铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒。所述方法包括如下步骤：S1、将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于分散系中混合，得到混合分散系；S2、将步骤S1所述混合分散系置于磁场内，通过磁分离得到磁性物质；S3、将步骤S2所述磁性物质与载有荧光分子的明胶酶敏感粒子置于无菌液体培养基中培养，得到培养液；S4、将步骤S3所述培养液离心，得到上清液；S5、测定步骤S4所述上清液的荧光强度，根据荧光强度判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。本发明专利技术提供的检测方法基于半乳糖与铜绿假单胞菌表面的特异性相互作用以及铜绿假单胞菌代谢明胶酶的特征，实现了铜绿假单胞菌的快速检测。检测。检测。

【技术实现步骤摘要】
铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，尤其涉及一种铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]铜绿假单胞菌是自然环境中常见的条件致病菌，也是医院内的主要病原菌之一，可以引起创面、呼吸道和泌尿系统的感染。目前的食品和化妆品的质量检测标准中都明确要求样品中不得检出铜绿假单胞菌。
[0003]现有对铜绿假单胞菌的检测方法较为复杂。以GB 8538
‑
2022《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》为例，目前国家标准中检测铜绿假单胞菌的过程为：使用细菌过滤膜过滤250mL水样；将滤膜贴在固体培养基表面，于专业实验室恒温环境中培养20
‑
48h；挑选可疑菌落，分别计数，并进一步通过绿脓菌素试验、产氨试验、42℃生长试验、氧化酶试验和荧光试验，鉴定是否存在铜绿假单胞菌。
[0004]目前的铜绿假单胞菌检测国标方法，准确率高，特异性强。但也存在检测时间长的问题，加重了食品行业的仓储成本，并且难以适应重大社会活动食品安全保障中的时效性要求。

