一种包衣型乳杆菌的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种包衣型乳杆菌的检测方法，具体步骤如下：S1配制BPW缓冲蛋白胨水稀释液；S2配制样品匀液；S3配制样品稀释液；S4平板培养；S5平板计数。本发明专利技术采用BPW缓冲蛋白胨水稀释液替代生理盐水，既可用于样品稀释液还可用于梯度稀释，有更强的缓冲效果，能够使包衣型乳杆菌更充分的释放和分散均匀，有利于提高包衣型乳杆菌在培养基中的生长率。包衣型乳杆菌在培养基中的生长率。

【技术实现步骤摘要】
一种包衣型乳杆菌的检测方法


[0001]本专利技术属于食品、药物分析领域，具体涉及一种包衣型乳杆菌 检测方法。

技术介绍

[0002]嗜酸乳杆菌是乳酸菌家族中重要的一员，属于乳杆菌属的革兰 氏阳性杆菌，广泛存在于动物的肠道中。嗜酸乳杆菌能分泌抗生物 素类物质(嗜酸乳菌素(acidolin)、嗜酸杆菌素(acidophilin)、乳 酸菌素(laetocidon))，对肠道致病菌产生拮抗作用，具有调节肠道 菌群平衡、维护肠道健康和提高机体免疫力等功能，被认为是最理 想的替代抗生素的益生菌。
[0003]目前对于包衣型嗜酸乳杆菌的检测，虽然国家标准GB4789.35
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2016中提出了一种检测方法，使用生理盐水作为稀释液进行梯度稀 释，但是由于在梯度稀释过程中，不同的稀释液对双歧杆菌的计数 有着很大影响，所以现有GB4789.35
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2016并不能准确有效地的检测出包衣型嗜酸乳杆菌的数量。

