检测TDRD12基因变异的物质及其应用。

技术介绍

[0002]不孕不育是一个重大的全球性问题，每10对夫妇中就有1对不孕不育，男性因素占20％
–
25％。男性不育是指夫妻双方在无保护性措施的同居下一年及以上，无法使女方自然受孕。男性不育患者主要表现为：梗阻性无精子症(临床表现为精液常规检查未见精子，附睾穿刺/睾丸组织活检可见精子)，非梗阻性无精子症/严重少精子症(临床表现为精液常规检查未见精子，附睾穿刺/睾丸组织活检未见精子，或者精子数量极度减少等)，和弱/畸形精子症(临床表现为精子数量减少、精子运动能力下降或精子形态畸形)。
[0003]明确男性不育的病因对于医学基础研究及临床治疗均有重要意义。男性不育的病因复杂，由于男性生殖系统的特殊环境，遗传缺陷被认为可能是主要病因，并有高度的遗传异质性。已往的研究揭示，参与精子发生的基因有数千个，其中超过800个基因被敲除后，在模式动物中显示出雄性不育的表型。但在人类，男性不育的遗传病因学研究处于起步阶段，参与精子发生的基因多达2000多个，但明确的男性不育致病基因仅仅才100多个，大量未知的男性不育致病基因有待发现和阐明其致病机制。不同的致病基因导致的临床表型和助孕结局也不一样。因此，在临床上明确男性不育患者的遗传学因素对于助孕治疗方案的选择具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本申请公开了一种用于检测人TDRD12基因变异的物质在制备检测人非梗阻性无精子症产品中的用途。
[0005]本申请还公开了一种鉴定人非梗阻性无精子症的诊断产品，所述诊断产品包括检测TDRD12基因变异的物质。
[0006]本申请还公开了一种非诊断非治疗目的的检测人TDRD12基因变异的方法，所述方法利用上述的诊断产品检测来自对象的样本是否存在人TDRD12基因变异。
[0007]本申请可能带来的有益效果包括但不限于：1、本申请提供的检测TDRD12基因变异的物质在非梗阻性无精子症患者的血清、精液或睾丸组织能够检测到TDRD12基因变异，特异性强、准确度高；2、根据上述物质制备的诊断试剂盒可通过抽血检查实现诊断，克服了现有技术中仅能通过睾丸穿刺活检诊断的技术障碍，极大地减轻了患者的痛苦，推动了实现疾病早发现、早诊治的治疗方针，对于无精子症的诊治和研究具有重大的意义。
附图说明
[0008]本申请将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，其中：
[0009]图1为根据本申请一些实施例所示的候选变异过滤流程图及变异位点示意图；
[0010]图2为根据本申请一些实施例所示的睾丸组织的He染色切片图；其中，A、生精功能正常的正常对照睾丸组织；B and C,A13011(B)和A17783(C)的睾丸病理分析代表了被捕的精母细胞。生精细胞被标记为精原细胞(&)、精母细胞(@)、固缩精细胞(+)、圆形精细胞(#)和精子(*)；
[0011]图3为根据本申请一些实施例所示的A13011和A17783异常剪接验证结果图；
[0012]图4为根据本申请一些实施例所示的两个纯合TDRD12变体piRNA生物合成相关基因的表达结果图。
具体实施方式
[0013]为了更清楚地说明本说明书实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本说明书的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图将本说明书应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，图中相同标号代表相同结构或操作。
[0014]如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
[0015]本说明书中使用了流程图用来说明根据本说明书的实施例的系统所执行的操作。应当理解的是，前面或后面操作不一定按照顺序来精确地执行。相反，可以按照倒序或同时处理各个步骤。同时，也可以将其他操作添加到这些过程中，或从这些过程移除某一步或数步操作。
