一种鉴别蟾酥的分子生物学方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种快速鉴别不同种的蟾酥的分子生物学方法，该方法按下述步骤进行：(1)称取适量的干品蟾酥，置于器皿中研磨粉碎，采用基因组DNA提取试剂盒提取不同种蟾酥的总DNA；(2)利用DNA条形码引物扩增线粒体COI基因5

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别蟾酥的分子生物学方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种鉴别蟾酥的分子生物学方法及其应用。

技术介绍

[0002]蟾酥来源于蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor和黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。辛、温，有毒，归心经，具有解毒，止痛，开窍醒神之功效，用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，痧胀腹痛吐泻。现代药理研究表明，其具有抗肿瘤、强心、抑菌、抗炎、免疫调节、镇痛等药理活性。
[0003]然而，受到蟾蜍资源短缺、现代采集加工方式、地方用药习惯等多种因素的影响，当前市场中商品蟾酥基原混杂，非法定品种蟾酥入药较为普遍。根据当前动物分类学，中华蟾蜍Bufo gargarizans Cantor属于两栖纲无尾目Anura前凹型亚目Procoela蟾蜍科Bufonidae蟾蜍属Bufo动物，其下分为3个亚种：中华蟾蜍指名亚种B.gargarizans gargarizans Cantor、中华蟾蜍华西亚种B.gargarizans a本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴别不同种的蟾酥的分子生物学方法，其特征在于，所述方法按下述步骤进行：(1)称取适量的干品蟾酥，置于器皿中研磨粉碎，采用基因组DNA提取试剂盒提取不同种蟾酥的总DNA；(2)利用DNA条形码引物扩增线粒体COI基因5
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端序列作为标记；以及(3)进行蟾酥基原鉴别的序列特征比对。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述干品蟾酥由鲜品蟾酥经50℃～70℃烘干制成。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述器皿为离心管。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，使用高通量组织研磨仪研磨粉碎；优选地，所述高通量组织研磨仪的频率为50～70Hz例如约60Hz；优选地，所述高通量组织研磨仪的时间为1～5min例如约3min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)的扩增中，所使用的正向引物(Chmf4)如SEQIDNO:1所示，反向引物(Chmr4)如SEQIDNO:2所示。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，PCR反应体系为20μl，其中模板1μL，PCR预混合溶液10μL，正向引物COIF1μL，反向引物COIR1μL，ddH2O7μL；优选地，所述模板的加入量﹥50n...

【专利技术属性】
技术研发人员：高慧敏，孙伟，陈两绵，孟祥霄，王玉秀，王智民，马悦，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：