鉴别珍珠鳖性别的分子标记、引物对及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学方法鉴定动物性别的技术领域，具体涉及一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记、引物对及其应用。基因组DNA包含如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的珍珠鳖，鉴别为雌性；基因组DNA包含如SEQ ID NO：3所示序列的珍珠鳖，鉴别为雄性。基于本发明专利技术中提供的鉴别珍珠鳖性别的分子标记鉴别珍珠鳖性别的方法，该方法不受年龄和样本限制，成本低、操作简便、可进行大批量鉴定，鉴别快速、结果直观准确，避免了采用传统方法耗时长、成本高和易出错等缺点，可以快速且准确的对各个时期的珍珠鳖进行性别鉴定，可缩短育种时间、大幅提高产量和降低饲养成本。量和降低饲养成本。量和降低饲养成本。

【技术实现步骤摘要】
ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列的引物对。
[0010]本专利技术再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的检测试剂，其包括权利上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对。
[0011]本专利技术再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的试剂盒，其包括上述的检测试剂。
[0012]本专利技术再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的方法，其包括：提取珍珠鳖基因组DNA作为DNA模板，使用上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对进行PCR扩增得扩增产物，电泳扩增产物；扩增产物同时有1068bp和646bp条带，则为雌性珍珠鳖；扩增产物没有1068bp条带，有646bp条带，则为雄性珍珠鳖。
[0013]本专利技术有益效果至少包括：
[0014](1)基于本专利技术中提供的鉴别珍珠鳖性别的分子标记鉴别珍珠鳖性别的方法，该方法不受年龄和样本限制，成本低、操作简便、可进行大批量鉴定，鉴别快速、结果直观准确，避免了采用传统方法耗时长、成本高和易出错等缺点，可以快速且准确的对各个时期的珍珠鳖进行性别鉴定，可缩短育种时间、大幅提高产量和降低饲养成本；
[0015](2)本专利技术中提供的鉴别珍珠鳖性别的引物对本专利技术中的鉴别珍珠鳖性别的分子标记特异性强，准确率高，可在珍珠鳖早期鉴定出其遗传性别。
附图说明
[0016]图1为雌雄珍珠鳖DNA电泳示例图，其中
♂
为雄性珍珠鳖，
♀
为雌性珍珠鳖；
[0017]图2为特异引物在雌雄珍珠鳖群体中的验证电泳图，其中，Male:雄性，Female:雌性，M：2000bpmarker。
具体实施方式
[0018]所举实施例是为了更好地对本专利技术进行说明，但并不是本专利技术的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0019]本文中使用的术语仅用于描述特定实施例，并且无意于限制本公开。除非在上下文中具有明显不同的含义，否则单数形式的表达包括复数形式的表达。如本文所使用的，应当理解，诸如“包括”、“具有”、“包含”之类的术语旨在指示特征、数字、操作、组件、零件、元件、材料或组合的存在。在说明书中公开了本专利技术的术语，并且不旨在排除可能存在或可以添加一个或多个其他特征、数字、操作、组件、部件、元件、材料或其组合的可能性。如在此使用的，根据情况，“/”可以被解释为“和”或“或”。
[0020]本专利技术实施例提供一种鉴别珍珠鳖性别的分子标记，其包括如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列，基因组DNA包含如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的珍珠鳖，鉴别为雌性；基因组DNA包含如SEQ ID NO：3所示序列的珍珠鳖，鉴别为雄性。需要说明的是，可以通过现有测序技术对珍珠鳖基因组DNA进行测序或者进行表征来鉴别珍珠鳖的性别，可以快速的对于性成熟前的珍珠鳖进行鉴别，准确且高效。
[0021]本专利技术另一实施例提供一种鉴别珍珠鳖性别的引物对，其为特异性扩增包括如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列的引物对。需要说明的是，为了鉴定珍珠鳖基因组DNA中是否包含如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示序列，可以
