一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽及其应用。所述人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽包含两个、三个或四个人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成，其中所述抗原表位肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4。根据优化和筛选的HCMV重叠的T细胞表位，Th细胞表位和B细胞表位，本发明专利技术获得了四种HCMV优势抗原表位，其覆盖引起有效细胞免疫的PP65、PP150、IE1蛋白和引起有效体液免疫的gB、gH蛋白。包含该表位嵌合肽的疫苗在小鼠模型中具有良好的免疫原性及安全性，能够在短时间内引起体液免疫和细胞免疫反应。此外，该疫苗制备快速简便，成本较低，可在短时间内实现大规模生产。间内实现大规模生产。间内实现大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽及其应用


[0001]本专利技术属于免疫预防和治疗领域。具体地，本专利技术涉及一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽及其应用。

技术介绍

[0002]人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus，HCMV)感染可能是最普遍的人类感染。虽然发达国家卫生条件的改善、儿童与成人之间较少的密切接触降低了巨细胞病毒的流行率，但低收入和中等收入国家几乎100％的成年人都在年轻时被感染。巨细胞病毒感染T细胞并改变它们的反应，这被怀疑有助于动脉硬化和免疫衰老，并可能通过非调节作用促进癌症。然而，其最重要的医学意义在于，它是世界上最常见的先天性感染，最常见的是导致听力损失，在某些情况下也会导致小头症、智力发育迟缓、肝脾肿大和血小板减少性紫癜。一般来说，每200到30个新生儿中就有1个感染了经母亲传播的巨细胞病毒。胎儿感染的严重程度取决于母亲HCMV的血清学阳性或阴性。血清阴性孕妇感染胎儿的预后最差，但血清阳性母亲感染胎儿也可能造成严重后果。
[0003]此外，巨细胞病毒是移植最常见的感染。实体器官移植患者接受来自血清阳性供者的移植可能会发生疾病，而血清阳性的移植受体可能由于免疫抑制而重新激活HCMV。这些感染可能导致严重的疾病和移植排斥反应。HCMV感染是移植最常见的感染并发症，无论是实体器官还是造血干细胞移植。在实体器官，包括肾、肝、肺等移植的情况下，最危险的情况是HCMV血清阴性的受体从HCMV血清阳性的供者那里接受器官。在这种情况下，巨细胞病毒感染几乎是肯定的，发生疾病是常见的。以肾脏移植为例，如果不采取抗病毒预防措施，血清阴性的肾接受者中约有三分之一的人会出现巨细胞病毒病。有趣的是，即使是血清学阳性的受者在接受来自血清学阴性供者的器官移植时也可能患上巨细胞病毒病。由于从血清阴性供者那里接受器官的血清阳性受者患巨细胞病毒病的机率更低，这表明血清阳性受者的问题是在免疫抑制的影响下新毒株的重复感染，而不是重新激活，而造血干细胞移植(HSCT)后的情况则不同，其在免疫抑制的影响下的重新激活似乎是更加危险的。由于HCMV的潜伏不仅发生在循环T细胞中，还发生在淋巴结、内皮细胞、巨噬细胞等部位，因此出现再激活问题也就不足为奇了。抗病毒预防和/或治疗在移植中心常规进行，以预防严重的巨细胞病毒疾病，并取得了相当大的成功，但不是完全成功。疫苗接种在减轻巨细胞病毒疾病的严重程度方面取得了一些早期成功。
[0004]巨细胞病毒疫苗的开发始于20世纪70年代，当时病毒对子宫内婴儿和移植受者造成的损失变得明显。两种疫苗株是从实验室分离的病毒AD
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169和Towne开始减毒的。AD169减毒株很快就被放弃了，但Towne减毒株继续在实体器官移植受者和正常男性和女性志愿者中进行广泛的试验。肾移植受者使用Towne减毒株后，对严重的巨细胞病毒疾病和移植物排斥反应具有高度的保护作用。然而，对HCMV感染的保护在统计学上没有显著性差异。正在研究的Towne株疫苗可以保护人类免受未减毒巨细胞病毒的攻击，但自然获得的免疫保护效力比注射疫苗后获得的免疫保护效力更高。此外，弱化毒株所得的减毒活疫苗未能保护
妇女避免感染巨细胞病毒。
[0005]下一个重要的进展是HCMV表面蛋白的纯化，其称为糖蛋白B或gB，因为它与其他疱疹病毒的糖蛋白同源。当其与MF59水包油佐剂联合使用时，在6个月的时间内三次注射后，人体产生了良好水平的中和抗体。在自然暴露于巨细胞病毒的年轻女性中，该方案与安慰剂一同进行了两次测试，在这两种情况下，受试者与之前相比均能有效对抗巨细胞病毒感染，但抗体和疗效迅速消退。加强注射确实恢复了抗体水平。此外，当gB亚单位蛋白与刺激toll样受体(TLR)4的AS01佐剂结合时，在人体内引发了更高、更持久的抗gB抗体水平，但佐剂疫苗从未进行过有效性测试。值得注意的是，正在研究中的gB亚单位疫苗在实体器官移植患者中对巨细胞病毒病具有显著的保护作用，提示抗体在这种情况下的重要性。gB是一种三聚体融合蛋白的事实表明可能存在一种免疫原性更强的融合前形式，但这还没有被证实。
[0006]关于巨细胞病毒疫苗的可行性还有几个未解的问题，但也有一些明确的答案。巨细胞病毒通过接触唾液、性分泌物和移植获得。原则上，可以从HCMV保护中受益的人群有四种：育龄妇女血清阴性、育龄妇女血清阳性、HCMV血清阳性个体捐赠的实体器官(SO)受体和血清造血干细胞(HSC)受体。两种移植人群的巨细胞病毒血症的发病率是最高的。但是抗病毒预防是昂贵的且不是完全有效的，并且不能无限期地持续下去。在理想情况下，巨细胞病毒疫苗应在移植前接种，但对于获得新的免疫系统的HSC试验患者移植后应继续接种。虽然不是100％确定，但似乎SO试验受者需要HCMV抗体，而HSCT受者需要增强T细胞对HCMV的免疫。
[0007]在北美、欧洲及亚洲等地区，许多妇女怀孕时没有巨细胞病毒抗体，所以巨细胞病毒疫苗接种是合理的。如果疫苗诱导保护的持续时间足够长，将为妇女提供强有力的间接保护，以防止大多数孕妇在怀孕期间胎儿的宫内感染。因为无法阻断母婴传播，故通过接种疫苗加以预防是必要的。

