一种用于鲈鱼抗菌肽wb-moronecidin诱导表达的培养基配方组成比例

本发明专利技术提供了一种用于鲈鱼抗菌肽wb

【技术实现步骤摘要】
一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方


[0001]本专利技术涉及基因工程生物
，具体地，涉及一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方。

技术介绍

[0002]鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin由28个氨基酸序列组成，鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin具有广谱抗菌活性，目前研究发现其对维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）、单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）两种革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌效果。
[0003]毕赤酵母表达外源蛋白过程中常用的培养基是BSM通用培养基，但BSM通用培养基存在因成分不能完全满足含有目标蛋白基因质粒的毕赤酵母的生长需求，导致只使用通用BSM培养基表达的效果天壤之别。申请人在鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin基因工程表达制备实验中发现，单以BSM为通用基础培养基高密度培养含有鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin质粒的毕赤酵母时重组蛋白表达水平较低且生物活性也较低。因此亟需通过优化培养基成分提高鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin的诱导表达水平及生物活性。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方。
[0005]本专利技术的目的是通过以下方案实现的：一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方，其特征在于：所述培养基配方是在BSM培养基基础上添加了氨基酸，旨在提高鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin的诱导表达水平及生物活性。
[0006]所述培养基的配比如下：配置1L该培养基，加入：葡萄糖20g；二水硫酸钙0.465g；硫酸钾9g；七水硫酸镁7.45g；氢氧化钾2.065g；85%磷酸13.35mL；PTM1 4mL；氨基酸10g用去离子水溶解上述培养基组分，定容至终体积为1L。
[0007]优选的，所述氨基酸为赖氨酸、苯丙氨酸或赖氨酸与苯丙氨酸组合氨基酸。
[0008]本专利技术所述的一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方的积
极进步效果在于：本专利技术的培养基配方可确保重组毕赤酵母良好生长，生长18h就进入对数生长期，即可进行诱导表达；同时在诱导阶段显著提高了重组蛋白的表达水平及重组蛋白的表达量。本专利技术的培养基明显提高了鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin的抑菌活性。
[0009]具体实施方式：下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。
[0010]本专利技术提供一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方，为鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin大规模发酵提供基础。
[0011]实施例1：培养基的配制方法（1）.试剂与材料葡萄糖购于临沂市兰山区丰源食品添加剂经营部；赖氨酸、苯丙氨酸购于广州康荻尔生物科技有限公司；二水硫酸钙、硫酸、五水硫酸铜、硼酸、胰蛋白胨、酵母浸膏、氢氧化钠、硫酸钾、硫酸锰、二水合钼酸钠、氨水、氯化钠、十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钠购于国药集团；七水硫酸镁、氢氧化钾、85%磷酸、七水硫酸铁购于天津市福晨化学试剂厂；碘化钾购于西胧科学股份有限公司；六水氯化钴购于无锡市亚泰联合化工有限公司；生物素购于生工生物工程（上海）股份有限公司；氯化锌购于无锡市亚泰联合化工有限公司；一水硫酸锰购于江苏强盛功能化学股份有限公司；NB液体培养基指营养肉汤培养基，购自杭州微生物试剂有限公司；（2）.配制培养基
①
.配制YPD基础培养基：a：称取胰蛋白胨6g和酵母浸膏3g，加入270mL纯水溶解，用1M氢氧化钠溶液调整pH值至6.0，然后121℃高温高压灭菌 20min；b：称取葡萄糖20g，加入60mL纯水溶解后定容至100mL，108℃高温高压灭菌 30min，得到20%（W/V）质量浓度葡萄糖溶液；c：在步骤a中所配制的溶液，缓慢加入30mL的步骤b的20%（W/V）质量浓度葡萄糖溶液，得到基础培养基YPD。
[0012]②
.配制BSM培养基：a：称取20g葡萄糖，0.465g二水硫酸钙，9g硫酸钾，7.45g七水硫酸镁，2.065g氢氧化钾，加入800 mL去离子水溶解，加入13.35mL 85%磷酸，定容至1000 mL，121℃高压灭菌 20min；b：称取3g上述赖氨酸、苯丙氨酸或赖氨酸与苯丙氨酸按比例1:1配合的组合氨基酸，加入300 mL步骤（1）所配制的溶液中，65℃加热使其溶解，用氨水调整pH值到5.0，过0.22μm滤膜，待用；c：配制PTM1溶液，称取五水硫酸铜6g、碘化钾0.08g、硫酸锰3g、二水合钼酸钠0.2g、硼酸0.02g、六水氯化钴0.5g、氯化锌20g、七水硫酸铁65g、生物素0.2g、浓硫酸5mL，加入800 mL纯水溶解，定容至1000 mL，得到微量盐溶液PTM1；
d：取PTM11.2 mL加入到步骤b所配制待用的溶液中，得到BSM培养基。
[0013]实施例2：鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin的表达实验（1）含有鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin重组表达质粒的毕赤酵母的生长期扩增a：挑取含有表达质粒的毕赤酵母菌单菌落，接种于20 mLYPD培养基中，29℃，220rpm培养16h；b：按1%的比例将过夜培养的菌液接种于100 mL YPD培养基中，29℃，220rpm扩大培养16h；c：按10%的比例将二级种子液接种于300mL实施例2中配制的BSM培养基中，29℃，220rpm培养66h。
[0014]具体添加3种氨基酸对毕赤酵母菌生长速度影响如表1所示：表1：添加3种不同氨基酸对毕赤酵母菌生长速度影响实验数据由上述实验结果可以得知，生长阶段添加赖氨酸能够提高酵母菌生长速度，添加量为10g/L，pH＝5.0，接种10％，29℃培养18h即可。
[0015]（2）含有鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin重组表达质粒的毕赤酵母的诱导期表达a：将上述3种添加不同氨基酸的培养基分别添加甲醇、山梨醇，对重组酵母开始诱导表达。
[0016]（3）表达液的收集及透析a：称取2.922g氯化钠；16.69g 十二水磷酸氢二钠；0.5034g 磷酸二氢钠，加超纯水定容至1L，得到透析缓冲液；b：收集步骤（1）中3种不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鲈鱼抗菌肽wb
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moronecidin诱导表达的培养基配方，所述培养基的配比如下：配置1L该培养基，加入：葡萄糖20g；二水硫酸钙0.465g；硫酸钾9g；七水硫酸镁7....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘杰，卢玉平，朱新鹏，沈李元，李雯倩，钱晓明，
申请(专利权)人：江苏亢钧生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：