一种单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术利用肿瘤细胞免疫小鼠，通过杂交瘤融合技术筛选和制备了一株单克隆抗体，该单克隆抗体对肿瘤细胞的生长和迁移具有明显的抑制作用，在动物肿瘤实验中有显著的抗肿瘤活性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及抗体
，更具体地说，它涉及一种单克隆抗体及其用途。

技术介绍

[0002]肿瘤的发生是机体在各种因素作用下，局部组织的细胞在基因水平上，失去对其生长的正常调控，导致细胞的异常增生而形成的新生物。肿瘤是基因疾病，其生物学基础是基因的异常，致病因素是体细胞基因突变导致正常基因缺失，基因表达紊乱，从而影响细胞的生物学活性与遗传活性，形成与正常细胞在形态，代谢与功能上均有所不同的肿瘤细胞。
[0003]靶向药物特异性高、毒副作用较小，对多种恶性肿瘤具有显著疗效，近十年来已成为抗肿瘤新药的主流。1997年FDA批准了第一个靶向肿瘤药物：利妥昔单抗，开启了肿瘤治疗的新时代；1997年至2005年间有少数靶向小分子和大分子单抗上市，靶向药物正在快速发展中；2005至2017年间FDA批准的抗肿瘤药物中，靶向药物所占比例逐年升高，2015年批准的14个抗肿瘤药物中，靶向药物达到12个，2016、2017年批准的全部都是靶向药物，而抗体靶向药物肿瘤治疗是最具发展潜力的方式之一。
[0004]单克隆抗体(mAb)由B细胞产生并特异性靶向抗原。和Milstein在1975年引入的杂交瘤技术使大量获得纯mAb成为可能，极大地增强了其基础研究和临床应用潜力。其他科技进步也使mAb成功应用于临床。在全球范围内，至少有570种治疗性mAb已被商业公司进行临床试验研究，其中79种治疗性mAb已获得美国食品和药物管理局(US FDA)的批准，目前已上市，包括用于治疗癌症的30种抗体。
[0005]虽然有大量的肿瘤抗体药物被研发成功和临床应用，然后目前还有大量的肿瘤患者对现有的抗体药物不响应。

技术实现思路

[0006]在一个方面，本专利技术提供了一种单克隆抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，CDR
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L1与选自SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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L2与选自SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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L3与选自SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；
[0007]所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，CDR
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H1与选自SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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H2与选自SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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H3与选自SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。
[0008]在一些实施方案中，所述轻链可变区还包括先导序列，所述先导序列与选自SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；
[0009]所述重链可变区还包括先导序列，所述先导序列与选自SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。
[0010]在一些实施方案中，其包含选自SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性的轻链可变区和选自SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性的重链可变区。
[0011]本专利技术还提供了编码上述单克隆抗体的核酸分子。
[0012]在另一个方面，本专利技术还提供了一种多特异性抗体，其包含上述所述的单克隆抗体
[0013]在另一个方面，本专利技术还提供了一种载体，其包含编码上述所述的单克隆抗体或多特异性抗体的核酸分子。
[0014]在另一个方面，本专利技术还提供了一种宿主细胞，其表达上述所述的单克隆抗体。
[0015]在另一个方面，本专利技术还提供了一种药物组合物，包含上述所述的单克隆抗体和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0016]在另一个方面，本专利技术还提供了一种联合用药物，包含上述所述的单克隆抗体、抗癌药物和一种或多种药学上可接受的赋形剂；所述抗癌药物包括吉非替尼和紫杉醇。
[0017]在另一个方面，上述所述的单克隆抗体、上述所述的多特异性抗体、上述所述的嵌合抗原受体、上述所述的联合用药物在制备用于治疗和/或预防和/或诊断肿瘤疾病的药物中的用途。
[0018]综上所述，本专利技术提供了一种利用肿瘤细胞免疫小鼠，通过杂交瘤融合技术筛选和制备了一株单克隆抗体，该单克隆抗体对肿瘤细胞的生长和迁移具有明显的抑制作用，在动物肿瘤实验中有显著的抗肿瘤活性。
附图说明
[0019]图1为4A7抗体SDS
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PAGE还原电泳检测结果；
[0020]图2为4A7抗体抑制HRGβ1分子引起的肿瘤细胞迁移；
[0021]图3为4A7抗体和吉非替尼的组合有效抑制三阴乳腺癌细胞的生长；
[0022]图4为4A7抗体和紫杉醇的组合有效抑制三阴乳腺癌细胞的生长；
[0023]图5为4A7抗体和紫杉醇的组合诱导细胞凋亡；
[0024]图6为4A7抗体在小鼠体内的抗肿瘤效果。
具体实施方式
[0025]除非另有说明，否则本文中所使用的所有科学技术术语的含义与本专利技术所属领域的普通技术人员通常所了解的相同。
[0026]通常，完整抗体包括通过二硫键连接在一起的两条重链和两条轻链，每条轻链通过二硫键被连至各自的重链，呈“Y”形结构。每条重链包含重链可变区(VH)和重链恒定区，其中重链可变区包含三个互补决定区(CDR)：CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，重链恒定区包含三个恒定结构域：CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区，其中轻链可变区包含三个CDR：CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，轻链恒定区包含一个恒定结构域CL。在重链/轻链可变区中，CDR被更保守的框架区(FR)隔开。重链/轻链的可变区负责与抗原的识别和结合，恒定区则可以介导抗体与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分。
[0027]术语“互补决定区”或“CDR”是本领域技术人员熟知的且可互换使用，是指抗体可变区内非连续的氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。术语“框架区”或“FR”也是本领域已知的，是指抗体可变区内的非CDR部分，其序列通常比较保守。
[0028]可以使用许多本领域熟知的编号方案容易地确定给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界，这些方案包括：Kabat等人(1991),“Sequences ofProteins of Immunological Interest,”第5版Public Health本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其包含轻链可变区和重链可变区，其特征在于，所述轻链可变区包含CDR
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L1、CDR
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L2和CDR
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L3，CDR
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L1与选自SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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L2与选自SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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L3与选自SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性；所述重链可变区包含CDR
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H1、CDR
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H2和CDR
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H3，CDR
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H1与选自SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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H2与选自SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，CDR
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H3与选自SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。2.权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区还包括先导序列，所述先导序列与选自SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：周俊东，沈飞，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：