技术实现思路

[0008]鉴于现有技术存在的上述不足之处，本专利技术的目的在于提供一种新型人巨细胞病毒嵌合多肽疫苗，其是以人巨细胞病毒编码蛋白表位肽为基础的多肽类疫苗，可用于预防和/或治疗孕妇和器官移植患者的HCMV病毒血症。基于上述目的，本专利技术首先通过生物信息学软件对HCMV抗原表位进行了预测，并从预测得到的表位优化和筛选了4种HCMV优势抗原表位，进而以原核系统表达获得了以人巨细胞病毒编码蛋白优势抗原表位肽为基础的嵌合多肽疫苗。
[0009]一方面，本专利技术提供了一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽，其包含两种、三种或四种人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成，其中所述抗原表位肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4。
[0010]根据本专利技术的一个实施方案，所述人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽包含四种人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成，其中所述抗原表位肽的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
[0011]另一方面，本专利技术还提供了一种预防和/或治疗人巨细胞病毒感染或其相关疾病的药物组合物，其包含根据本专利技术的人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽，以及药学上可接受的
载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂。
[0012]根据本专利技术的一个实施方案，所述药物组合物为疫苗。
[0013]根据本专利技术的一个实施方案，所述药学上可接受的载体为pET28a载体或pET28a
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SUMO载体。在本专利技术的优选实施方案中，当所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和/或SEQ ID NO.4时，所述药学上可接受的载体为pET28a载体；当所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.3时，所述药本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽，其包含两种、三种或四种人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成，其中所述抗原表位肽的氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4。2.根据权利要求1所述的人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽，其包含四种人巨细胞病毒抗原表位肽或由它们组成，其中所述抗原表位肽的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。3.一种预防和/或治疗人巨细胞病毒感染或其相关疾病的药物组合物，其包含根据权利要求1或2所述的人巨细胞病毒抗原表位嵌合肽，以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其为疫苗。5.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体为pET28a载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王斌，李俊，江莎莎，南福龙，张现娟，刘俸君，鲁晓晴，张万明，高青，
申请(专利权)人：青岛万明赛伯药业有限公司，
类型：发明
国别省市：