一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种鱼源性成分鉴别试剂盒及方法，具体涉及一种利用可视化基因膜芯片鉴别鱼源性成分，试剂盒组成包括基因膜芯片、混合引物、多重PCR预混液、杂交显色试剂。基因膜芯片是在尼龙膜载体上顺序固定有内参基因、大西洋鲑鱼、虹鳟鱼、裸盖鱼、大黄鱼、大马哈鱼、大西洋鳕鱼、河豚鱼、安康鱼、银鲳鱼、罗非鱼、小黄鱼特异性探针。混合引物为用于上述11种鱼类PCR扩增的多重引物。样本经DNA提取、多重PCR扩增后，与基因膜芯片探针进行杂交反应，根据化学显色判定鱼源性种类。本发明专利技术所设计的方法具有通量高、特异性强等优势，同时，操作简便、节约成本。约成本。约成本。

【技术实现步骤摘要】
一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及一种用于鱼源性成分鉴别试剂盒及方法，具体涉及一种利用可视化基因膜芯片鉴别鱼源性成分。

技术介绍

[0002]水产品味道鲜美，富含蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、各种维生素以及钙、磷、钾、碘等多种的矿物质成分，同时脂肪含量低，易于消化吸收，被认为是人类营养平衡性最好的天然食品之一。近年来，随着社会经济的发展，人们生活水平的提高，水产食品需求量与消费量与日俱增，其中鱼类及其制品是最为重要的部分。
[0003]然而，全球范围内鱼类市场错标虚标、造假掺假的现象非常普遍，如染色白姑鱼与黄姑鱼冒充黄花鱼、罗非鱼冒充鲷鱼、油鱼冒充鳕鱼、虹鳟鱼冒充大西洋鲑鱼等。2019年，在全球海产品大会上，爱尔兰国立都柏林大学教授Alan Reill引用欧盟委员会食品欺诈管理系统(AAC
‑
FF)的数据，指出海产食品的掺假位列欧洲食品造假问题的榜首。归结其原因，一方面，鱼类品种繁多，部分种类形态相近、组织结构相似，难以分辨识别，导致错标虚标现象时有发生；另一方面，由于自身品质不同，加之受自然条件因素制约所带来的供需之间的不平衡，造成了较大的价格差异，不法商贩在利益驱动下假冒伪劣、掺假混杂，尤其是在鱼片、鱼糜、鱼丸、鱼香肠、鱼排、鱼干、鱼翅、鱼肚、鱼罐头等深加工鱼类制品中，更是假冒伪劣的重灾区。
[0004]以鱼类及其制品为代表的水产品假冒伪劣不仅扰乱市场秩序，影响社会形象，损害消费者合法权益，而且存在潜在的安全隐患。例如，染色黄鱼涉及违禁染料使用会对人体健康造成严重危害；以淡水养殖的虹鳟鱼假冒深海三文鱼，在生食过程会大大增加感染寄生虫的风险；油鱼冒充鳕鱼被食用后，因其内含大量蜡酯，人体难以消化吸收，会导致腹泻、肠胃痉挛等症状。针对行业现存的乱象，实施市场监管已迫在眉睫。因此，准确可靠的鱼源性成分溯源和鉴别方法至关重要。长期以来，围绕鱼类产品真假鉴别，已开发了很多方法，相较而言，分子生物学检测法更具优势，DNA作为遗传物质是生物体生长和发育的基础，同时具有稳定的结构，对于加工后的制品依然适用。但不同的分子生物学方法也各有优劣，普通PCR法对仪器要求不高，但需要后续电泳，相对繁琐；荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好，但成本相对较高，受制于仪器本身荧光通道数量限制，无法实现对6种以上目标检测；等温扩增对引物设计要求较高；限制性片段长度多态性分析法操作繁琐；DNA条形码鉴别技术具有高通量分析优势，但涉及序列测定，成本较高；基因芯片具有高通量、快速便捷的特点，尤其适用成分不可预知的鱼类制品掺假的识别。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有技术存在的不足，提供一种用于鱼源性成分鉴别试剂盒及方法，能够同时实现对11种鱼源性成分筛查，不仅具有高通量、速度快、低成本优势，而且操作简单，易于使用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒，包括基因膜芯片、混合引物、多重PCR预混液、杂交显色试剂，所述基因膜芯片是指在带负电荷尼龙膜上顺序固定有真核生物内参基因、大西洋鲑鱼、虹鳟鱼、裸盖鱼、大黄鱼、大马哈鱼、大西洋鳕鱼、河豚鱼、安康鱼、银鲳鱼、罗非鱼、小黄鱼特异性探针，探针序列见下表，
[0007]物种探针序列真核生物内参基因5'
‑
NH2 C6
‑
CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC
‑
3'大西洋鲑鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TATTGCAGCTGCCACAGTACTCCATC
‑
3'虹鳟鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CTCGATCCTTGTCCTCATGGTTGTCC
‑
3'裸盖鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TTGGCAGGAGTGAAATTGTCTGGGTC
‑
3'大黄鱼5'
‑
NH2 C6
‑
AGACCTTCTAGGCTTTGCAATCCTCA
‑
3'大马哈鱼5'
‑
NH2 C6
‑
AAACACCACTTTCTTTGACCCAGCG
‑
3'大西洋鳕鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACAGCCTTCTCATCCGTAGTCCACATC
‑
3'河豚鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CACTACACATCCGACATCTCTACCGCC
‑