技术实现思路

[0005]有鉴于
技术介绍
中存在的技术问题，本专利技术提供了一种铜绿假单胞菌检测方法。所述方法基于半乳糖与铜绿假单胞菌表面的特异性相互作用以及铜绿假单胞菌代谢明胶酶的特征，实现了铜绿假单胞菌的快速检测。
[0006]本专利技术提供了一种非诊断目的的铜绿假单胞菌检测方法，包括如下步骤：
[0007]S1、将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于分散系中混合，得到混合分散系；
[0008]S2、将步骤S1所述混合分散系置于磁场内，通过磁分离得到磁性物质；
[0009]S3、将步骤S2所述磁性物质与载有荧光分子的明胶酶敏感粒子置于无菌液体培养基中培养，得到培养液；
[0010]S4、将步骤S3所述培养液离心，得到上清液；
[0011]S5、测定步骤S4所述上清液的荧光强度，根据荧光强度判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。
[0012]优选的，步骤S1所述半乳糖改性磁性纳米粒子在所述混合分散系中的浓度为0.08
‑
0.15mg/mL。
[0013]优选的，步骤S2所述磁场的强度为0.4
‑
0.8特斯拉。
[0014]优选的，步骤S2得到磁性物质后，对所述磁性物质进行无菌水洗涤。
[0015]优选的，步骤S3所述载有荧光分子的明胶酶敏感粒子在所述培养液中的浓度为0.35
‑
0.5mg/mL。
[0016]优选的，步骤S3所述无菌液体培养基包括胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl和水。
[0017]优选的，步骤S3所述培养的温度为35
‑
37℃，所述培养的时间为5
‑
10h。
[0018]优选的，步骤S4所述离心的参数为4000
‑
6000转/min，2
‑
4min。
[0019]优选的，步骤S5所述判断的标准包括：
[0020]当待测样品组荧光强度≥阴性对照组荧光强度的2倍，判定待测样品中含有铜绿假单胞菌；
[0021]当待测样品组荧光强度＜阴性对照组荧光强度的2倍，判定待测样品中不含有铜绿假单胞菌。
[0022]优选的，所述检测方法包括如下任意一种应用：
[0023](1)步骤S1所述待测样品为饮食产品；用于检测饮食产品中是否含有铜绿假单胞菌；
[0024](2)步骤S1所述待测样品为化妆品；用于检测化妆品中是否含有铜绿假单胞菌；
[0025](3)步骤S1所述待测样品为体外环境采样；用于检测体外环境中是否含有铜绿假单胞菌。
[0026]本专利技术还提供了一种用于铜绿假单胞菌检测的试剂盒，包括所述半乳糖改性磁性纳米粒子、所述载有荧光分子的明胶酶敏感粒子和所述无菌液体培养基。
[0027]有益效果：
[0028]本专利技术提供了一种铜绿假单胞菌检测方法及试剂盒。所述检测方法包括如下步骤：S1、将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于分散系中混合，得到混合分散系；S2、将步骤S1所述混合分散系置于磁场内，通过磁分离得到磁性物质；S3、将步骤S2所述磁性物质与载有荧光分子的明胶酶敏感粒子置于无菌液体培养基中培养，得到培养液；S4、将步骤S3所述培养液离心，得到上清液；S5、测定步骤S4所述上清液的荧光强度，根据荧光强度判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。本专利技术提供的检测方法基于半乳糖与铜绿假单胞菌表面的特异性相互作用，对待测样品中的铜绿假单胞菌进行精准识别和高效磁分离；又基于铜绿假单胞菌代谢明胶酶的特征，通过在无菌培液体养基中添加载有荧光分子的明胶酶敏感粒子，进而实现对铜绿假单胞菌的快速检测。本专利技术提供的检测方法可以将传统铜绿假单胞菌的检测时间由数天缩短至5
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10h，灵敏度高，误检率低。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图进行说明。
[0030]图1是本专利技术实施例1所述PLAMA的制备反应原理图；
[0031]图2是本专利技术实施例2所述铜绿假单胞菌的检测原理图；
[0032]图3是本专利技术实施例2中铜绿假单胞菌检测实验的结果图。
具体实施方式
[0033]本专利技术提供了一种非诊断目的的铜绿假单胞菌检测方法，所述方法包括步骤S1：将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于分散系中混合，得到混合分散系。
[0034]在本专利技术中，步骤S1所述待测样品包括固形物样品或者液体样品；本专利技术对所述待测样品的添加量不作特别限定；当所述待测样品为固形物样品时，本专利技术优选使用400
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800目的滤网过滤固体残渣；本专利技术对所述待测样品的来源不作特别限定，任何非诊断目的的铜绿假单胞菌待测样品均可。在本专利技术更具体的实施方式中，所述待测样品可选自饮食产品、化妆品和体外环境采样中的任意一种或者多种。
[0035]在本专利技术中，步骤S1所述半乳糖改性磁性纳米粒子在所述混合分散系中的质量含量优选为0.08
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0.15mg/mL，更优选为0.1mg/mL。本专利技术对所述半乳糖改性磁性纳米粒子的具体来源不作特别限定，具有磁性且在表面接枝有半乳糖的纳米粒子均可。在本专利技术更具体的实施方式中，所述半乳糖改性磁性纳米粒子优选由金包覆的磁性纳米粒子、聚2
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乳糖酰胺基甲基丙烯酸乙酯(PLAMA)和硼氢化钠反应制备得到。所述反应的原理为：硼氢化钠将PLAMA端位的硫酯键还原为巯基，然后巯基和纳米粒子表面的金配位，实现半乳糖聚合物在纳米粒子表面的接枝。
[0036]在本专利技术中，所述分散系优选为水。本专利技术优选将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于水中混合，得到混合液。在本专利技术中，所述混合的温度优选为25
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37℃；所述混合的方式优选为摇振混合；所述摇振混合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.非诊断目的的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将待测样品与半乳糖改性磁性纳米粒子置于分散系中混合，得到混合分散系；S2、将步骤S1所述混合分散系置于磁场内，通过磁分离得到磁性物质；S3、将步骤S2所述磁性物质与载有荧光分子的明胶酶敏感粒子置于无菌液体培养基中培养，得到培养液；S4、将步骤S3所述培养液离心，得到上清液；S5、测定步骤S4所述上清液的荧光强度，根据荧光强度判断待测样品中是否含有铜绿假单胞菌。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S1所述半乳糖改性磁性纳米粒子在所述混合分散系中的浓度为0.08
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0.15mg/mL。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S2所述磁场的强度为0.4
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0.8特斯拉。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S3所述载有荧光分子的明胶酶敏感粒子在所述培养液中的浓度为0.35
‑
0.5mg/mL。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S3所述无菌液体培养基包括胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl和水。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭青枝，鲁振坦，张莉，郭银利，王鸣秋，林津，余婷婷，李诗瑶，
申请(专利权)人：湖北省食品质量安全监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：