【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种云斑尖塘鳢遗传性别相关的snp分子标记及其应用。
技术介绍
1、云斑尖塘鳢(oxyeleotris marmorata)俗称笋壳鱼、泰国笋壳鱼、泰国鳢鱼等，隶属于硬骨鱼纲(osteichthyes)、鲈形目(percifomes)、塘鳢科(eletridae)、尖塘鳢属(oxyeleotris)。云斑尖塘鳢属于名贵的淡水养殖鱼类，其肉质细嫩、无肌间刺，蛋白质含量丰富，属于高档水产品之一，深受广大消费者喜爱。云斑尖塘鳢生长速度具有典型的雌雄二态性，相同养殖条件下，雄鱼生长速度比雌鱼快25％以上。在雌雄混合的池塘中，因为规格不齐，常造成出塘价格被压低，降低渔民收入，或需要多批次上市，给生产操作带来不便。为了解决这一产业问题，若实现全雄鱼养殖，可以推动云斑尖塘鳢养殖业健康良性发展，为人们提供高档的动物蛋白。
2、鱼类的性别决定表现出高度的可塑性，有基因性别决定、环境性别决定和基因-温度性别决定。不同类型的性别决定方式具有不同的特点，性腺形成和分化阶段是性别调控的关键。在对云斑尖塘鳢染色体观察中，没有发现与性别相关的异性染色体，也未见温度等环境因素影响云斑尖塘鳢性别分化的报道，推测其可能是基因性别决定机制。目前国外学者但国内外关于云斑尖塘鳢性别决定和性别控制方面鲜见研究，这极大限制了全雄鱼育种进度，有必要开展该方面研究工作，为单性育种奠定理论和技术依据。目前要确定一个物种的性别决定机制，开发性别特异分子标记成为目前最有效的研究鱼类性别机制和开展遗传性别鉴定的方法。
1、本专利技术第一方面的目的，在于提供与云斑尖塘鳢性别相关的snp分子标记。
2、本专利技术第二方面的目的，在于提供用于扩增本专利技术第一方面的snp分子标记的引物组。
3、本专利技术第三方面的目的，在于提供一种试剂盒。
4、本专利技术第四方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的snp分子标记、本专利技术第二方面的引物组和/或本专利技术第三方面的试剂盒的应用。
5、本专利技术第五方面的目的，在于提供一种检测云斑尖塘鳢性别的方法。
6、本专利技术第六方面的目的，在于提供本专利技术第五方面的方法的应用。
7、为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
8、本专利技术第一个方面，在于提供与云斑尖塘鳢性别相关的snp分子标记，所述snp分子标记的序列如seq id no:1所示，snp位点位于seq id no:1所示序列自5’端起第295位，其碱基为a/g。
9、优选地，当所述snp位点的基因型为aa纯合子时，云斑尖塘鳢性别为雄鱼，当所述snp位点的基因型为ag杂合子时，云斑尖塘鳢性别为雌鱼。
10、本专利技术第二个方面，在于提供用于扩增本专利技术第一方面的snp分子标记的引物组。
11、优选地，所述引物组的核苷酸序列如下所示：
12、f：5'-tgtatttcggcaaggatc-3'(seq id no:2)；
13、r：5'-ttcatcaaacggacgact-3'(seq id no:3)。
14、本专利技术第三个方面，在于提供一种包含本专利技术第二方面的引物组的试剂盒。
15、优选地，所述试剂盒还包括pcr中使用的缓冲液。
16、优选地，所述pcr中使用的缓冲液为pcr扩增所需要的任何试剂，比如dntp、taq酶、mgcl2等。
17、本专利技术第四个方面，在于提供本专利技术第一方面的snp分子标记、本专利技术第二方面的引物组和/或本专利技术第三方面的试剂盒在(1)～(4)中任一项中的应用：
18、(1)鉴定或辅助鉴定云斑尖塘鳢性别；
19、(2)制备鉴定或辅助鉴定云斑尖塘鳢性别的产品；
20、(3)云斑尖塘鳢辅助育种；
21、(4)制备云斑尖塘鳢辅助育种的产品。
22、本专利技术第五个方面，在于提供一种检测云斑尖塘鳢性别的方法，通过检测待测云斑尖塘鳢的基因组中本专利技术第一方面的snp位点的基因性，根据基因型确定所述待测云斑尖塘鳢的性别。
23、优选地，当所述snp位点的基因型为gg时，待测云斑尖塘鳢的遗传性别为雄性，当所述snp位点的基因型为ag时，待测云斑尖塘鳢的遗传性别为雌性。
24、优选地，所述方法包括以下步骤：以待测云斑尖塘鳢dna为模板，使用本专利技术第二方面的引物组或本专利技术第三方面的试剂盒进行pcr扩增，得到pcr扩增产物；对pcr扩增产物进行测序分析，确定待测云斑尖塘鳢的基因组中所述的snp位点的基因型。
25、优选地，所述云斑尖塘鳢dna可以采用本
的常规手段提取得到，包括酚氯仿法和各种dna提取试剂盒。
