一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法技术

本发明专利技术提供了一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，检测SRY基因的物质为检测SRY基因的通用引物，其包含上游引物SRY

【技术实现步骤摘要】
一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法。

技术介绍

[0002]SRY(sex determining region Y,SRY)基因是人和动物性别的决定基因，其在雄性哺乳动物生殖器官
‑
睾丸的发育过程中起到关键作用，因此，SRY基因又被称作睾丸决定因子(testis determining factor,TDF)。
[0003]SRY基因位于哺乳动物的Y染色体上，Y染色体在正常情况下存在于雄性个体，因此，SRY基因作为雄性特异性基因，可用于鉴别哺乳动物的性别。此外，还可以通过SRY基因评估哺乳动物种群的遗传多样性。
[0004]目前，有文章报道通过PCR扩增SRY基因的方法鉴定猪、牛等家畜的性别，但大部分都是根据单个物种SRY基因序列设计的引物，且只能检测一个物种，尚无可鉴定多个物种性别的通用引物。少数专利文献提供的引物可鉴定多个物种的性别，但设计的引物并不能和常见的家畜物种的SRY基因序列完全匹配，发生错配后，在实际应用时很可能影响检测效率。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，实现了用1对引物在猪、山羊、牛共3个物种中鉴别公母，检测方法快速、准确，且不受环境条件因素影响。
[0006]本专利技术具体方案如下：一种检测SRY基因的物质，用于对猪、山羊、牛进行性别鉴定的产品中，检测SRY基因的物质为检测SRY基因的通用引物，检测SRY基因的通用引物包含上游引物SRY
‑
F、下游引物SRY
‑
R，上游引物SRY
‑
F的碱基序列具体为：5
′‑
TGCTTCTGCTATGTTCAG
‑3′
；下游引物SRY
‑
R的碱基序列具体为：5
′‑
GTTCATGGGTCGCTTGAC
‑3′
。
[0007]本专利技术还提供了一种对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，包括检测SRY基因的物质。
[0008]进一步地，对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，还包括PCR反应试剂和DNA提取试剂。
[0009]本专利技术还提供了一种利用以上试剂盒对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，包括下述步骤：
[0010]S1、分别提取待测样品基因组DNA，通过1.5％琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA样品进行检测，确定DNA的完整性和质量，备用；
[0011]S2、以提取的基因组DNA为PCR扩增模板，利用上述检测SRY基因的物质进行PCR扩增反应；
[0012]S3、PCR扩增结束后，通过2％琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，判定方法为：能够扩增出187bp目的片段的样本为公家畜DNA，无目的片段扩增的样本为母家畜DNA。
[0013]进一步地，步骤S1中的待测样本选自毛发、早期胚胎、血液、组织或器官；优选的，步骤S2中PCR反应体系包含：样品DNA(100ng/μL)1μL，2
×
Taq MasterMix 12.5μL，上游引物SRY
‑
F(10μmol/L)1μL，下游引物SRY
‑
R(10μmol/L)1μL，去离子水9.5μL；优选的，步骤1)中的PCR扩增条件为：94℃预热4min；94℃变性45s，53℃退火45s，72℃延伸20s，35个循环；72℃延伸10min。
[0014]本专利技术提供了一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，实现了用1对引物在以上3个物种中鉴别公母，在2个小时内即可完成检测，准确率达到100％，且不受环境条件因素影响。
附图说明
[0015]图1为通用引物PCR扩增片段电泳图；
[0016]图2为基因组DNA电泳图；
[0017]1—五指山猪公猪；2—五指山猪母猪；3—海南猪公猪；4—海南猪母猪；5—海南黑山羊公羊；6—海南黑山羊母羊；7—海南黄牛公牛；8—海南黄牛母牛
[0018]图3为使用通用引物(SRY
‑
F/SRY
‑
R)检测猪、山羊、牛样品的电泳图；
[0019]1—海南猪公猪检测结果；2—海南猪母猪检测结果；3—五指山猪公猪检测结果；4—五指山猪母猪检测结果；5—海南黑山羊公羊检测结果；6—海南黑山羊母羊检测结果；7—海南黄牛公牛检测结果；8—海南黄牛母牛检测结果
[0020]图4为对比例1检测结果的电泳图；
[0021]1‑
6—海南黄牛公牛检测结果；7
‑
8—海南黄牛母牛检测结果；9
‑
14—五指山猪公猪检测结果；15
‑
16—五指山猪母猪检测结果；17
‑
22—海南黑山羊公羊检测结果；23
‑
24—海南黑山羊母羊检测结果。
具体实施方式
[0022]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0023]本专利技术使用的引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
[0024]实施例1——引物的设计与合成
[0025]步骤1：猪、山羊、牛SRY基因序列比对分析
[0026]在NCBI数据库中下载猪、山羊和牛的SRY基因序列(基因ID依次为407740、108634533和280931)。SRY基因在猪、山羊、牛中均是单一外显子，通过比对猪、山羊和牛的SRY基因序列，鉴定出SRY基因序列中的保守区域(在3个物种中碱基相同的序列)。猪、山羊和牛的SRY基因序列信息和比对结果如下。
[0027]①
猪SRY基因序列(斜体加粗标识的是通用引物所在位置)：
[0028][0029][0030]②
山羊SRY基因序列(斜体加粗标识的是通用引物所在位置)
[0031][0032]③
牛SRY基因序列(斜体加粗标识的是通用引物所在位置)
[0033][0034][0035]④
猪、山羊、牛SRY基因序列比对结果(斜体加粗标识的是通用引物所在位置)
[0036][0037][0038][0039]步骤S2：SRY基因通用引物设计与合成
[0040]根据猪、山羊、牛SRY基因序列比对结果，使用Primer Premier 5.0软件，在SRY基因序列保守区域设计通用的扩增引物(M.D2000 DNA Marker抗体)。SRY基因通用的上游引物SRY
‑
F如SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测SRY基因的物质，其特征在于，用于对猪、山羊、牛进行性别鉴定的产品中，检测SRY基因的物质为检测SRY基因的通用引物，检测SRY基因的通用引物包含上游引物SRY
‑
F、下游引物SRY
‑
R，上游引物SRY
‑
F的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：5
′‑
TGCTTCTGCTATGTTCAG
‑3′
；下游引物SRY
‑
R的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，具体为：5
′‑
GTTCATGGGTCGCTTGAC
‑3′
。2.一种对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1中检测SRY基因的物质。3.根据权利要求2所述的对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，其特征在于：试剂盒中还包括PCR反应试剂和DNA提取试剂。4.一种对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，采用权利要求2至3任一所述的试剂盒，其特征在于：包括下述步骤：...

【专利技术属性】
技术研发人员：晁哲，张庆玲，孙瑞萍，任钰为，王峰，郑心力，刘圈炜，
申请(专利权)人：海南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：