【技术实现步骤摘要】
一种神经细胞组合和其应用
[0001]本专利技术涉及生物领域,具体涉及神经细胞制剂形式
,特别是涉及一种神经相关细胞的制剂方法及其应用。
技术介绍
[0002]干细胞具有再生和重建能力,基于干细胞技术的再生医学可以补充缺失的神经细胞,有望为解决退行性疾病等许多组织细胞缺损性疾病的治疗提供新的途径。近年来,大量临床前研究结果显示人多能干细胞分化的多巴胺神经细胞对非人灵长类帕金森病模型具有良好的治疗效果。
[0003]但是,目前神经细胞移植主要是消化后的单细胞,细胞存在神经纤维断裂的情况,以及氧化应激等微环境的问题导致多巴胺神经细胞移植后存活较差,据估计存活的仅有10%,如何提高神经细胞的体内存活是目前首要解决的问题。
技术实现思路
[0004]神经相关细胞(如多巴胺神经细胞)经消化后以单细胞悬液的方式进行冻存和移植,其体内存活能力差。本申请专利技术人发现,提前将神经相关细胞(如多巴胺神经细胞)悬浮成细胞小球可以明显提高神经相关细胞(如多巴胺神经细胞)的(如体内)存活率。
[0005]所述神经相关细胞来源为体细胞重编程、干细胞分化、原代分离等。优选地,所述干细胞是多能干细胞,如胚胎干细胞。细胞来源包括但不限于各种动物,例如哺乳动物,例如牛科动物、马科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、兔科动物、啮齿类动物(例如,小鼠或大鼠)、非人灵长类动物(例如,猕猴或食蟹猴)或人。
[0006]为此,在本专利技术的第一方面,本专利技术提供了神经细胞球,其包含多个神经相关细胞,所述神经相关细 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.神经细胞球,其包含多个神经相关细胞,所述神经相关细胞包含神经前体细胞、神经细胞、神经胶质细胞或其任意组合,所述神经细胞球的直径为30
‑
500μm,优选为80
‑
300μm(如80
‑
120μm、120
‑
200μm或180
‑
300μm),更优选为80
‑
200μm(如80
‑
120μm或120
‑
200μm)。2.根据权利要求1所述的神经细胞球,其中,所述神经细胞球表达标志物TUJ1,和/或,所述神经细胞球不表达或低表达标志物caspase3;优选地,所述神经细胞球中,至少约55%(如至少约60%、至少约65%或至少约70%)的神经相关细胞表达标志物TUJ1;优选地,所述神经细胞球中,至少约70%的神经相关细胞表达标志物TUJ1;优选地,所述神经细胞球中,不超过约40%(如不超过约30%、不超过约20%、不超过约15%、不超过约10%或不超过约5%)的神经相关细胞表达标志物caspase3;优选地,所述神经细胞球中,不超过约15%(优选不超过约10%或不超过约5%)的神经相关细胞表达标志物caspase3。3.根据权利要求1
‑
2任一项所述的神经细胞球,其中,所述神经相关细胞包含神经前体细胞;任选地,所述神经相关细胞还包含神经细胞和/或神经胶质细胞。4.根据权利要求1
‑
2任一项所述的神经细胞球,其中,所述神经相关细胞为神经前体细胞。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的神经细胞球,其中,所述神经前体细胞选自多巴胺神经前体细胞、γ
‑
氨基丁酸(GABA)能神经元前体细胞、谷氨酸能神经元前体细胞、胆碱能神经元前体细胞、五羟色胺能神经元前体细胞、运动神经元前体细胞、感觉神经元前体细胞或其任意组合;优选地,所述神经前体细胞为多巴胺神经前体细胞。6.根据权利要求1
‑
3任一项所述的神经细胞球,其中,所述神经细胞选自多巴胺能神经元、γ
‑
氨基丁酸(GABA)能神经元、谷氨酸能神经元、胆碱能神经元、五羟色胺能神经元、运动神经元、感觉神经元或其任意组合。7.根据权利要求1
‑
