一种抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因表达的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程、生物医药技术领域，具体涉及一种抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因表达的siRNA及其在制备预防和/或治疗长角血蜱传染病药物中的应用。所述的siRNA能够与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因编码区的845

【技术实现步骤摘要】
一种抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因表达的siRNA及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程、生物医药
，具体涉及一种抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因表达的siRNA及其应用。
技术背景
[0002]长角血蜱(属硬蜱科)Haemaphysalis longicornis(Acari:Ixodidae)是专性吸血的外寄生虫，直接侵袭人和畜禽，可传播包括多种细菌、立克次体、埃利克氏体、巴贝斯虫和病毒等30余种严重危害公共安全的病原体。(Jin Luo,et al.Micropathogen Community Analysis in Hyalomma rufipes via High
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Throughput Sequencing of Small RNAs.Front Cell Infect Microbiol.2017,7:374.)。而其所传播的卵形巴贝斯(Babesia ovata)引起的巴贝斯虫病可造成罹患动物贫血、黄疸、体温升高、血红蛋白尿及患畜死亡。传统药物的使用仅在一定程度上缓解了上述问题，例如专利CN104147000B报道了一种防治牛羊焦虫病及传播媒介蜱的药物喷涂剂及其制备方法，将聚乙二醇
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羟基硬脂酸酯、残杀威、青蒿琥酯、中碳链三甘酯、1,2丙二醇、无水乙醇纳入棕色三角瓶中，置棕色三角瓶于恒温磁力搅拌器上，以300～500rpm搅拌至药物完全溶解后加入氮酮，再次搅拌至体系均一、透明、澄清为止；该制剂为外用制剂，其中残杀威用于牛羊焦虫病体外传播媒介
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蜱的驱杀，青蒿琥酯用于牛羊体内感染焦虫的预防与治疗；专利技术专利CN102861118A报道了紫茎泽兰提取物在制备杀灭蜱的药物中的应用，紫茎泽兰乙醇提取物浓度为1.0
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1.5g/ml，对长角血蜱的幼蜱和若蜱具有良好的杀灭效果。
[0003]上述研究均是使用化学药物对蜱进行抑制，但是，传统化学药物造成的环境污染、农药残留等问题，使得蜱及蜱传病的防控举步维艰。任何病原的生活史都会经历传播媒介、传播途径、易感动物的过程，因此，切断病原传播的循环链条，就会达到消减蜱或者蜱传病疾病的目的。
[0004]本专利技术意外发现，通过抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因(S6K)，能够抑制卵形巴贝斯虫侵染长角血蜱的能力；而且本专利技术提供了一种抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA，所述siRNA与S6K基因编码区的845
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863位核苷酸结合，特异性的干扰或抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达；进而抑制有效阻止卵形巴贝斯虫的垂直传播。

技术实现思路

[0005]基于上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种抑制/干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA及应用，具体包括以下内容：
[0006]第一方面，本专利技术提供了长角血蜱核糖体蛋白S6激酶为靶点在筛选预防或治疗长角血蜱感染病或巴贝斯虫病药物中的应用，所述药物抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达。
[0007]优选地，所述药物与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因编码区的845
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863位核苷酸结合，抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达。
[0008]第二方面，本专利技术提供了抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的试剂在制备预防或治疗长角血蜱传染病或巴贝斯虫病药物中的应用。
[0009]优选地，所述的药物为干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA；所述siRNA与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶编码区的845
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863位核苷酸结合。
[0010]优选地，所述的siRNA的序列如SEQ ID No.2所示。
[0011]第三方面，本专利技术提供了一种抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA，所述siRNA与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因编码区的845
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863位核苷酸结合干扰或抑制长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达。
[0012]优选地，所述的siRNA的序列如SEQ ID No.2所示。
[0013]第四方面，本专利技术提供了上述第三方面所述的siRNA在制备预防或治疗长角血蜱感染病或巴贝斯虫病药物中的应用。
[0014]第五方面，本专利技术提供了一种组合物，所述的组合物包括上述第三方面所述的siRNA，以及药学上可接受的其他辅料。
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA，所述siRNA与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因编码区的845
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863位核苷酸结合，抑制长角血蜱S6K基因表达，使S6K的表达丰度降低31.54％，进而有效阻止卵形巴贝斯虫的垂直传播，在卵形巴贝斯虫病的防控中具有重要意义。
附图说明
[0016]图1为S6K基因PCR扩增结果，其中2000bp为DNA marker；2922bp为S6K基因编码区PCR扩增结果；
[0017]图2为siRNA干扰效果评价结果；
[0018]图3为卵形巴贝斯虫感染宿主第六天血涂片镜检结果；
[0019]图4为RNAi后长角血蜱次代卵内卵形巴贝斯虫感染水平分析结果；其中Group1
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4为显微注射siRNA的实验组阳性样品，NC为显微注射NC的样品，Control为空白对照。
具体实施方式
[0020]下面结合具体的实施例对本专利技术的保护范围进行详细的论述，但是应当说明的是，本专利技术的保护范围并不受以下实施例的限制。
[0021]在本专利技术中，siRNA(Small interfering RNA)是一种小RNA分子(～21
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25核苷酸)，由Dicer(RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。siRNA是siRISC的主要成员，与靶mRNA互补配对后使靶基因沉默。
[0022]RNAi是在研究秀丽新小杆线虫(C.elegans)反义RNA(antisense RNA)的过程RNAi实验图片中发现的，由dsRNA介导的同源RNA降解过程。1995年，Guo等发现注射正义RNA(sense
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RNA)和反义RNA均能有效并特异性地抑制秀丽新小杆线虫par
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1基因的表达，该结果不能使用反义RNA技术的理论做出合理解释。直到1998年，Fire等证实Guo等发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量dsRNA而引发，并将
这一现象命名为RNAi。
[0023]专利技术中所使用的试剂均可直接从市场中购买。
[0024]实施例一、长角血蜱S6K基因序列的获取以及抑制基因表达的siRNA的制备
[0025]实验根据GeneBank(登陆号：AB491581.1)上长角血蜱S6K基因序列设计引物，长角血蜱S6K基因序列如SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长角血蜱核糖体蛋白S6激酶为靶点在筛选预防或治疗长角血蜱感染病或巴贝斯虫病药物中的应用，其特征在于，所述药物抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶基因编码区的845
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863位核苷酸结合，抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶的表达。3.抑制或干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的试剂在制备预防或治疗长角血蜱传染病或巴贝斯虫病药物中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的药物为干扰长角血蜱核糖体蛋白S6激酶表达的siRNA；所述siRNA与长角血蜱核糖体蛋白S6激酶编码区的845
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗金，刘光远，张高峰，任巧云，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：