TIE2结合剂及其使用方法技术

本发明专利技术提供Tie

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TIE2结合剂及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请案请求于2020年3月24日递交的美国临时专利申请案第62/993930号及于2020年6月30日递交的美国临时专利申请案第63/046318的优先权，这些申请案通过引用以其整体并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交，并以引用方式以其全部内容并入本文。所述ASCII副本创建于2021年3月17日，命名为P35891
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WO_SeqList.txt，大小为107,354字节。


[0005]当前公开的主题涉及包括抗Tie2抗体的Tie2结合剂，以及使用该结合剂的缀合物及方法。

技术介绍

[0006]Tie2为用于治疗各种眼部疾病的有前景的治疗靶标(参见，例如，Campochiaro与Peters,2016,Curr Diab Rep,16:126，Whitehead等人，2019,J Diabetes Res,2019:5140521，Hussain等人，2019,Expert Opin Investig Drug,28:861
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869)。Tie2为一种通过内皮细胞特异性表达的受体酪氨酸激酶，并且已经显示促进内皮稳定以及降低血管通透性。已知血管渗漏导致几种常见眼部疾病的视觉损害，包括但不限于糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病性视网膜病变(DR)及年龄相关性黄斑变性(AMD)。
[0007]经最广泛研究的Tie2配体为血管生成素1(Ang1)及血管生成素2(Ang2)。Ang1为一种Tie2强激动剂，并且其已经显示抑制眼部新血管形成以及血液视网膜屏障的分解(参见，例如，Nambu等人，2004,Gene Therapy,11:865
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873)。Ang2为Tie2的上下文相关拮抗剂，并且其表达的增加与多种眼部疾病相关，包括DME、湿性AMD、DR、转移、败血症和发炎。除此之外，Ang2竞争性地与Tie2结合并且抑制Ang1信号传导，导致内皮及血管不稳定、血液视网膜屏障的分解以及发炎(Klaassen等人，2013,Prog Retin Eye Res,34:19
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48，Saharinen等人，2017,Nat Rev Drug Discov,16:635
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661)。
[0008]Tie受体，包括Tie1和Tie2，是第1型跨膜蛋白受体酪氨酸激酶(RTK)(Ramsauer,M.&D
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Amore,P.A.J.Clin.Invest.(2002)；110:1615
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1617)。Tie代表具有免疫球蛋白和EGF同源结构域的酪氨酸激酶受体。Tie2位于所有形成血管的内皮细胞中以及小鼠胚胎的心内膜中(Korhonen等人，Blood(1992)；80:2548
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2555)。Tie2的胞外域或细胞外结构域(“ECD”)包括三个免疫球蛋白(Ig)结构域(Ig1、Ig2和Ig3)、三个表皮生长因子(EGF)结构域及III型纤连蛋白结构域(FNIII)。Tie2的Ig
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EGF区介导血管生成素识别及结合(Fiedler,U.等人，J.Biol.Chem.(2003)；278:1721
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1727；Barton,W.A.,等人，Structure(2005)；13:825
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832)。
[0009]已经鉴定了Tie2受体的两个配体：血管生成素
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1(Ang1)及血管生成素
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2(Ang2)。
Ang
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1为一种Tie2激动剂，其结合以及诱导Tie2的酪氨酸磷酸化，并且其在体内的表达与血管发育密切相关(Davis等人，Cell(1996)；87:1161
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1169)。缺乏Ang
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1的小鼠表现出血管生成缺陷，会让人联想到在缺乏Tie2的小鼠中观察到的那些缺陷，这支持Ang
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1为Tie2的主要生理配体以及Tie2具有关键的体内血管生成作用(Suri等人，Cell(1996)；87:1171
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1180)。Ang
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1为抗发炎性，促进血管完整性，并且降低血管通透性。Ang2被识别为Tie2的天然出现的拮抗剂。Ang2的基因转殖过度表达破坏了小鼠胚胎中的血管形成(Maisonpierre等人，Science 277:55
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60,1997)。Ang2可为促炎性，破坏EC静止，并且增加血管通透性。总体而言，研究支持Ang1/Ang2/Tie2系统在血管生成中起着关键作用。鉴于Tie2在血管生成中的重要作用，需要识别Tie2的试剂以及使用这些试剂的方法。此外，用作Tie2激动剂并且可降低血管通透性或增加血管完整性的组合物具有作为治疗剂，尤其用于治疗眼部疾病的极大潜能。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供抗Tie2抗体，包含该抗Tie2抗体或其片段的组合物(例如，缀合物)，及其使用方法。
[0011]当前公开的主题提供特异性结合Tie2的经分离的抗体，或其抗原结合片段，包含至少一种或多种抗Tie2抗体或其抗原结合片段的组合物，及其使用方法。在一个示例性实施例中，抗Tie2抗体为Fab。
[0012]在一个方面，提供特异性结合Tie2的抗体或其抗原结合片段，其中，该抗Tie2抗体包含重链(HC)可变结构域(VH结构域)及轻链(LC)可变结构域(VL结构域)，其中，该VH结构域包含：包含NTDIS(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列的CDR
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H1，包含RISPSDGNTYYADSVKG(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列的CDR
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H2，以及，包含(a)RTRWASX1AX2DY(SEQ ID NO:5，其中，X1为M、L、K、F、Y、R、N、Q、H或W，且/或X2为F、Y、L、Q、I、K或H)、(b)RTRWASWAMDY(SEQ ID NO:6)或(c)RTRWASWAFDY(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列的CDR