[0016]非梗阻性无精子症(NOA)是生精数量障碍的一种极端表型，影响至少10％的不育男性。NOA的病因具有高度异质性，包括获得性和遗传因素。在排除核型异常或无精子症因子(AZF)微缺失等常规遗传因素后，基因变异只能解释大约3.18％或2.09％。根据睾丸组织病理学分析，NOA可分为唯支持细胞综合征、减数分裂停滞和精子发生不足。超过400个基因的遗传缺陷被认为与小鼠生育能力有关。几个基因的变异已被证明会导致减数分裂停滞，并且比例仍在增加。这些基因参与不同的生物学过程，包括联会复合体的形成、减数分裂交叉和DNA修复的调节以及piRNA的生物发生。
[0017]近年来，PIWI相互作用RNA(piRNA)和tudor结构域蛋白(TDRD)在雄性生殖细胞发育中的重要性已得到证实。人类的TDRDs由12个成员(TDRD1
‑
12)组成，多个基因的变异导致小鼠和人类男性不育，例如TDRD1、TDRD6、TDRD7和TDRD9。TDRD12的变异是否会导致人类男性不育尚未得到证实。
[0018]本申请提供了一种用于检测人TDRD12基因变异的物质在制备检测人非梗阻性无精子症产品中的用途。
[0019]在一些实施例中，所述TDRD12基因变异位点可以包括NM_001110822.2:exon5:c.441
‑
1G>C或NM_001110822.2:exon10:c.990_991delinsC中至少一个。
[0020]在一些实施例中，所述变异可以为纯合变异。在一些实施例中，所述变异可以为
TDRD12纯合功能丧失(LoF)变异。在一些实施例中，LOF变异可以为提前终止，蛋白预计在exon10截断，截断百分比大于10％将预期引起无义介导的mRNA降解，导致蛋白完全降解。在一些实施例中，LOF变异可以为异常剪接，造成intron4被剪接进入转录本，而不是引起外显子的跳读，这会引入终止密码子从而导致截短和无义介导的mRNA降解。
[0021]本申请中的纯合变异是指一对等位基因都存在变异。
[0022]术语“外显子的跳读”外显子跳读是指跳过一个或多个外显子剪接为成熟的mRNA，是mRNA剪接多样性中的一种主要方式。
[0023]在一些实施例中，所述检测TDRD12基因变异的物质可以包括引物对、探针或抗体中至少一种。在一些实施例中，优选的，所述检测TDRD12基因变异的物质可以是特异性检测引物和/或特异性检测探针。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人TDRD12基因变异的物质在制备检测人非梗阻性无精子症产品中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述TDRD12基因变异位点包括NM_001110822.2:exon5:c.441
‑
1G>C或NM_001110822.2:exon10:c.990_991delinsC中至少一个。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述变异为纯合变异。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测TDRD12基因变异的物质包括引物对、探针或抗体中至少一种，优选的，所述引物对选自以下引物对之中任一对：(1)正向引物：5
’‑
TGAAGATCCAGGTTGCTTCTGGGT
‑3’
(S E Q ID N O:1)，和反向引物：5
’‑
TAGCTGCATTGTCCCACTTCTTGG
‑3’
(SEQ ID NO:2)；(2)正向引物：5
’‑
AGCTTGTGTTCTGGTTGAGGAGA
‑3’
(S E Q ID N O:3)，和反向引物：5
’‑
CTGAATAGCTGCATTGTCCCACT
‑3’
(SEQ ID NO:4)；(3)正向引物：5
’‑
ATTGAAGATCCAGGTTGCTTCTGGG
‑3’
(S E Q ID N O:5)，和反向引物：5
’‑
CTGTCCTTCTTCCAATGTTAAGGGTT
‑3’
(SEQ ID NO:6)。5.一种鉴定人非梗阻性无精子症的诊断产品，其特征在于，所述诊断产品包括检测TDRD12基因变异的物质。6.如权利要求5所述的诊断产品，其特征在于，所述诊断产品为试剂盒、芯片、膜条、蛋白阵列、组合物或检测系统之任一。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鸿祥，安淼，卢慕峻，金炎，胡凯，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：