根据SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列设计引物，对珍珠鳖基因组DNA进行PCR扩增，然后根据PCR扩增产物情况来鉴别珍珠鳖性别，不需要进行测序，降低了鉴别成本；比如，可以根据PCR扩增产物的凝胶电泳条带的情况鉴别珍珠鳖性别。一些具体实施例中，包括如SEQ ID NO：1所示的珍珠鳖基因组DNA扩增产物对应的条带为1068bp条带，包括如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的珍珠鳖基因组DNA扩增产物对应的条带为646bp条带。即同时具有1068bp条带和646bp条带的为雌性珍珠鳖，只有646bp条带的为雄性珍珠鳖。
[0022]在一些具体实施例中，上述鉴别珍珠鳖性别的引物对，包括如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的序列。具体地，鉴别珍珠鳖性别的引物对可以根据上述的鉴别珍珠鳖性别的分子标记进行设计，设计的引物需要对SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列均具有特异性。本专利技术设计的如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的序列引物对可以特异性扩增如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列，特异性强，鉴别准确率高。
[0023]本专利技术再一实施例提供一种鉴别珍珠鳖性别的检测试剂，其可以包括权利上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对。需要说明的是，上述鉴别珍珠鳖性别的引物对可以与常规辅助试剂组合成用于鉴别珍珠鳖性别的检测试剂；常规辅助试剂为本领域所已知的，比如PCR扩增反应体系中的PCR反应缓冲液、DNA聚合酶或dNTP等。以上，包括上述鉴别珍珠鳖性别的引物对的检测试剂可以使得上述的鉴别珍珠鳖性别的分子标记与引物对对发生特异性扩增，从而鉴别珍珠鳖性别。
[0024]本专利技术再一方面提供一种鉴别珍珠鳖性别的试剂盒，其包括上述的检测试剂。需要说明的是，检测试剂盒的组成为本领域所已知的常规形式，比如检测试剂盒会设置试剂盒说明书，比如会有盛装各种检测试剂的试剂瓶，比如会设置成若干小格子用来放置检测试剂瓶，比如会有滴管用来移取检测试剂等。同样地，基于该检测试剂盒中的上述鉴别珍珠鳖性别的引物对对上述的鉴别珍珠鳖性别的分子标记有比较强的特异性。
[0025]本专利技术再一实施例提供一种鉴别珍珠鳖性别的方法，其可以包括：提取珍珠鳖基因组DNA作为DNA模板，使用上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对进行PCR扩增得扩增产物，电泳扩增产物；扩增产物同时有1068bp和646bp条带，则为雌性珍珠鳖；扩增产物没有1068bp条带，有646bp条带，则为雄性珍珠鳖。需要说明的是，通过对珍珠鳖基因组DNA使用上述的鉴别珍珠鳖性别的引物对进行PCR扩增，然后对PCR扩增产物进行凝胶电泳，通过电泳条带鉴别珍珠鳖性别，成本比较低廉、结果直观且准确率很高。
[0026]在一些具体实施例中，上述鉴别珍珠鳖性别的方法中，PCR扩增程序可以包括：94℃，30s；98℃，10s；58℃，30s；72℃，60s；35循环，72℃，2min。
[0027]为了更好地理解本专利技术，下面结合具体示例进一步阐明本专利技术的内容，但本专利技术的内容不仅仅局限于下面的示例。
[0028]以下实施例中，实验所用珍珠鳖均来自广东省广州市花地湾花鸟鱼虫市场，随机选取珍珠鳖共60只(30只雄性珍珠鳖和30只雌性珍珠鳖)，经性腺解剖学和组织学检测性别后，剪取各个个体的肌肉组织，无水乙醇浸泡保存于
‑
20℃，待用。
[0029]以下实施例中，特异性扩增(PCR扩增)按照以下步骤进行：(1)使用DNA提取试剂盒，提取雌雄珍珠鳖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鉴别珍珠鳖性别的分子标记，其特征在于，包括如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示序列，基因组DNA包含如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示序列的珍珠鳖，鉴别为雌性；基因组DNA包含如SEQ ID NO：3所示序列的珍珠鳖，鉴别为雄性。2.鉴别珍珠鳖性别的引物对，其特征在于，其为特异性扩增包括如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列的引物对。3.根据权利要求2所述的鉴别珍珠鳖性别的引物对，其特征在于，包括如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的序列。4.鉴别珍珠鳖性别的检测试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，祝骏贤，朱新平，雷骆，陈辰，王亚坤，陈海港，洪孝友，刘晓莉，于凌云，刘毅辉，魏成清，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：