复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法技术

本发明专利技术提供一种复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，该方法包括：通过菌液制备分别得到金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌以及黑曲霉的菌液；提取复方薄樟桉油溶液，加入含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠

【技术实现步骤摘要】
复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法


[0001]本专利技术涉及中药检测
，特别涉及一种复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法。

技术介绍

[0002]复方薄樟桉油溶液，属于局部刺激药，其具有清凉作用，常用于缓解头痛、皮肤瘙痒、蚊叮等。
[0003]根据《中国药典》的相关规定，需要针对复方薄樟桉油溶液进行微生物限度检查，然而，目前针对复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查的方法还未被公开，在对复方薄樟桉油溶液进行微生物限度检查时，需要添加中和剂来消除复方薄樟桉油溶液中的抑菌性，确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除到可以忽略不计，保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性，从而实现有效检测出复方薄樟桉油溶液的微生物限度，然而根据《中国药典》的相关内容无法准确的检测出复方薄樟桉油溶液的微生物限度。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的是提供一种复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，以至少解决上述技术中的不足。
[0005]本专利技术提出一种复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，包括：
[0006](1)菌液制备：
[0007]分别制备金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌以及黑曲霉的菌液；
[0008](2)供试液制备：
[0009]提取第一预设容积的复方薄樟桉油溶液，加入含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液至所述试品的容积达到第二预设容积，并保温振摇及混匀，得到1：10的供试液；
[0010](3)回收测定：
[0011]分别制备需氧菌、霉菌和酵母菌的试验组、供试品对照组以及菌液对照组，分别得到各组的菌落数量，并根据所述各组的菌落数量按照以下公式分别计算出需氧菌、霉菌和酵母菌的试验组的加菌回收比值：
[0012][0013]式中，为试验组的加菌回收比值，€为试验组的平均菌落数，γ为供试品对照组的平均菌落数，为菌液对照组的平均菌落数；
[0014](4)控制菌检查：
[0015]分别制备金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的试验组和阴性对照组，随后接种于相应的培养基中，并通过观察以得到对应的结果。
[0016]进一步的，所述供试液制备的步骤中：
[0017]所述第一预设容积为10ml，所述第二预设容积为100ml，所述第一缓冲液为含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液。
[0018]进一步的，所述菌液制备的步骤中所述金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的菌液的制备步骤包括：
[0019]分别称取经33℃培养24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑3～10
‑7，以分别得到所述金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的菌液。
[0020]进一步的，所述菌液制备的步骤中所述白色念珠菌的菌液的制备步骤包括：
[0021]称取经23℃培养2天的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑2～10
‑4，以得到所述白色念珠菌的菌液。
[0022]进一步的，所述菌液制备的步骤中所述黑曲霉的菌液的制备步骤包括：
[0023]称取经23℃培养7天的黑曲霉新鲜培养物，加5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉孢子；
[0024]吸取出所述黑曲霉孢子的孢子悬液1ml，加含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，取1ml稀释后的孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑2～10
‑4，以得到所述黑曲霉的菌液。
[0025]进一步的，所述需氧菌的试验组、供试品对照组以及菌液对照组的制备步骤包括：
[0026]需氧菌的试验组：称取所述1:10的供试液1ml按薄膜过滤法，加入45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液100ml，全量通过滤膜后，利用45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液200ml冲洗进行多次冲洗，并在最后一次冲洗液中加入1ml含菌量不大于100cfu的试验菌，滤干后贴膜于胰酪大豆胨琼脂培养基，置33℃培养箱培养24～72小时，其中，所述试验菌为金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌以及黑曲霉；
[0027]需氧菌的供试品对照组：称取所述1:10的供试液，以稀释液代替菌液，同需氧菌的试验组操作，测定供试品本底菌数；
[0028]需氧菌的菌液对照组：称取稀释液替代供试液，按需氧菌的试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
[0029]进一步的，所述霉菌和酵母菌的试验组、供试品对照组以及菌液对照组的制备步骤包括：
