一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。本发明专利技术所述啶氧菌酯半抗原与啶氧菌酯的骨架结构重叠度高，用其制备的人工抗原可以将啶氧菌酯的特征结构暴露出来，使免疫所得的啶氧菌酯人工抗体具有良好的特异性和灵敏度。基于本发明专利技术制备所得啶氧菌酯人工抗原和单克隆抗体，本发明专利技术还构建了一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法，所述方法的操作简单，检测特异性好，与啶氧菌酯的类似物均无交叉反应，可高特异性识别啶氧菌酯；检测灵敏度高，对啶氧菌酯的最低检测限为0.0263ng/mL；IC

【技术实现步骤摘要】
一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于农药残留检测
更具体地，涉及一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]啶氧菌酯是目前使用效果最好的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂之一，被广泛应用于治疗谷类或蔬菜等农作物的真菌性病害，对白粉病、叶枯病、褐斑病等多种病害均有良好的防治效果，具有良好广阔的市场前景。因此，啶氧菌酯的使用量和使用频率逐年攀升，药物残留问题也越来越受到人们的重视。而提供一种检测特异性好、灵敏度高的检测啶氧菌酯的产品和方法，可以对啶氧菌酯的药物残留进行监测，避免因摄入过多啶氧菌酯给健康带来损害。
[0003]目前检测啶氧菌酯残留的主要方法有气相色谱(GC)、液相色谱(LC)以及气相色谱和质谱联用等，此类方法的不足之处在于其检测啶氧菌酯时需要特定的仪器，对仪器的要求较高，且样本前处理和测定过程的操作繁琐，需要专业人员操作，不适于大量样本的批量检测。酶联免疫吸附检测法具有操作简单、一次检测样本量大、仪器设备要求低和样本前处理相对简单等优点，适于农药残留的市场监测和现场监控。现虽已有关于啶氧菌酯的免疫分析方法，但其检测效果仍有待进一步提升。对于啶氧菌酯的酶联免疫吸附检测法来说，抗体的效果很大程度上影响着其检测的特异性和灵敏度，而抗体的效果又取决于引起动物发生免疫反应的抗原结构。因此，提供一种可获得高特异性啶氧菌酯抗体的半抗原和人工抗原，对建立能够快速、灵敏、准确地检测啶氧菌酯的方法具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种啶氧菌酯半抗原。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供所述啶氧菌酯半抗原在制备啶氧菌酯人工抗原中的应用。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供一种啶氧菌酯人工抗原。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供所述人工抗原在制备啶氧菌酯人工抗体中的应用。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供一种啶氧菌酯单克隆抗体。
[0010]本专利技术的第六个目的是提供一种基于酶联免疫检测啶氧菌酯的免疫原与包被原的组合物。
[0011]本专利技术的第七个目的是提供所述啶氧菌酯半抗原、所述啶氧菌酯人工抗原、所述单克隆抗体或所述组合物在制备啶氧菌酯检测产品中的应用。
[0012]本专利技术的第八个目的是提供一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法。
[0013]本专利技术的第九个目的是提供一种啶氧菌酯检测试剂盒。
[0014]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0015]本专利技术提供了一种啶氧菌酯半抗原，其结构式如式(I)所示：
[0016][0017]本专利技术还提供了式(I)所示啶氧菌酯半抗原的制备方法，所述半抗原是通过将啶氧菌酯上的醚基功能团醇解为羟基，生成的苯基乙烯醇很不稳定，会发生重排，形成乙醛，与羧甲基羟胺半盐酸盐发生反应得到。
[0018]本专利技术制备所得啶氧菌酯半抗原与啶氧菌酯的骨架结构重叠度高，用其制备的人工抗原可以将啶氧菌酯的特征结构暴露出来，使免疫所得的啶氧菌酯人工抗体具有良好的特异性和灵敏度。因此，本专利技术请求保护式(I)所示啶氧菌酯在制备啶氧菌酯人工抗原中的应用。
[0019]本专利技术还提供了一种啶氧菌酯人工抗原，所述人工抗原是将式(I)所示啶氧菌酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述人工抗原的结构式如式(II)所示：
[0020][0021]具体地，所述载体蛋白为鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。