技术实现思路

[0004]本专利技术涉的目的在于提供一种包衣型乳杆菌检测方法，采用BPW 缓冲蛋白胨水稀释液替代GB4789.35
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2016中的生理盐水，并采用两步稀释法对样品进行处理，使得其检 出结果明显优于国标检测结果，且具有良好的再现性。
[0005]为达到上述目的，本专利技术所采取的技术方案是:
[0006]一种包衣型乳杆菌的检测方法，具体步骤如下：
[0007]S1配制BPW缓冲蛋白胨水稀释液
[0008]称取一定质量的BPW缓冲蛋白胨水，并将其加入1000ml纯化水中 ，在121℃下高压灭菌15min后得到BPW缓冲蛋白胨水稀释液，备用；
[0009]S2配制样品匀液
[0010]称取一定量的样品与BPW缓冲蛋白胨水稀释液置于无菌均质袋中 ，并放入拍击式均质器中均质5
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6min，混匀，制成质量比为1:100的样品匀液；
[0011]S3配制样品稀释液
[0012]移取1.0ml的样品匀液置于含有9.0mlBPW缓冲蛋白胨水稀释液的 稀释管中，旋涡彻底混匀，依次类推作10倍递增稀释，直至最后的 稀释度满足每毫升获得30CFU
‑
300CFU的菌落，并取最后2
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3个稀释度用于计数；
[0013]S4平板培养
[0014]分别从最后2～3个稀释管中取预设量的样品稀释液置于无菌培 养皿中，然后分别倒入冷却至45℃的培养基15～20ml，彻底混匀， 待培养基凝固后，将平板翻转，进行厌氧培养；
[0015]S5平板计数
[0016]选取步骤S4培养完成后菌落数在30CFU至300CFU之间的平板进行 计数。
[0017]优选地，所述步骤S1中，所述BPW缓冲蛋白胨水原料组分，按质 量份数计包括：
[0018]蛋白胨10份，氯化钠5份，十二水合磷酸氢二钠9份和磷酸二氢 钾1.5份。
[0019]优选地，所述步骤S1中，灭菌后的BPW缓冲蛋白胨水稀释液在25 ℃下pH为7.2
±
0.2。
[0020]优选地，所述步骤S1中，称取BPW缓冲蛋白胨水质量为20.0g。
[0021]优选地，所述步骤S2中，拍击式均质器的拍击速度为150
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200rpm。
[0022]优选地，所述步骤S2中，称取样品质量1.0g，BPW缓冲蛋白胨水 稀释液99.0g。
[0023]优选地，所述步骤S4中，每个稀释度准备有2个无菌培养皿进行 同步厌氧培养，作为平行试验。
[0024]优选地，所述步骤S4中，还包括仅含有相同量的培养基和仅含 有相同预设量的稀释液的平板作为阴性对照。
[0025]优选地，所述步骤S4中，每个培养皿中的样品稀释液为1.0ml， 厌氧培养条件为：在37℃
±
1℃下厌氧培养48h～72h。
[0026]优选地，所述步骤S4中，平板培养选用的培养基为MRS琼脂培养 基。
[0027]有益效果：本专利技术提供一种包衣型乳杆菌检测方法，具有如下 优点：
[0028](1)本专利技术采用BPW缓冲蛋白胨水稀释液替代生理盐水，既可 用于样品稀释液还可用于梯度稀释，有更强的缓冲效果，能够使包
[0029](2)本专利技术通过两步稀释法不仅能够准确检测包衣型乳杆菌的 数量，且具有良好的再现性。
具体实施方式
[0030]以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来 限制本专利技术的保护范围。
[0031]一种包衣乳杆菌的检测方法
[0032]一、设备仪器
[0033]除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备及玻璃仪器 如表1所示：
[0034][0035]二、干粉培养基和试剂
[0036]培养基和试剂名称批号厂家胰蛋白胨培养基620046OXOIDBPW缓冲蛋白胨水620029青岛海博生物技术有限公司MRS琼脂培养基620055青岛海博生物技术有限公司半胱氨酸盐酸盐820045国药集团化学试剂有限公司KH2PO4818002上海展云化工有限公司Na2HPO4·
12H2O118003上海展云化工有限公司吐温80817019上海展云化工有限公司
[0037]三、培养基的制备
[0038][0039]BPW缓冲蛋白胨水稀释液的配制方法：称取20.0g的BPW缓冲蛋白 胨水，并将其加入1000ml纯化水中，在121℃下高压(0.1mpa)灭菌 15min后得到BPW缓冲蛋白胨水稀释液，备用；
[0040]胰蛋白胨盐溶液的配制方法：称取胰蛋白胨1.0g，氯化钠8.5g ，加纯化水1000ml，
混匀，分装，121℃高压(0.1mpa)灭菌15min 后得到胰蛋白胨盐溶液，备用，灭菌后胰蛋白胨盐溶液在25℃下pH 为7.0
±
0.2。
[0041]CYS缓冲液的配制方法：称取半胱氨酸盐酸盐0.5g；磷酸二氢钾 4.5g；磷酸氢二钠(含12个结晶水)6g；吐温80:0.5ml；加纯化水 溶解后稀释至1000ml，灭菌前用0.1MNaOH调节pH至6.8
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7.0，121℃高压(0.1mpa)灭菌15min后得到胰蛋白胨盐溶液，备用 。
[0042]四、操作步骤
[0043]4.1样品制备，配置样品匀液
[0044]称取1.0g样品与99.0g稀释液置于无菌均质袋中，并放入拍击式 均质器中均质5
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6min，拍打频率为180r/min，混匀后即得质量比为1:100的样品匀液 ；
[0045]4.2配制样品稀释液
[0046]移取1.0ml的样品匀液置于含有9.0ml稀释液的稀释管中，旋涡 彻底混匀，依次类推作10倍递增稀释，直至最后的稀释度每毫升获 得30CFU
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300CFU的菌落，并取最后2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包衣型乳杆菌的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：S1配制BPW缓冲蛋白胨水稀释液称取一定质量的BPW缓冲蛋白胨水，并将其加入1000ml纯化水中，在121℃下高压灭菌15min后得到BPW缓冲蛋白胨水稀释液，备用；S2配制样品匀液称取一定量的样品与BPW缓冲蛋白胨水稀释液置于无菌均质袋中，并放入拍击式均质器中均质5
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6min，混匀，制成质量比为1:100的样品匀液；S3配制样品稀释液移取1.0ml的样品匀液置于含有9.0mlBPW缓冲蛋白胨水稀释液的稀释管中，旋涡彻底混匀，依次类推作10倍递增稀释，直至最后的稀释度满足每毫升获得30CFU
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300CFU的菌落，并取最后2
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3个稀释度用于计数；S4平板培养分别从最后2～3个稀释管中取预设量的样品稀释液置于无菌培养皿中，然后分别倒入冷却至45℃的培养基15～20ml，彻底混匀，待培养基凝固后，将平板翻转，进行厌氧培养；S5平板计数选取步骤S4培养完成后菌落数在30CFU至300CFU之间的平板进行计数。2.根据权利要求1所述包衣型乳杆菌的检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述BPW缓冲蛋白胨水原料组分，按质量份数计包括：蛋白胨10份，氯化钠5份，十二水合磷酸氢二钠9份和磷酸二氢钾1.5份。3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，蒋次军，戴英英，
申请(专利权)人：技源健康科技江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：