[0030]霉菌和酵母菌的试验组：称取所述1:10的供试液10ml按薄膜过滤法，加入45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液100ml，全量通过滤膜后，利用45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液200ml冲洗进行多次冲洗，并在最后一次冲洗液中加入1ml含菌量不大于100cfu的试验菌，滤干后贴膜于沙氏葡萄糖琼脂培养基，置23℃培养箱培养24～120小时，其中，所述试验菌为金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌以及黑曲霉；
[0031]霉菌和酵母菌的供试品对照组：称取所述1:10的供试液，以稀释液代替菌液，同霉菌和酵母菌的试验组操作，测定供试品本底菌数；
[0032]霉菌和酵母菌的菌液对照组：称取稀释液替代供试液，按霉菌和酵母菌的试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。
[0033]进一步的，所述控制菌检查的步骤中，所述金黄色葡萄球菌的试验组和阴性对照组的制备步骤包括：
[0034]金黄色葡萄球菌的试验组：称取所述1:10的供试液10ml，按薄膜过滤法，加入45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液100ml，全量通过滤膜后，利用45℃的pH7.0无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液200ml冲洗进行多次冲洗，并在最后一次冲洗液中加入1ml含菌量不大于100cfu金黄色葡萄球菌，滤干后取膜加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，置33℃培养18小时，并取培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，置33℃培养18小时，观察结果；
[0035]金黄色葡萄球菌的阴性对照组：取稀释液10ml照金黄色葡萄球菌的试验组操作，以得到金黄色葡萄球菌的验证试验结果。
[0036]进一步的，所述控制菌检查的步骤中，所述铜绿假单胞菌的试验组和阴性对照组的制备步骤包括：
[0037]铜绿假单胞菌的试验组：称取所述1:10的供试液10ml，按薄膜过滤法，加入45本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，包括：(1)菌液制备：分别制备金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌以及黑曲霉的菌液；(2)供试液制备：提取第一预设容积的复方薄樟桉油溶液，加入含1％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液至所述试品的容积达到第二预设容积，并保温振摇及混匀，得到1：10的供试液；(3)回收测定：分别制备需氧菌、霉菌和酵母菌的试验组、供试品对照组以及菌液对照组，分别得到各组的菌落数量，并根据所述各组的菌落数量按照以下公式分别计算出需氧菌、霉菌和酵母菌的试验组的加菌回收比值：式中，为试验组的加菌回收比值，€为试验组的平均菌落数，γ为供试品对照组的平均菌落数，й为菌液对照组的平均菌落数；(4)控制菌检查：分别制备金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的试验组和阴性对照组，随后接种于相应的培养基中，并通过观察以得到对应的结果。2.根据权利要求1所述的复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，所述供试液制备的步骤中：所述第一预设容积为10ml，所述第二预设容积为100ml。3.根据权利要求1所述的复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，所述菌液制备的步骤中所述金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的菌液的制备步骤包括：分别称取经33℃培养24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑3～10
‑7，以分别得到所述金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的菌液。4.根据权利要求1所述的复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，所述菌液制备的步骤中所述白色念珠菌的菌液的制备步骤包括：称取经23℃培养2天的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑2～10
‑4，以得到所述白色念珠菌的菌液。5.根据权利要求1所述的复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，所述菌液制备的步骤中所述黑曲霉的菌液的制备步骤包括：称取经23℃培养7天的黑曲霉新鲜培养物，加5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉孢子；吸取出所述黑曲霉孢子的孢子悬液1ml，加含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶
液适量稀释，用标准比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，取1ml稀释后的孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液10倍稀释至10
‑2～10
‑4，以得到所述黑曲霉的菌液。6.根据权利要求1所述的复方薄樟桉油溶液的微生物限度检查方法，其特征在于，所述需氧菌的试验组、供试品对照组以及菌液对照组的制备步骤包括：需氧菌的试验组：称取所述1:10的供试液1ml按薄膜过滤法，加入45℃的pH7.0无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液100ml，全量通过滤膜后，利用45℃的pH7.0无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液200ml冲洗进行多次冲洗，并在最后一次冲洗液中加入1ml含菌量不大于100cfu的试验菌，滤干后贴膜于胰酪大豆胨琼脂培养基，置33℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂明珠，鄢雷娜，张文婷，李丹，熊蔚，
申请(专利权)人：江西省药品检验检测研究院，
类型：发明
国别省市：