【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检测，具体涉及一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠的制备方法。
技术介绍
1、膀胱癌是指起源于膀胱尿路上皮的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位。根据起源细胞的不同，膀胱癌可分三类，主要包括尿路上皮(移行细胞)癌、鳞状细胞癌和腺癌。其中最常见的是膀胱尿路上皮癌，约占膀胱癌患者总数的90％以上，通常所说的膀胱癌就是指膀胱尿路上皮癌。
2、膀胱癌的筛查方法有膀胱镜检查、尿液检查、超声检查、ct检查、磁共振影像检查(mri)等，膀胱镜检查是膀胱癌诊断的金标准，但这种方法具有一定的侵入性，容易给患者造成创伤。由于膀胱癌的特殊性，使得尿液可作为膀胱癌独特检测样本，并且尿液具有量大、易获取、易被患者接受的独特优势。
3、免疫磁珠技术的应用是近年来较为热门的研究方向，通过与不同配体的耦连，从而实现细胞分选、免疫识别、核酸分离和蛋白纯化，广泛应用于生物医学领域。将纳米磁珠用于癌症的早期诊断，对病人存活率的提高具有重要作用。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠的制备方法。本专利技术采用了静电吸附的原理，针对癌细胞表面带负电的特性而设计，提供了一种尿样分离膀胱癌细胞的分离方法。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
3、本专利技术提供了一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠，所述纳米磁珠为核壳结构，外壳为季铵盐化葡聚糖和聚乙二醇，内核
4、作为本专利技术的一个实施方式，所述纳米磁珠是粒径为150～250纳米的单分散颗粒。
5、本专利技术提供了一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠的制备方法，包括如下步骤：
6、将氯化铁或其水合物(fecl3、水合物为fecl3·6h2o)、醋酸钠或其水合物(naac、水合物为naac·3h2o)、naoh、聚乙二醇、葡聚糖季铵盐溶于溶剂中，搅拌至完全溶解后，升温共沉淀反应，产生葡聚糖季铵盐和聚乙二醇包裹的磁性纳米颗粒；待反应后冷却至室温，得到反应产物：黑色固体粉末，即为纳米磁珠(单分散的磁珠)。
7、本专利技术中，氯化铁或其水合物、醋酸钠或其水合物、naoh是合成四氧化三铁，聚乙二醇、葡聚糖季铵盐是包裹四氧化三铁，使其包裹一层季铵盐，并有助于其在水中分散。
8、本专利技术葡聚糖季铵盐是完全亲水的，加强了纳米磁珠的亲水性和分散性，使磁珠在水中更容易分散，稳定，而且通过一步法合成，合成简单，水性溶剂中污染小。葡聚糖季铵盐密度低，如使用密度较大的包覆物质(如sio2)，会使磁珠密度更大更容易沉淀、团聚，在水相体系不稳定，影响后面和细胞的结合。同时，同样质量的壳聚糖季铵盐比其它包覆物质(如pei)带有更强的正电荷，吸附肿瘤细胞的作用更强。
9、作为本专利技术的一个实施方式，所述氯化铁或其水合物、醋酸钠或其水合物、naoh、聚乙二醇、葡聚糖季铵盐与溶剂的用量比为1g：1～5g：0～1g：1～5g：2～10g：10～50ml，优选为1g：2～4g：0.2～0.5g：1～4g：2～8g：10～50ml。
10、作为本专利技术的一个实施方式，所述聚乙二醇(peg)的相对分子量为200～6000，优选为400～800。包覆peg具有以下作用：(1)包覆peg能够使得纳米粒子具有水溶性；peg是两亲性聚合物，它既具有亲水基同时也有亲油基，亲油基可通过与纳米粒子表面的疏水基团发生配位体交换，而使得纳米粒子键联上peg中的亲水基，最终得到水溶性的纳米粒子。(2)包覆peg能够使得纳米粒子的单分散性更好；由于peg在与其周围的水分子有很好的配位且在水溶液中的排斥体积大，可以有效的抑制纳米粒子的聚集，进而使得纳米粒子可以很好的分散开。(3)包覆peg能够使得纳米粒子与生物组织兼容；由于peg生物稳定性很好、不具有毒性且通常不会亲附于生物组织内的蛋白，因此能够与生物组织兼容。
11、作为本专利技术的一个实施方式，所述溶剂为二甲基亚砜和水混合溶剂，体积比是1：1～10。
12、作为本专利技术的一个实施方式，所述搅拌的速度为100～300rpm。
13、作为本专利技术的一个实施方式，所述反应的温度为120～240℃，时间为8～20h，优选为140～180℃，8～14h。反应是在50ml反应釜中进行。
14、作为本专利技术的一个实施方式，所述反应产物用去离子水清洗后，用磁铁收集，真空干燥保存，得到的黑色固体粉末。
15、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
16、(1)本专利技术磁珠制备操作简单，粒径均一分散，是一种表面带正电荷的纳米磁珠，便于富集带负电荷的癌细胞；
17、(2)本专利技术是通过一步法(一次性加热，一锅法合成)，直接在磁珠表面包覆葡聚糖季铵盐，通过季铵盐吸附肿瘤细胞，此外本专利技术磁珠的合成方法和传统的热溶剂法不同，本专利技术是在水性溶剂中进行的，使反应产物在水中分散更好，形貌更均一。
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1.一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠为核壳结构，外壳为季铵盐化葡聚糖和聚乙二醇，内核为Fe3O4纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠是粒径为150～250纳米的单分散颗粒。
3.一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氯化铁或其水合物、醋酸钠或其水合物、NaOH、聚乙二醇、葡聚糖季铵盐与溶剂的用量比为1g：1～5g：0～1g：1～5g：2～10g：10～50ml。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇的相对分子量为200～6000。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述溶剂为二甲基亚砜和水组成的混合溶剂，二甲基亚砜、水的体积比是1：1～10。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌的速度为100～300rpm。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述升温共沉淀反应的温度为120～240℃，时间为
9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述反应产物用去离子水清洗后，用磁铁收集，真空干燥保存，得到黑色固体粉末。
...【技术特征摘要】
1.一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠为核壳结构，外壳为季铵盐化葡聚糖和聚乙二醇，内核为fe3o4纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的纳米磁珠，其特征在于，所述纳米磁珠是粒径为150～250纳米的单分散颗粒。
3.一种用于筛选膀胱癌细胞的纳米磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述氯化铁或其水合物、醋酸钠或其水合物、naoh、聚乙二醇、葡聚糖季铵盐与溶剂的用量比为1g：1～5g：0～1g：1～5g：2～10g：10～50ml。
5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨东风，万凯丽，杜旭红，杨宗岐，程霞英，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：
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