3'安康鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACACTATACCTCTGATGTCGCCACAGC
‑
3'银鲳鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACTTACAGCACTAACCTCATTAGCCCT
‑
3'罗非鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CCAGACATGGCCTTCCCTCGAATAAA
‑
3'小黄鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TGACTCATCCGAAACCTTCATGCCAA
‑
3'
[0008]其中，5'端采用NH
2 C6修饰，混合引物序列及末端修饰见下表：
[0009]物种探针序列真核生物内参基因5'
‑
NH
2 C6
‑
CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC
‑
3'大西洋鲑鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
TATTGCAGCTGCCACAGTACTCCATC
‑
3'虹鳟鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
CTCGATCCTTGTCCTCATGGTTGTCC
‑
3'裸盖鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
TTGGCAGGAGTGAAATTGTCTGGGTC
‑
3'大黄鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
AGACCTTCTAGGCTTTGCAATCCTCA
‑
3'大马哈鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
AAACACCACTTTCTTTGACCCAGCG
‑
3'大西洋鳕鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
ACAGCCTTCTCATCCGTAGTCCACATC
‑
3'河豚鱼5'
‑
NH
2 C6
‑
CACTACACATCCGACATCTCTACCGCC
‑
3'安康鱼5'
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒，包括基因膜芯片、混合引物、多重PCR预混液、杂交显色试剂，其特征在于：所述基因膜芯片是指在带负电荷尼龙膜上顺序固定有真核生物内参基因、大西洋鲑鱼、虹鳟鱼、裸盖鱼、大黄鱼、大马哈鱼、大西洋鳕鱼、河豚鱼、安康鱼、银鲳鱼、罗非鱼、小黄鱼特异性探针，探针序列见下表：物种探针序列真核生物内参基因5'
‑
NH2 C6
‑
CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC
‑
3'大西洋鲑鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TATTGCAGCTGCCACAGTACTCCATC
‑
3'虹鳟鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CTCGATCCTTGTCCTCATGGTTGTCC
‑
3'裸盖鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TTGGCAGGAGTGAAATTGTCTGGGTC
‑
3'大黄鱼5'
‑
NH2 C6
‑
AGACCTTCTAGGCTTTGCAATCCTCA
‑
3'大马哈鱼5'
‑
NH2 C6
‑
AAACACCACTTTCTTTGACCCAGCG
‑
3'大西洋鳕鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACAGCCTTCTCATCCGTAGTCCACATC
‑
3'河豚鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CACTACACATCCGACATCTCTACCGCC
‑
3'安康鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACACTATACCTCTGATGTCGCCACAGC
‑
3'银鲳鱼5'
‑
NH2 C6
‑
ACTTACAGCACTAACCTCATTAGCCCT
‑
3'罗非鱼5'
‑
NH2 C6
‑
CCAGACATGGCCTTCCCTCGAATAAA
‑
3'小黄鱼5'
‑
NH2 C6
‑
TGACTCATCCGAAACCTTCATGCCAA
‑
3'其中，5'端采用NH
2 C6修饰，混合引物序列及末端修饰见下表：
2.根据权利要求1所述的一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒，其特征在于：所述交显色试剂包括去活化液、去活化清洗液、杂交液、杂交清洗液、酶孵育液、孵育清洗液1、孵育清洗液2、碱性磷酸酶标记链霉亲和素和碱性磷酸酶标记化学显示底物。3.根据权利要求2所述的一种多种鱼源性成分鉴别试剂盒，其特征在于：所述去活化液包括100mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵彪，周小兰，陈刚，高利亭，管祁，徐陈红，汪少芸，蔡茜茜，张霞，王振涛，
申请(专利权)人：南通市产品质量监督检验所，
类型：发明
国别省市：