26、优选地，所述pcr扩增的反应程序为90～94℃预变性3～6min；90～94℃变性30～35s，50～55℃退火30～35s，70～72℃延伸80～90s，30～35个循环；70～72℃延伸5～10min。
27、优选地，所述pcr扩增的反应体系包括1～3mmol/lmgcl2、0.1～0.2mmol/l dntp、0.05～0.1u/μl taq酶，上下游引物各0.2～0.3μmol/l。
28、优选地，所述测序包括但不限于使用sanger法进行测序。
29、本专利技术第六个方面，在于提供本专利技术第五方面的方法在鉴定或辅助鉴定云斑尖塘鳢性别和/或云斑尖塘鳢辅助育种中的应用。
30、本专利技术的有益效果是：
31、本专利技术利用分子遗传学及分子生物学的方法获得云斑尖塘鳢性别相关的snp分子标记，所述snp分子标记可用于云斑尖塘鳢性别鉴定以及辅助育种，不受云斑尖塘鳢的年龄、性别等限制，可以实现在早期幼鱼阶段就可以进行性别筛选的目的。通过该snp分子标记分型结果，确定云斑尖塘鳢为zw性别决定。
32、利用本专利技术的snp位点，可快速对云斑尖塘鳢遗传性别进行鉴定，在云斑尖塘鳢单性育种方面具有重要的应用价值，同时在定位性别决定基因及性别决定机制研究中也具有重要应用前景。而且对家系建立，控制养殖群体的雌雄性别比例，推动云斑尖塘鳢养殖业可持续健康发展具有重要意义和应用价值。
33、与之前解剖检测或生殖孔观察相比，本专利技术提供的检测云斑尖塘鳢性别的方法具有目的性强、准确度高的优点，且操作简单、检测快速，对鱼体伤害少，便于广泛推广使用等优点。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.与云斑尖塘鳢性别相关的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记的序列如SEQID NO:1所示，SNP位点位于SEQ ID NO:1所示序列自5’端起第295位，其碱基为A/G。
2.根据权利要求1所述的SNP分子标记，其特征在于，当所述SNP位点的基因型为AA纯合子时，云斑尖塘鳢性别为雄鱼，当所述SNP位点的基因型为AG杂合子时，云斑尖塘鳢性别为雌鱼。
3.用于扩增权利要求1或2所述的SNP分子标记的引物组。
4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列如下所示：
5.一种试剂盒，包括权利要求3或4所述的引物组。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR中使用的缓冲液。
7.权利要求1或2所述的SNP分子标记、权利要求3或4所述的引物组和/或权利要求5或6所述的试剂盒在(1)～(4)中任一项中的应用：
8.一种检测云斑尖塘鳢性别的方法，通过检测待测云斑尖塘鳢的基因组中权利要求1或2所述的SNP位点的基因型，根据基因型确定所述待测云斑尖塘鳢
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：以待测云斑尖塘鳢DNA为模板，使用权利要求3或4所述的引物组或权利要求5或6所述的试剂盒进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；对PCR扩增产物进行测序分析，确定待测云斑尖塘鳢的基因组中权利要求1或2所述的SNP位点的基因型。
10.权利要求8或9所述的方法在鉴定或辅助鉴定云斑尖塘鳢性别和/或云斑尖塘鳢辅助育种中的应用。
...【技术特征摘要】
1.与云斑尖塘鳢性别相关的snp分子标记，其特征在于，所述snp分子标记的序列如seqid no:1所示，snp位点位于seq id no:1所示序列自5’端起第295位，其碱基为a/g。
2.根据权利要求1所述的snp分子标记，其特征在于，当所述snp位点的基因型为aa纯合子时，云斑尖塘鳢性别为雄鱼，当所述snp位点的基因型为ag杂合子时，云斑尖塘鳢性别为雌鱼。
3.用于扩增权利要求1或2所述的snp分子标记的引物组。
4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列如下所示：
5.一种试剂盒，包括权利要求3或4所述的引物组。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr中使用的缓冲液。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：樊佳佳，马冬梅，朱华平，钟再选，田园园，林明辉，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。