靶向禽流感病毒M2的多肽、流感疫苗及应用制造技术

本发明专利技术涉及流感疫苗技术领域，尤其涉及靶向禽流感病毒M2的多肽、流感疫苗及应用。该抗原肽具有如SEQ ID NO.1～5任一所示的氨基酸序列。该类抗原肽能够有效地在体内产生免疫反应，具有较强的抗原性，能够有效地诱导机体产生针对禽流感病毒M2特异性抗体和T细胞增殖应答，从而为机体提供的针对禽流感病毒M2引起相关疾病的免疫保护，提示该多肽可以作为一种抗原用于制备流感疫苗，具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
靶向禽流感病毒M2的多肽、流感疫苗及应用


[0001]本专利技术涉及流感疫苗
，尤其涉及靶向禽流感病毒M2的多肽、流感疫苗及应用。

技术介绍

[0002]禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的各种亚型引起的禽类疾病综合征，几乎所有的野生及家养禽类都可感染。根据病毒毒力的不同，可将其分为高致病性禽流感(Highly Pathogenic Avian Influenza,HPAI)、低致病性禽流感(Low Pathogenic Avian Influenza,LPAI)和非致病性禽流感三大类。根据病毒粒子表面的血凝素(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA，可将其分为17个HA亚型和9个NA亚型。其中感染人的主要是H5N1、H9N2和H7N7亚型，感染禽类的主要是H5N1和H9N2亚型，感染猪的主要是H1N1和H3N2亚型。
[0003]其中，HA是流感病毒表面主要的保护性抗原之一，能诱导机体产生中和抗体，含有多个TB细胞表位，HA2位于HA的C端，含有高度保守的融合序列，基于HA2保守区域的通用疫苗研究一直是一个热点。基质蛋白2(matrix protein 2,M2)是流感病毒表面的跨膜蛋白，由97个氨基酸组成，膜蛋白M2的氨基酸序列高度保守，以M2作为候选抗原制备成流感疫苗具有一定广谱性保护功效，然而其在特异性和产生抗体水平上仍有待改善。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术提供了一类抗原肽，能够靶向禽流感病毒M2的抗原肽、流感疫苗及应用，该类抗原肽能够有效地在体内产生免疫反应，具有较强的抗原性，能够有效地诱导机体产生针对禽流感病毒M2特异性抗体和T细胞增殖应答，从而为机体提供的针对禽流感病毒M2引起相关疾病的免疫保护，提示该多肽可以作为一种抗原用于制备流感疫苗，具有广泛的应用前景。
[0005]第一方面，本专利技术实施例公开了一种抗原肽，具有如SEQ ID NO.1～5所示的氨基酸序列。
[0006]第二方面，本专利技术实施例公开了一种抗原肽的制备方法，所述抗原肽具有如SEQ ID NO.1～5所示的氨基酸序列，所述制备方法包括：
[0007]分别合成第一肽段和第二肽段，所述第一肽段具有如SEQ ID NO.7～9任一所示的氨基酸序列，所述第二肽段具有如SEQ ID NO.10～24所示任一的氨基酸序列；
[0008]将所述第一肽段和所述第二肽段经过TAEC连接反应得到具有全长序列的抗原肽。
[0009]在本专利技术实施例中，第一肽段的合成方法包括：将所述第一肽段的序列以Fmoc
‑
蛋氨酸作为起点，采用固相合成方法，在偶连试剂的作用下依序连接，合成多肽酰肼衍生物Fmoc
‑
第一肽段
‑
NH
‑
NH2。
[0010]在本专利技术实施例中，第二肽段的合成方法包括：获得第二肽段的氮端第1个具有Boc保护基团的氨基酸，将其与氯甲酸乙酯反应形成活性中间体，然后顺序与第二肽段中的
氨基酸缩合反应，得到合成具有Boc保护基团的二肽；将Boc保护基团的二肽作为原料，重复上述步骤直至合成具有全长序列的第二肽段，再进行脱除Boc反应，得到第二肽段。
[0011]在本专利技术实施例中，所述第一肽段具有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，所述第二肽段具有如SEQ ID NO.10～14所示任一的氨基酸序列。
[0012]在本专利技术实施例中，所述第一肽段具有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，所述第二肽段具有如SEQ ID NO.15～19所示任一的氨基酸序列。
[0013]在本专利技术实施例中，所述第一肽段具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，所述第二肽段具有如SEQ ID NO.20～24所示任一的氨基酸序列。