3任一项所述的神经细胞球,其中,所述神经胶质细胞选自星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞或其任意组合。8.制备权利要求1
‑
7任一项所述的神经细胞球的方法,其包括:将神经相关细胞的单细胞悬液接种到低贴附细胞培养板中,形成所述神经细胞球,所述神经相关细胞选自神经前体细胞、神经细胞、神经胶质细胞或其任意组合;其中,所述神经相关细胞的接种密度为5
×
103/cm2~5
×
106/cm2,优选为5
×
104/cm2~5
×
105/cm2(如5
×
104/cm2、2.5
×
105/cm2或5
×
105/cm2),更优选为5
×
104/cm2~2.5
×
105/cm2(如5
×
104/cm2或2.5
×
105/cm2)。9.根据权利要求8所述的方法,其中,所述神经相关细胞的接种量为1
×
104/孔~1
×
107/孔,优选为1
×
105/孔~1
×
106/孔(如1
×
105/孔、5
×
105/孔或1
×
106/孔),更优选为1
×
105/孔~5
×
105/孔(如1
×
105/孔或5
×
105/孔),且所述培养板为24孔板。10.根据权利要求8
‑
9任一项所述的方法,其中,所述神经相关细胞包含神经前体细胞;任选地,所述神经相关细胞还包含神经细胞和/或神经胶质细胞。11.根据权利要求8
‑
9任一项所述的方法,其中,所述神经相关细胞为神经前体细胞。
12.根据权利要求8
‑
11任一项所述的方法,其中,所述神经前体细胞选自多巴胺神经前体细胞、γ
‑
氨基丁酸(GABA)能神经元前体细胞、谷氨酸能神经元前体细胞、胆碱能神经元前体细胞、五羟色胺能神经元前体细胞、运动神经元前体细胞、感觉神经元前体细胞或其任意组合;优选地,所述神经前体细胞为多巴胺神经前体细胞。13.根据权利要求8
‑
10任一项所述的方法,其中,所述神经细胞选自多巴胺能神经元、γ
‑
氨基丁酸(GABA)能神经元、谷氨酸能神经元、胆碱能神经元、五羟色胺能神经元、运动神经元、感觉神经元或其任意组合。14.根据权利要求8
‑
10任一项所述的方法,其中,所述神经胶质细胞选自星形胶质细胞、少突胶质细胞、小胶质细胞或其任意组合。15.根据权利要求8
‑
14任一项所述的方法,其中,所述培养板为圆底或尖底微孔板,如AggreWell
TM
培养板。16.根据权利要求8
‑
15任一项所述的方法,其中,所述接种时使用的培养基为接种培养基,所述接种培养基包含:脑源性神经营养因子(BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),转化生长因子β3(TGF
‑
β3),抗坏血酸,二丁酰环磷腺苷钙(db
‑
cAMP),DAPT(LY
‑
374973);任选地,所述接种培养基进一步包含:Y27632。17.根据权利要求16所述的方法,其中,所述接种培养基具有选自以下(1)
‑
(7)中的一项或多项技术特征:(1)所述脑源性神经营养因子(BDNF)的浓度为1
‑
100ng/mL,优选为10
‑
20ng/mL;(2)所述胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的浓度为1
‑
100ng/mL,优选为10
‑
20ng/mL;(3)所述转化生长因子β3(TGF
‑
β3)的浓度为0.5
‑
50ng/mL,优选为1
‑
10ng/mL;(4)所述抗坏血酸的浓度为0.01
‑
2mM,优选为0.2mM;(5)所述二丁酰环磷腺苷钙(db
‑
cAMP)的浓度为0.01
‑
5mM,优选为0.5mM;(6)所述DAPT(...
【专利技术属性】
技术研发人员:周琪,李伟,郝捷,王昱凯,胡宝洋,冯琳,梁灵敏,王柳,
申请(专利权)人:北京干细胞与再生医学研究院,
类型:发明
国别省市:
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