[0022]本专利技术利用制备所得啶氧菌酯人工抗原免疫小鼠发现，所免疫的所有小鼠均可以产生鼠多抗，所得抗血清对目标分析物啶氧菌酯有抑制效果。因此，本专利技术还申请保护式(II)所示啶氧菌酯人工抗原在制备啶氧菌酯人工抗体中的应用。
[0023]本专利技术还提供了一种啶氧菌酯单克隆抗体，所述抗体是以式(I)所示啶氧菌酯半抗原与血蓝蛋白的偶联物为免疫原制备得到。
[0024]本专利技术还提供了一种基于酶联免疫检测啶氧菌酯的免疫原与包被原的组合物，所述免疫原为式(I)所示啶氧菌酯半抗原与血蓝蛋白的偶联物，所述包被原为式(I)所示啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物。
[0025]本专利技术还请求保护式(I)所示啶氧菌酯半抗原、式(II)所示啶氧菌酯人工抗原、所述单克隆抗体或所述组合物在制备啶氧菌酯检测产品中的应用。
[0026]本专利技术还提供了一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法，所述方法是以式(I)所示啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白偶联得到的人工抗原为包被原，以所述啶氧菌酯单克隆抗体作为检测抗体进行检测。
[0027]本专利技术还提供了一种啶氧菌酯检测试剂盒，所述试剂盒中含有式(I)所示啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物和所述啶氧菌酯单克隆抗体。
[0028]本专利技术具有以下有益效果：
[0029]本专利技术提供了一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。本专利技术所述
啶氧菌酯半抗原与啶氧菌酯的骨架结构重叠度高，用其制备的人工抗原可以将啶氧菌酯的特征结构暴露出来，使免疫所得的啶氧菌酯人工抗体具有良好的特异性和灵敏度。基于本专利技术制备所得啶氧菌酯人工抗原和单克隆抗体，本专利技术还构建了一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法，所述方法的操作简单，检测特异性好，与啶氧菌酯的类似物均无交叉反应，可高特异性识别啶氧菌酯；检测灵敏度高，对啶氧菌酯的最低检测限为0.0263ng/mL；IC
50
为0.942ng/mL，线性范围为0.098～9.014ng/mL，线性范围广，可用于啶氧菌酯残留的市场监测和现场监控。
附图说明
[0030]图1为实施例1制备所得啶氧菌酯半抗原的质谱图。
[0031]图2为实施例1制备所得的啶氧菌酯半抗原(PC
‑
H)、实施例2制备所得的啶氧菌酯人工抗原(PC
‑
H
‑
OVA和PC
‑
H
‑
KLH)以及所用载体蛋白(OVA和KLH)的紫外全波长扫描结果图。
[0032]图3为基于啶氧菌酯人单克隆抗体建立的间接竞争ELISA标准曲线图。
具体实施方式
[0033]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0034]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0035]本专利技术实施例所用啶氧菌酯为上海麦克林生化科技有限公司产品，货号为117428
‑2‑
5。
[0036]实施例1一种啶氧菌酯半抗原及其制备方法
[0037]本专利技术提供了一种啶氧菌酯半抗原(PC
‑
H)，其制备方法包括如下步骤：
[0038]S1：称取518mg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种啶氧菌酯半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式如式(I)所示：2.权利要求1所述啶氧菌酯半抗原在制备啶氧菌酯人工抗原中的应用。3.一种啶氧菌酯人工抗原，其特征在于，所述人工抗原是将式(I)所示啶氧菌酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述人工抗原的结构式如式(II)所示：4.根据权利要求3所述人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。5.根据权利要求3或4所述人工抗原在制备啶氧菌酯人工抗体中的应用。6.一种啶氧菌酯单克隆抗体，其特征在于，所述抗体是以权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与血蓝蛋白的偶联物为免疫原制备得到。7.一种基于酶联免疫检测啶氧菌酯的免疫原与包被原的组合物，其特征在于，所述免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金易，陈丽丹，沈玉栋，张咏仪，王弘，徐振林，雷红涛，孙远明，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：