[0014]第三方面，本专利技术实施例公开了一种嵌合体，其包括第一方面的抗原肽以及与所述抗原肽偶联的载体蛋白。
[0015]第四方面，本专利技术实施例公开了一种多肽疫苗，其包括第一方面所述的抗原肽与用于提高抗原肽稳定性和免疫原性的载体，所述载体包括载体蛋白和疫苗佐剂，所述载体蛋白用于与所述抗原体偶联形成嵌合体，所述疫苗佐剂用于对所述嵌合体进行吸附形成稳定的纳米悬浮液。
[0016]第五方面，本专利技术实施例公开了第一方面所述的抗原肽、第二方面所述的制备方法制得的抗原肽在制备流感疫苗中的应用。
[0017]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果之一：
[0018]本专利技术实施例公开了一类抗原肽能够有效地在体内产生免疫反应，具有较强的抗原性，能够有效地诱导机体产生针对禽流感病毒M2特异性抗体和T细胞增殖应答，从而为机体提供的针对禽流感病毒M2引起相关疾病的免疫保护，提示该多肽可以作为一种抗原用于制备流感疫苗，具有广泛的应用前景。
[0019]进一步将其与载体蛋白偶联成为嵌合体和多肽疫苗，并将对应的抗原肽、嵌合体和多肽疫苗进行体外分析发现，以实施例提供的抗原肽制备的嵌合体，以实施例提供的抗原肽制备的多肽疫苗分别作为供试品具有更强的抗原性。通过体内试验发现，以实施例提供的抗原肽制备的嵌合体，以实施例提供的抗原肽制备的多肽疫苗能够在小鼠体内高水平的特异性抗体，并未其提供进一步病毒攻击的保护，降低死亡率，为其发展成为流感疫苗提供坚实的研究支持。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例1提供的抗原肽的第一肽段的HPLC图(左图)和质谱图(右图)。
[0021]图2为本专利技术实施例1提供的抗原肽的第二肽段的HPLC图(左图)和质谱图(右图)。
[0022]图3为本专利技术实施例1提供的抗原肽全长肽段的HPLC图(左图)和质谱图(右图)。
[0023]图4为本专利技术实施例1提供的抗原肽(泳道1)、嵌合体(泳道2)和多肽疫苗(泳道3)，以及对比例1提供的抗原肽(泳道4)、嵌合体(泳道5)和多肽疫苗(泳道6)分别与M2抗体特异性结合的Western blotting结果图，35KD左右为结合的目的条带。
[0024]图5为本专利技术提供的体内实验中，对照组(A)、抗原肽组实施例1(B)、嵌合体肽组实施例1(C)和多肽疫苗组实施例1(D)小鼠肺脏HE染色图。
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术中未详细单独说明的试剂均为常规试剂，均可从商业途径获得；未详细特别说明的方法均为常规实验方法，可从现有技术中获知。
[0026]需要说明的是，本专利技术的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序，也不对其后的技术特征起到实质的限定作用。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗原肽，其特征在于，所述抗原肽靶向禽流感病毒M2，所述抗原肽具有如SEQ ID NO.1～5任一所示的氨基酸序列。2.一种抗原肽的制备方法，其特征在于，所述抗原肽具有如SEQ ID NO.1～5任一所示的氨基酸序列，所述制备方法包括：分别合成第一肽段和第二肽段，所述第一肽段具有如SEQ ID NO.7～9任一所示的氨基酸序列，所述第二肽段具有如SEQ ID NO.10～24所示任一的氨基酸序列；将所述第一肽段和所述第二肽段经过TAEC连接反应得到具有全长序列的抗原肽。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，第一肽段的合成方法包括：将所述第一肽段的序列以Fmoc
‑
蛋氨酸作为起点，采用固相合成方法，在偶连试剂的作用下依序连接，合成多肽酰肼衍生物Fmoc
‑
第一肽段
‑
NH
‑
NH2。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第二肽段的合成方法包括：获得所述第二肽段的氮端第1个具有Boc保护基团的氨基酸，将其与氯甲酸乙酯反应形成活性中间体，然后顺序与第二肽段中的氨基酸缩合反应，得到合成具有Boc保护基团的二肽；将Boc保护基团的二肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：付丽丽，王海龙，刘晓满，王雅君，张岩，李伯彬，
申请(专利权)人：北京华诺泰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：