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H3；该VL结构域包含：包含RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列的CDR
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L1，包含SASFLYS(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列的CDR
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L2，以及，包含QQSYTTPPT(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列的CDR
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L3。在一些实施例中，CDR
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H3包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7。在特定的实施例中，CDR
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H3包含SEQ ID NO:7。
[0013]在一些实施例中，该抗Tie2抗体包含SEQ ID NO:11的VH框架FR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与Tie2特异性结合的经分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含(a)CDR
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H1，其包含氨基酸序列NTDIS(SEQ ID NO:3)，(b)CDR
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H2，其包含氨基酸序列RISPSDGNTYYADSVKG(SEQ ID NO:4)，和(c)CDR
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H3，其包含氨基酸序列RTRWASX1AX2DY(SEQ ID NO:5)，其中X1为M、L、K、F、Y、R、N、Q、H或W且/或X2为F、Y、L、Q、I、K或H；及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含(d)CDR
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L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:8)，(e)CDR
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L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:9)，和(f)CDR
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L3，其包含氨基酸序列QQSYTTPPT(SEQ ID NO:10)。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
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H3包含氨基酸序列RTRWASWAMDY(SEQ ID NO:6)。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR
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H3包含氨基酸序列RTRWASWAFDY(SEQ ID NO:7)。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为单克隆抗体、人源化抗体、抗体片段和/或嵌合抗体。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其为结合Tie2的Fab片段。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：VL结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；以及VH结构域，其包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：VL结构域，其包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；以及VH结构域，其包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。8.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO:21的VL序列和SEQ ID NO:20的VH序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含工程化半胱氨酸，其中所述工程化半胱氨酸选自HC中的T120C、G166C、G178C、T187C和T209C；或所述工程化半胱氨酸选自LC中的Q124C、R142C、Q155C、L201C、T206C、K107C、K126C和K149C；其中所述工程化半胱氨酸的残基号是根据EU编号。10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述工程化半胱氨酸选自所述HC中的T209C及所述LC中的T206C。11.根据权利要求9或10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述工程化半胱氨酸为所述LC中的T206C。12.根据权利要求9或10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述工程化半胱氨酸为所述HC中的T209C。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：LC，其包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和HC，其包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：LC，其包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列；和HC，其包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列具有至少99％序列同一性的氨基酸序列。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含：LC，其包含SEQ ID NO:25的序列；和HC，其包含SEQ IDNO:55的序列。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述HC恒定区终止于221位(EU编号)。17.一种与Tie
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2特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO:55的HC序列和SEQ ID NO:25的LC序列。18.一种与Tie
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2特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含SEQ ID NO:23的HC序列和SEQ ID NO:56的LC序列。19.一种经分离的核酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。20.一种宿主细胞，其包含根据权利要求19所述的核酸。21.一种与Tie2结合的缀合物，其中所述缀合物包括至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种或至少八种根据权利要求1至18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段中的每一者连接至多聚化部分。22.根据权利要求21所述的缀合物，其中所述缀合物使得体外测定中的Tie2蛋白水平降低小于25％、小于50％...

【专利技术属性】
技术研发人员：严民宏，张谷，N，
申请(专利权)人：基因泰克公司，
类型：发明
国别省市：